第４５卷第５期 ２０１５年１Ｏ月 工业微生物 Ｖｏ１．４５ Ｎｏ．５ Ｏｃｔ．２０１５ Ｉｎｄｕｓｔｉ￣Ｍｉｃｒｏｂｉｆｏｌｏｇｙ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１—６６７８．２０１５．０５．００５ 紫外诱变选育恩拉霉素高产菌株 王建玲， 许铭玉， 石天歌， 安兴娟， 张紫音， 程 思， 姬阿美， 马翠萍， 高 爽， 王应东， 张会图 天津科技大学生物工程学院，天津３００４５７ 摘要：本研究采用紫外诱变育种技术对一株产恩拉霉素抗真茵链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｆｕｎｇｉｃｉｄｉｃｕｓ） Ｆ１１Ｏ进行了诱变处理，经链霉素抗性、利福霉素Ｂ抗性以及双重抗性筛选，共获得了１３２株抗生素 抗性突变株，其中２６株突变茵株的恩拉霉素产量与出发茵株相比均有明显提高。摇瓶发酵条件 下，突变株ＳＲ９３的恩拉霉素产量最高可达２ ４００ ｔ￣ｇ／ｍＬ，与出发茵株相比提高了３８％。传代结果 表明：该突变株产素水平稳定，因此具备较好的开发及工业应用价值。 关键词：紫外诱变；恩拉霉素；抗生素抗性筛选 恩拉霉素（Ｅｎｒａｍｙｃｉｎ）又名持久霉素，是由土壤 中的放线菌发酵产生的一种非核糖体多肽（ＮＲＰ） 类抗生素…，对革兰氏阳性菌特别是禽畜肠道内有 害梭状芽孢杆菌具有较强的抑制作用 ；饲料中添 加适量的恩拉霉素不仅可以预防常见的动物消化道 疾病，还可改善动物肠道内的群落平衡，有利于饲料 营养成份的消化吸收，促进动物增重 ｊ。同时，恩 拉霉素具有广谱、低毒、低残留、不易产生耐药性和 交叉抗性等优点，因此是目前少数几种可用于饲料 添加剂的抗生素之一Ｌ４ Ｊ。目前恩拉霉素的生产主 要由抗真菌素链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｆｕｎｇｉｃｉｄｉｃｕｓ）发酵 获得，由于该菌株发酵周期长，产素水平低，了 恩拉霉素的大规模生产和进一步的推广应用 。 受多重因素，因此很难通过单个编码基因或表 达因子的改变而达到理想的效果 ；而传统的 诱变育种技术则往往可以通过简便快速的诱变及适 当的筛选手段而获得生产性能优良的工业菌株。因 此传统的诱变育种技术在目前抗生素产生菌的选育 过程中具有不可取代的地位。迄今，利用紫外诱 变、化学诱变、微波诱变、太空诱变以及离子束诱变 等技术已成功选育出了大量产量高、活性强的优良 微生物菌种。王世梅利用紫外线诱变选育出数株阿 扎霉素（Ａｚｉｎｏｍｙｃｉｎ）Ｂ产量较出发菌株高３倍以上 的高产菌株，且传代稳定 ；吴越等则采用亚 盐化学诱变育种技术使一株炭样小单孢菌ＪＸＮＵ－１ 的抗生素产量提高了２倍＿８ ；阎永贞等对一株纳他 霉素产生菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ ＳＩＰＩ－ＮＨＦ－０９进行 因此采用现代生物遗传育种技术进一步提高恩拉霉 素产生菌的产素水平及生产性能，对于降低恩拉霉 素生产成本、提高市场竞争力具有重要的意义。 了紫外和微波相结合的诱变处理，并获得了一株纳 他霉素高产突变株，其纳他霉素产量是出发菌株的 目前工业微生物的遗传育种方法主要可分为两 类：一种为传统（物理／化学）诱变育种技术；另一种 为现代分子生物学技术，即通过对特定基因进行定 向改造来进一步提高菌种的生产性能。然而对于大 机制及代谢机制非常复杂，抗生素的产生往往 ３．５倍，且遗传性状稳定，具有一定的产业化开发价 值 。 本研究采用紫外诱变育种技术，对本实验室保 存的一株工业生产用恩拉霉素产生菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ 部分抗生素产生菌而言，由于其抗生素的生物合成 ｆｕｎｇｉｃｉｄｉｃｕｓ Ｆ１ １０进行了多轮诱变处理，采用抗生素 （链霉素、利福霉素）抗性筛选法获得了２６株恩拉 基金项目：通过紫外诱变育种技术获得恩拉霉素高产菌株，实验室基金项目（项目编号：１４０４Ａ２０４）。 作者简介：王建玲（１９６２～），女，学士，研究员。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｊ１０１＠ｔｕｓｔ．ｅｄｕ．ｃｎ。 通讯作者：张会图（１９７５～），男，博士，副教授，研究方向：微生物与生化药学。Ｔｅｌ：０２２￣０６０１９５８，Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｚｈａｎｇ＠ｔｕｓｔ．ｅｄｕ．ｃｎ。 一２３— 第５期 工业微生物 第４５卷 霉素产量明显提高的正突变菌株，并对这些菌株的 将培养后获得的新鲜孢子接种至２ＸＹＴ液体培 发酵性能进行了研究。该研究旨在为工业化发酵高 效生产恩拉霉素提供生产菌种。 养基，２８ ｑＣ摇床培养２４ ｈ，经适当稀释后分别涂布 在含不同浓度链霉素或利福霉素Ｂ（１ Ｉ￣ｇ／ｍＬ、２ １材料…１．１ 材料 １．１．１ 菌种 菌落生长情况。记录未长菌落平板上的链霉素或利 福霉素Ｂ的最低浓度，即为链霉素／利福霉素Ｂ对 该菌的最小抑制浓度。 １．２．２单孢子悬液的制备和计数 向培养好的新鲜孢子斜面中加入１０ ｍＬ灭菌的 生理盐水，用接种环将孢子刮下，并将其转移至含玻 璃珠的灭菌大试管中，蜗旋震荡打散孢子，再经脱脂 棉过滤获得单孢子悬液；经适当稀释后进行血球板 显微计数。 １．２．３致死率曲线的绘制 取单孢子悬液５ ｍＬ，用无菌生理盐水反复离心 洗涤３次，并最终制备成浓度为（１．０—１．５）×１０ ／ｍＬ 的孢子悬液；取６．０ ｍＬ于直径７ ｃｍ的平皿中，并放 置于磁力搅拌器上，边搅拌边照射，紫外灯预热３０ ｍｉｎ，紫外灯功率１５ ｗ，照射波长２５４ ｎｍ，照射距离 ３０ ａｍ，照射时间分别设为０ Ｓ、１５ Ｓ、３０ Ｓ、４５ Ｓ、６０ Ｓ、 ７５ ｓ、９０ ８、１０５ Ｓ、１２０ Ｓ。诱变后的菌体经生理盐水 适当稀释后，取０．１ ｍＬ涂布于ＧＹＴ平板培养基上， ２８ ｑＣ避光培养５ ｄ后，测活菌数，并计算致死率；致 死率（％）＝（Ｄ—Ｅ）／Ｄ×１００；式中：Ｄ为诱变前平 板菌落数；Ｅ为诱变后平板菌落数。 １．２．４紫外诱变及抗性突变株的筛选 恩拉霉素产生菌：抗真菌链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｆｕｎｇｉｃｉｄｉｃｕｓ）Ｆ１１０（ＡＴＣＣ ２１０１３），生物测定指示菌： 枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＴＣＣＣ １１５８９均由本 研究室保存。 １．１．２培养基 平板培养基ＧＹＴ（％）葡萄糖０．８、酵母提取物 ０．０８、金鱼膏０．０８、胰蛋白胨０．１、琼脂２，ｐＨ ８．０； 种子培养基（％）葡萄糖３．０、玉米浆３．０、碳酸钙２、 酵母粉０．５、氯化钠０．８，ｐＨ ７．５；摇瓶发酵培养基 （％）玉米粉１４、玉米浆４、尿素０．５、磷酸二氢钾 ０．０２、氯化锌０．０５、硫酸亚铁０．０１３、氢氧化钾０．３、 碳酸钙０．５、氯化钠０．５，ｐＨ ７．５；含指示菌的测活培 养基为ＬＢ固体平皿（％）胰蛋白胨１．０、酵母提取物 ０．５、氯化钠０．５、琼脂２，ｐＨ ７．０；２ＸＹＴ培养基（％） 胰蛋白胨１．６、酵母提取物１．Ｏ、氯化钠０．５。 １．１．３试剂 链霉素、利福霉素Ｂ均购自Ｓｉｇｍａ公司，纯度分 别为９８．５％和９７．３％；恩拉霉素标品为８％预混 剂，购自美仑生物；氯化锌、尿素、磷酸二氢钾、氢氧 化钾、硫酸亚铁、氯化钠、氯化铵、硫酸铵等为分析 纯，均购自国药集团；胰蛋白胨和酵母提取物购自 Ｏｘｆｏｒｄ；乙腈、甲醇等均为色谱纯，购自国药。 １．１．４仪器与设备 紫外诱变箱和磁力搅拌器（济南杰康净化设备 厂）；ＨＺＱＦ１６０全温摇床（哈尔滨东联电子科技开发 有限公司）；超净工作台（河南郑州南北仪器设备有限公司）；恒温培养箱（上海欧迈科学仪器有限公 司）；１２００型ＨＰＬＣ色谱仪（美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司）； Ｇｅｍｉｎｉ Ｃ１８柱（４．６ ｍｍ×１５０ ｍｍ，５ ｍ）。 １．２方法 １．２．１链霉素和利福霉素Ｂ 对菌株Ｓ．ｆｕｎｇｉｃｉｄｉｃｕｓ Ｆ１１０的最低抑制浓度 （ＭＩＣ）测定 根据致死率曲线，选择合适的照射剂量，对出发 菌株Ｓ．ｆｕｎｇｉｃｉｄｉｃｕｓ Ｆ１１０进行诱变处理；将诱变后 孢子离心沉淀后，全部转移至２ＸＹＴ液体培养基，避 光条件下，２８ ｑＣ摇床培养２４ ｈ，经生理盐水洗涤后， 分别涂布于含链霉素５￣ｇ／ｍＬ或利福霉素Ｂ １０ ｌｘｇ／ｍＬ的固体平皿上，２８℃培养８ ｄ，筛选抗生素抗 性突变株。 １．２．５ 突变株产恩拉霉素水平的初步检测 将抗生素抗性突变株转接至不含抗生素的固体 平板培养基，待长出针尖样菌落时，用打孔器连同下 面的培养基一起取出，转移至无菌空平皿中，保持相 同的湿度，３０℃培养２ ｄ。把每一长满单菌落的琼 脂块移至已混有指示菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）的大块ＬＢ 第５期 王建玲等：紫外诱变选育恩拉霉素高产茵株 浓度（ＭＩＣ）测定 第４５卷 固体平板，４ ｏ【＝保存１２ ｈ，然后移至３０℃培养箱培 养，分别测定各琼脂块的抑菌圈直径，并用出发菌株 做对照。 与不加抗生素（链霉素、利福霉素Ｂ）的培养基 相比，加入抗生素的培养基菌落生长明显滞后，且菌 落相对较小，随着培养基中抗生素浓度的增加，出发 菌株在筛选平板上的单菌落逐渐减少。由表１可知 当链霉素浓度达到３．０ Ｉｘｇ／ｍＬ，利福霉素Ｂ的浓度 １．２．６ 恩拉霉素产生茵的发酵培养 将琼脂块法筛选得到的菌株接种至种子摇瓶， 装液量为５０ ｍＬ／２５０ ｍＬ三角瓶，２８℃，２００ ｒ／ｍｉｎ 震荡培养４８ ｈ，制得种子培养液；按１／２５的接种量 达到８．０ ｗｇ／ｍＬ时，筛选平板上无菌落生长。故链 霉素对Ｓ．ｆｕｎｇｉｃｉｄｉｃｕｓ Ｆ１ １０菌株的最小抑制浓度为 ３．０ ｗｇ／ｍＬ，而利福霉素Ｂ对该菌株的最小抑制浓 度为８．０ ｗｇ／ｍＬ。 接种至发酵培养基（１００ ｍＬ／５００ ｍＬ三角瓶），每株 菌３个平行样，同时以出发菌株作为对照，２８ ｃ【＝， ２００ ｒ／ｍｉｎ，振荡培养８ ｄ。 １．２．７发酵产物的ＨＰＬＣ分析 恩拉霉素标准曲线的绘制：称取恩拉霉素Ａ预 混剂标品（恩拉霉素Ａ：８．０％）２．０ ｇ，加入１６ ｍＬ丙 酮浸提液（丙酮：２ ｍｏｌ／Ｌ盐酸：水＝２０：１：２０，ｐＨ ３．５），室温下震荡浸提１ ｈ，经０．４５ ｍ滤膜过滤 表１ 链霉素７Ｌ￣，ｌ福霉素Ｂ对茵株Ｓ．ｆｕｎｇｉｃｉｄｉｃｕｓ Ｆ１１Ｏ的最小抑制浓度（ＭＩＣ） 后，制成浓度为１０ ｍｇ／ｍＬ的恩拉霉素Ａ标准母液， 再经适当稀释，分别制得浓度为２００ Ｉ￣ｇ／ｍＬ、４００ ｇ／ｍＬ、６００ Ｉ￣ｇ／ｍＬ、８００ Ｉ￣ｇ／ｍＬ １ ０００ ｔｚｇ／ｍＬ、１ ２００ Ｉｘｇ／ｍＬ、１４００ Ｉ￣ｇ／ｍＬ的恩拉霉素Ａ标准溶液，各取 １０ ｕＪＬ标准液进行ＨＰＬＣ分析，然后以恩拉霉素Ａ 的浓度为横坐标，以恩拉霉素Ａ的峰面积为纵坐标 绘制标准曲线。 注：＋＋ ：生长快速且有大量孢于形成；＋ ：司生长但不产生孢子或孢子 形成量少；＋：生长缓慢；一：不生长 样品制备：取５．０ ｍＬ发酵液，离心弃上清，沉淀 经冷冻干燥后，加人１０ ｍＬ丙酮浸提液，室温下震荡 浸提１ ｈ，经０．４５ ｕｍ滤膜过滤后，取１０ Ｌ样品进 ２．２致死率曲线的绘制 紫外诱变的机理是使同链ＤＮＡ的相邻胸腺嘧 啶间形成嘧啶二聚体而诱使细胞发生ＳＯＳ反应，并 进一步导致基因组ＤＮＡ在复制或修复过程中错配 率增加，进而导致基因突变。不同种类的放线菌在 不同生长状态下对紫外线的敏感性不同，因此在进 行紫外诱变之前，首先对Ｓ．ｆｕｎｇｉｃｉｄｉｃｕｓ Ｆ１ １０孢子 进行了致死率曲线的绘制并确定了最佳诱变剂量。 由图１可知：紫外线的照射时间与Ｆ１１０菌株的致死 行ＨＰＬＣ分析，根据标准曲线计算发酵液中的恩拉 霉素Ａ产量。 ＨＰＬＣ检测条件：色谱柱Ｃ１８反向色谱柱（４．６ ×１５０ ｍｍ，中＝５ Ｉｘｍ）；柱温３０℃；进样量１０ ＩｚＬ；紫 外检测波长２６７ ｎｍ。流动相 乙腈：ＮａＨ ＰＯ 溶液 （５０ ｍｍｏ］／Ｌ）＝３：７，磷酸调节ｐＨ ４．５；流速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ。 率之间存在明显的剂量效应关系。随着照射时间的 １．２．８遗传稳定性考察 延长，致死率逐渐上升。当照射时间为９０ Ｓ，可使 Ｆ１ １Ｏ孢子的致死率大于９０％；当紫外线照射时间为 １５０ ｓ时，孢子几乎全部死亡。因此在当前照射条件 下，选择的最佳照射时间为９０ Ｓ。 ２．３紫外诱变及抗生素抗性筛选 将筛选获得的高产突变株进行固体平板传代培 养及４℃冰箱保存，考察了突变株１～５代摇瓶发酵 的恩拉霉素产量以及不同保存时间的菌株恩拉霉素 产量。 ２结果与讨论 ２．１链霉素和利福霉素Ｂ对出发菌株的最小抑制 采用最佳照射时间（９０ Ｓ）对单孢子悬液进行了 紫外线诱变处理。为使突变后菌株的表型得以充分 表达，将诱变后的孢子转接至２ＸＹＴ液体培养基，避 第５期 王建玲等：紫外诱变选育恩拉霉素高产菌株 第４５卷 表２部分正突变株的抑茵实验及其与野生出发菌 株的对比 对发酵水平无明显影响，该菌株具有较好的遗传稳 定性。 ３结论 大量研究表明，向微生物核糖体或ＲＮＡ聚合 酶中引入特定的突变有助于其次级代谢产物产量的 提高。由于这些突变往往导致菌株同时对作用于核 糖体或ＲＮＡ聚合酶的药物（抗生素）产生抗性，因 此可以抗性突变为指针，建立一种简单易行的微生 物定向育种新方法¨。。。根据这一理论，本研究分别 采用了与核糖体相关的链霉素抗性筛选以及与 ＲＮＡ聚合酶相关的利福霉素抗性筛选对诱变后的 恩拉霉素产生菌进行了初筛。结果显示：两种筛选 方法在淘汰野生型、浓缩突变型的同时均可在很大 程度上提高正突变菌株的获得几率。其中链霉素抗 性筛选法可使突变菌株中的正突变率达到３０％，每 ｌ０个突变菌株中就有３个菌株的恩拉霉素产量明 显高于出发菌株。而以往的诱变育种工作显示：平 注：黑体标注菌株为恩拉霉素产量提高明显的菌株，并准备做进一步摇瓶发 酵验证 均上万个诱变后的菌株中才会有１到２个恩拉霉素 产量明显提高的突变株。因此该方法在较大程度上 减少抗生素高产菌筛选的盲目性和不定向性，提高 表３部分正突变株的摇瓶发酵验证及ＨＰＬＣ分析 对目的菌的筛选效率，极大地减少诱变筛选的工作 量。 参考文献 ［１］ＭｅＣａｆｆｅｒｔｙ Ｄ，Ｃｕｄｉｃ Ｐ，Ｆｒａｎｋｅｌ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｍｏｐｌａｎｉｎ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ．Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ， ２００２，６６（４）：２６１－２８４． ［２］ 张子臣，张翠芬，刘宪军等．恩拉霉素的最新研究进展．中 国抗生素杂志，２０１３，３８（３）：１８５－１９０． ［３］ 陈洪，余冰，陈代文等．日粮中添加恩拉霉素对仔猪生产性 能和肠道菌群的影响．中国畜牧杂志，２０１０，４６（１９）：４２－ 后置于４℃保藏，测定保藏不同时间的菌株的发酵 ４６． 效价。以新鲜斜面为对照，结果其保藏１０ ｄ、２０ ｄ、 ３０ ｄ、６０ ｄ和９０ ｄ的相对效价分别为１０８％、 ［４］ 周桂莲，蒋宗勇，林映才．饲用抗生素在畜禽体内残留及消 除规律研究进展．饲料工业，２００７，２８（４）：１＿８． ［５］ 蔡作新，郑传伟，田伟波等．氮离子注入诱变选育恩拉霉素 高产菌株．工业微生物，２０１５，４５（３）：５８－６１． ９７．５％、１０３％、９１．６％和９８．７％。表明菌种斜面在 ４℃保藏３个月稳定。 ［６］ Ｙｉｎ Ｘ，Ｚａｂｆｉｓｋｉｅ Ｔ．Ｔｈｅ ｅｎｄｕｒａｃｉｄｉｎ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｇｅｎｅ ｃｌｕｓｔｅｒ ｆｒｏｍ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｆｕｎｇｉｃｉｄｉｃｕｓ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００６，１５２（１Ｏ）： ２９６９－２９８３． 对菌株ＳＲ９３连续传代培养，以４ ｑＣ冰箱保存７ ｄ生长良好的第一代菌株为对照，结果表明：第１、２、 ３、４和５代的相对发酵单位分别为１００％、９３％、 ［７］ 王世梅，黄为一，崔凤元．阿扎霉素Ｂ产生菌吸水链霉菌 ＮＮＤ－５２的诱变筛选．微生物学通报，２００１，２８（１）：６４－６７． ［８］Ｙｕｅ Ｗ，Ｙｕｎｈｏｎｇ Ｈ，Ｊｉｎ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ｐｒｏｌｉｉｆｃ Ｍｉｃｒｏｍ— ９７．１％、１０２．１％和９９．２％，表明菌株ＳＲ９３传四代 第５期 工业微生物 第４５卷 ｏｎｏｓｐｏｒａ ｃａｒｂｏｎａｃｅａ ｉｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｓｏｄｉｕｍ Ｎｉｔｒｉｔｅ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ．Ａｇｒｌｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂａｓｉｃ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３， 发酵条件的优化．中国抗生素杂志，２０１３，３８（５）：３３２－３３８． ［１０］Ｏｃｈｉ Ｋ，Ｏｋａｍｏｔｏ Ｓ，Ｔｏｚａｗａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｒｉｂｏｓｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ａｄｖ Ａｐｐｌ Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌ，２００４，５６： ｌ５５．１８４． １４（１０）：１４０９—１４１２． ［９］ 阎永贞，魏晓东，那可等．纳他霉素产生菌的诱变育种及其 ＵＶ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ｆｏｒ ｈｉｇｈ－ｙｉｅｌｄ ｅｎｒａｍｙｃｉｎ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔａｉｎｓ ＷＡＮＧ Ｊｉａｎ—ｌｉｎｇ，ＸＵ Ｍｉｎｇ－ｙｕ，ＳＨＩ Ｔｉａｎ—ｇｅ，ＡＮ Ｘｉｎｇ－ｊｕａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｚｉ—ｙｉｎ，ＣＨＥＮＧ Ｓｉ， ＪＩＡ－ｍｅｉ，ＭＡ Ｃｕｉ－ｐｉｎｇ，ＧＡＯ Ｓｈｕａｎｇ，ＷＡＮＧ Ｙｉｎｇ－ｄｏｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｈｕｉ－ｔｕ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｉ柚ｊｉｎ ３００４５７ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ，ａｎ ｅｎｒａｍｙｃｉｎ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ，Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｆｕｎｇｉｃｉｄｉｃｕｓ Ｆ１ １０ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｏｕｔ ｆｏｒ ＵＶ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，ａｎｄ １３２ ｍｕｔａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｏｆ ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ ｏｒ ｒｉｆａｍｙｃｉｎ Ｂ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎ，２６ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｍｕｔａｎｔｓ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｈｉｇｈｅｒ ａｂｉｌｉｔｙ ｆｏｒ ｅｎｒａｍｙｃｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｓｈａｋｉｎｇ ｆｌａｓｋ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｅｎｒａｍｙｃｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｏｎｅ ｍｕｔａｎｔ ｏｆ ＳＲ９３ ｒｅａｃｈｅｄ ２ ４００ ｇ／ｍＬ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ａｂｏｕｔ ３８％ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｏｎｅ．Ａｆｔｅｒ ｓｅｖｅｒａｌ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｐｌａｔｅ ｔｏ ｐｌａｔｅ，ｔｈｅ ｍｕｔａｎｔ ＳＲ９３ ｗａｓ ｓｔｅａｄｙ ｉｎ ｅｎｒａｍｙｃｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｈｏｗｅｄ ｇｒｅａｔ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ＵＶ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ；ｅｎｒａｍｙｃｉｎ；ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ 一２８—
