维普资讯 http://www.cqvip.com 安徽农业科学，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｈｕｉ Ａｇｎ．Ｓｃｉ．２００７，３５（１４）：４１２６—４１２７，４１２９ 责任编辑张杨林责任校对王森 玉米淀粉分支酶基因启动子的克隆及生物信息学分析 朱苏文，韩国民，江腾（安徽农业大学生命科学学院，安徽合肥２３００３６） 摘要［目的］为了研究不同淀粉含量的启动子之间是否有差异及对直链淀粉合成途径是否有影响。［方法］以常规玉米叶片基因组 ＤＮＡ为模板，利用ＮＣＢＩ网站公布的高直链玉米淀粉分支酶基因（Ｚｅａｍａｙｓ ｓｔａｒｃｈ ｂｒａｎｃｈｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ＩＩｂ，ＳＢＥＩＩｂ）序列设计引物，通过 ＰＣＲ反应扩增出常规玉米淀粉分支酶基因的启动子序列，将该扩增片段与Ｔ载体连接后测序，并与高直链玉米淀粉分支酶基因启动 子的序列进行比较分析。［结果］结果表明：玉米淀粉分支酶基因启动子与公布的启动子序列同源性高达９９－３％，序列差异 值为 ０．００７ １６，该差异主要是ＳＮＰ（单核苷酸多态性）和Ｉｎｄｅｌ（插入，缺失）造成的，推测该差异可能会影响到淀粉分支酶基因的表达，是造 成玉米直链淀粉含量差异的因素之一。［结论］该研究为深入了解玉米直链淀粉合成机理提供了重要依据。 关键词玉米；淀粉分支酶；启动子；差异 中图分类号０７８ 文献标识码Ａ 文章编号０５１７—６６１１（２００７）１４—４１２６—０２ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｐｒｏｍｏｔｅｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｃｏｒｎ Ｓｔａｒｃｈ Ｂｒａｎｃｈｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ Ｇｅｎｅ ＺＨＵ Ｓｕ－ｗｅｎ ｅｔ ｌａ（Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ａｎｈｕｉ Ａ ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ，Ａｎｈｕｉ ２３００３６） Ａｂｓｔｒａｃｔ ｆ０ｂｉｅｃｔｉｖｅ１ ｔｈｅ ａｉｍ ｏｆ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｗａｓ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｗｈｅｔｈｅｒ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔａｒｃｈ ｃｏｎｔｅｎｔ ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ ａｎｄ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ａｍｙｌｏｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｒｏｕｔｅｓ．ｆＭｅｔｈｏｄ１ Ｇｅｎｏｍｅ ＤＮＡ ｏｆ Ｚｅａ ｍａｙｓ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｃｏｒｎ ｌｅａｆ．Ａｎｄ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｃｏｒｎ ｓｔａｒｃｈ ｂｒａｎｃｈｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｇｅｎｅ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｍｙｌｏｓｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ＮＣＢＩ．Ｔｈｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｍａｉｚｅ ｓｔａｒｃｈ ｂｒａｎｃｈｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｇｅｎｅ Ｗａｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｂｙ ＰＣＲ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｔｈｅｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ Ｔ－ｖｅｃｔｏｒ．【Ｒｅｓｕｌｔ】Ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ９９－３％ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｏｆ ｃｏｒｎ ｓｔａｒｃｈ ｂｒａｎｃｈｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｐｒｏｍｏｔｅｒ．Ｔｈｅｉｒ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｍａｉｎｌｙ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＳＮＰ）ａｎｄ Ｉｎｄｅｌ（ｉｎｓｅｒｔ／ｄｅｌｅｔｅ），ｗｈｉｃｈ ｍｉｇｈｔ ｉｍｐａｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｒｃｈ ｂｒｎｃｈｉａｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｗａｓ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｆａｃｔｏｒ ｃａｕｓｅｄ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｃｏｒｎ ａｍｙｌｏｓｅ ｃｏｎｔｅｎｔ 【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆｆｅｒｅｄ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｉｎ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｃｏｒｎ ａｍｙｌｏｓｅ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｃｏｒｎ；Ｓｔａｒｃｈ ｂｒａｎｃｈｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ；Ｐｒｏｍｏｔｅｒ；Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ 玉米是重要的粮食和饲料作物，在我国的种植面积很 司，性内切酶、ｐＧＥＭ－Ｔ载体等购自Ｔａｋａｒａ大连宝生物 工程有限公司，ＰＣＲ引物由上海生工生物工程技术服务有 限公司合成，其他常用试剂均为国产分析纯。 大。随着我国社会和经济的发展，一些特用玉米的需求量越 来越大，高直链淀粉玉米就是一种很好的工业和医药原料ｌｌ】， 具有较高的经济价值。众多研究结果揭示了玉米淀粉的生 物合成涉及４类酶——ＡＤＰＧ焦磷酸化酶、淀粉合成酶、淀 粉分支酶和去分支酶［２－３１。其中对直链淀粉含量影响最大的 是淀粉分支酶基因。随着编码这些酶基因的克隆，利用转基 １．２方法将鲁原９２玉米种子置于实验室发芽。待其长 到５叶期时，取新鲜叶片采用ＣＴＡＢ法提取玉米基因组 ＤＮＡ［￣。以０．８％琼脂糖凝胶电泳检测基因组ＤＮＡ大小及其 质量；紫外分光光度计法检测ＤＮＡ纯度，并计算ＯＤ￣ｏ／０．Ｄ瑚 的比值。 登录ＮＣＢＩ网站，获取玉米淀粉分支酶基因的全长基 因技术对淀粉合成过程进行遗传操纵业已成为可能，并且 在提高淀粉产量以及不同特性淀粉品质的种质资源创新等 方面展示出巨大的潜力 。 因序列（ＧｅｎｅＢａｎｋ：ＡＦ０７２７２５）。根据其启动子序列设计引 物，从提取的基因组ＤＮＡ中将其全长扩增出来。引物序列 如下： 弓Ｉ １：５’ＴＣＡＴＣＧＧＡＣＣＧＴＣＡ 兀’Ｇ ＩＴＣ ３’； 引２：５’ＡＧＣＣＧＧＡＴＣＧＧＡＴＣＧＡＡＣＴＧ ３’ 高直链淀粉玉米的研究在美国已有多年历史。１９５２年 Ｖｉｎｅｙａｒｄ和Ｂｅａｒ发现了位于玉米第５条染色体匕的Ⅱｅ（ａｍｙｌｏｓｅ ｅｘｔｅｎｄｅｒ）基因是获得高直链淀粉而并不明显减少淀粉总含 量的关键，遗传研究表明高直链淀粉主要是由Ⅱｅ基因控制 的，淀粉分支酶的突变ｎｅ基因可使玉米淀粉中直链淀粉的 含量提高到５０％～７０％【ｑ。 ＰＣＲ扩增反应在Ｂｉｏｍｅｔｒａ－９６梯度ＰＣＲ仪上进行。优化 后的反应体系为：总体积５０ ｌ，其中１０ｘＰＣＲ ｂｕｆｆｅｒ （ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＭｇＣ１２）５ ｔｘｌ，ｄＮＴＰ（１０ ｍｍｏｌ／Ｌ）１ ｔｘｌ，５’ｐｒｉｍｅｒ（１０ 虽然对玉米中直链淀粉合成基因的研究取得了一定的 进展，但普通淀粉含量玉米的ＳＢＥＩＩｂ基因启动子序列至今 未被克隆，不同淀粉含量的启动子之间是否有差异及对直 链淀粉合成途径是否有影响，至今未见报道。该研究旨在克 ｔｘｍｏｌ／Ｌ）２．５ ｌ，３’ｐｒｉｍｅｒ（１０ ｔｘｍｏｌ／Ｌ）２．５ ｔｘｌ，Ｔｅｍｐｌａｔｅ（２００ ｎｇ／ｔｘ１）２ ｔｘｌ，Ｔａｑ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（５ Ｕ／￣１）０．４ ｔｘｌ，ｄｄＨ２０ ３６ ６ ｌ。优化后的扩增反应程序为：９４℃预变性５ ｍｉｎ，９４℃变性 隆普通玉米的ＳＢＥＩＩｂ基因启动子序列，并与高直链淀粉玉 米该基因启动子序列进行比对分析，为更好地了解玉米直 链淀粉合成机理提供科学依据。 １材料与方法 １ ｍｉｎ，６５℃退火１ ｍｉｎ，７２℃延伸３ ｍｉｎ，３５个循环，７２℃延 伸１０ ｍｉｎ。 ＰＣＲ扩增产物的回收纯化按上海华舜生物公司回收试 剂盒进行，纯化产物与ＤＧＥＭ Ｔ－Ｖｅｃｔｏｒ连接。连接产物转化 １３材料普通玉米为自交系鲁原９２。大肠杆菌ＤＨ５ｃｔ由 ＥｃＤｌｉＤＨ５ｃｔ感受态细胞，经蓝白斑筛选及Ｎｃｏ Ｉ和Ｐｓｔ Ｉ双 酶切验证阳性克隆。 ＤＮＡ测序反应在ＡＢＩ ３１００ Ａｖａｎｔ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ测 安徽农业大学生命科学学院生物物理实验室提供；Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶、ｄＮＴＰｓ等购自上海生工生物工程技术服务有限公 作者简介收稿日期序仪上进行。分别为测得的序列和在ＮＣＢＩ上下载的启动 子序列建立文档。先用Ｓｅｑｕｅｎｃｅ软件对文档进行格式化， 使之成为ｆａｓｔｅ格式，即Ｃ１ｕｓｔａ１Ｘ软件所接受的格式，然后 朱苏文（１９６１一），女，江苏东台人，副教授，从事生物生理和 基因工程的教学和研究。 ２００７—０３—０７ 维普资讯 http://www.cqvip.com ３５卷１４期 朱苏文等玉米淀粉分支酶基因启动子的克隆及生物信息学分析 采用Ｃ１ｕｓｔａｌ ｘ软件对所测的序列与ＮＣＢＩ下载的ＳＢＥⅡｂ 经插入了ｐＧＥＭ－Ｔ载体，成为重组质粒。 基因启动子序列进行比较，并作统计归类分析。 ２结果与分析 ２．１玉米基因组ＤＮＡ的提取采用ＣＴＡＢ法提取玉米基 因组ＤＮＡ，０．８％琼脂糖凝胶电泳（图１）与紫外检测发现， 样品１、２、３的ＯＤｚ￣ｏ／０Ｄ瑚均在１．８～２．０之间，主带非常清 晰，模板质量很高，符合ＰＣＲ扩增的要求。其中样品１的质 量最高，没有任何拖带现象，是ＰＣＲ反应的最适模板。 ２ ３ Ｍ 图３重组质粒的酶切验证 ２．４克隆的启动子序列的测序峰图重组质粒经过测序 ＰＣＲ后，利用ＡＢＩ３１００测序仪进行上样分析，数据采用 Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ４．０软件进行分析读取峰图。图４为部分测序峰。 从图４中可以看出，所测序列的质量非常高，序列没有任何 注：１～３为玉米基因组ＤＮＡ；Ｍ为分子量标准（ＫＤＮＡ／ＨｉｎｄⅢ）。 间断，所读取的序列具有极高的可信度，可以进一步进行生 图１玉米叶片基因组ＤＮＡ凝胶电泳 物信息学分析。 ２．５序列的比对分析图５显示了２条序列的部分比对 ２．２ ＰＣＲ扩增结果ＰＣＲ扩增产物经过１．１％的凝胶电 分布，从中可以看出序列之间的差异，所测序列可以进行很 泳，扩增出单一的条带，序列的长度３ ｋｂ左右（图２），与期 好地匹配，具有较高的同源性。而差异的部分主要是ＳＮＰ 望的大小相同，说明扩增取得了成功。 和Ｉｎｄｅｌ（插入／缺失）造成的，虽然差异不是太大，但启动子 是与ＲＮＡ聚合酶识别并结合的部位，控制基因的表达， 有很高的敏感性，微小的差异就可能造成基因表达的极大 ．．—一４ ３６１ ｂｐ 差异 。 ●—一２ ３２２ ｂｐ ２．６统计归类分析统计归类分析高直链淀粉玉米与普 通玉米的淀粉分支酶的启动子序列的差异，其启动子全长 ３ １０６ ｂｐ，ＳＮＰ值为１０，Ｉｎｄｅｌ差异１２ ｂＤ，核苷酸的差异度Ｐｊ 值达０．００７ １６。Ｐ／值是反应序列差异的最常用的参数，启动 子序列的厅值虽不是太高，但启动子是控制基因表达水平 最关键的因素之一。这些差异主要是由于ＳＮＰ和Ｉｎｄｅｌ造 图２ ＰＣＲ扩增ＳＢＥ１１ｂ基因启动子部分 成的。ＳＮＰ近年来成为研究热点，可以用于分子标记和群体 ２．３重组质粒的酶切验证如图３所示，说明目标序列已 分析，了解ＳＮＰ对于了解整个基因以及不同群体的差异都 图４所测序列的部分峰 图５启动子的序列比对分析 有重要的作用。Ｉｎｄｅｌ也是造成序列差异的一个因素。在该 造成玉米淀粉分支酶基因表达差异和直链淀粉含量不同的 研究中，Ｉｎｄｅｌ都是比较小的，一般是１～３ ｂｐ。但是这种Ｉｎｄｅｌ 原因之一 １０］。 和ＳＮＰ都分布在序列的两头，中间部分都比较少，可能与 （下转第４１２９页） ＲＮＡ聚合酶的结合序列有关。由此可知，启动子的差异是 维普资讯 http://www.cqvip.com ３５卷ｌ４期 王振宇等根瘤菌吸氢基因种间转移的研究 ４１２９ １２ １１ １０ ９ ８ ７ ６ ５ ４ ３ ２ １ ＲＦＬＰ研究以及１６ｓ ｒＲＮＡ部分碱基序列的分析，并与ｌ０多 个根瘤菌进行比较发现：花生根瘤菌在系统发育上与慢生 ２３ １３０ｂｐ 型大豆根瘤菌基本一致，而与豌豆根瘤菌遗传距离最远，不 ９ ４１６ｂｐ 同的机制可能是导致花生根瘤菌吸氢基因不能在豌豆 ６ ５５７ ｂｐ ４ ３６１ ｂｐ 和四季豆根瘤菌种中表达的原因 。 ２ ３２２ ｂｐ 参考文献 ２ ０２７ ｂｐ ［１］ＬＡＭＢＥＲＴ Ｂ Ｒ，ＣＡＮＴＲＥＬＬ Ｍ Ａ，ＨＡＮＵＳ Ｆ Ｊ，ｅｔ ａ１．ｆｉｈｒａｌ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｕｐｔａｋｅ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃ ｇｒｏｗｔｈ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ『Ｊ１．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１９８５，８２：３２３２—３２３６． 注：泳道１为ＤＮＡ标准，ｈ／Ｈｉｎｄ ＩＩＩ；泳道２为重组质粒ｐＺ５５；泳道３ 为大豆根瘤菌的结合子Ｒ． ａｐｏｎｉｃⅡｍ Ｊｚ一１０；泳道４、５、６、７为绿豆 『２１ ＬＥＹＶＡ Ａ，ＰＡＬＡＣＩＯＳ Ｊ Ｍ，ＭＯＺＯ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ 根瘤菌的结合珠ａｅｎｌｅｓ Ｍｚ一２１，Ｍｚ一２２，Ｍｚ一２９，Ｍｚ一３１；泳道８、９、 ｏｆ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｕｐｔａｋｅ ｇｅｎｅｓ ｆｒｏｍ Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｒｕｍ［Ｊ］．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ， １０为四季豆Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｖｕｌｇａｒｉｓ Ｋｚ一２２１，Ｋｚ一３７，Ｋｚ一２５；泳道１１、１２ １９８７，１６９：４９２９—１９３４． 为豌豆根瘤菌的结合株Ｒ．１ｅｇ．Ｌｚ一５，Ｌｚ。 ［３］ＤＩＴＴＡ Ｇ，ＳＴＡＮＦＩＥＬＤ Ｓ，ＣＯＲＢＩＮ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｂｒｏｄ ｈｏｓｔ ｒａｎｇｅ ＤＮＡ 图１结合株重组质粒的凝胶电泳图谱 ｃｌｏｎｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｇｒａｍ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｄａ［Ｊ１．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１９８０，７７：７３４７—７３５１． ３结论与讨论 ［４１曾定．固氮生物学［Ｍ］．厦门：厦门大学出版社，１９８７：３５８—３６９． 利用三亲本杂交的方式可以实现吸氢基因在不同根瘤 ［５］Ｇｅｒｈａｒｄｔ Ｐ．普通细菌学方法手册［Ｍ］．厦门大学生物系微生物教研 室，译厦门：厦门大学出版社，１９８９：２９０—２９１． 菌的种间转移并表达活性，构建具有高吸氢活力和固氮效 ［６］许良树，吕荣富，张凤章，等．花生根瘤菌吸氢培养基的改进『Ｊ１．厦门 率的根瘤菌菌株，实现不同优良性状的重组，提高根瘤菌的 大学学报，１９９４，３２（２）：２６９—２７１． 共生固氮效率。 ［７］王振宇，龙敏南，刘月英，等．根瘤菌吸氢基因转移的研究『Ｊ１＿微生物 学报，２００１，４１（４）：４２１—４２６． 虽然花生根瘤菌吸氢基因可以在不同种的根瘤菌中转 ［８］霍尔特简明第八版伯杰鉴定手册［Ｍ１．刘复今，译．济南：山东大学 移，但豌豆根瘤菌和四季豆根瘤菌结合株却不能检测出吸 出版社，１９８８：９３—９４． ［９］，陈强，ＫＲＩＳＴＩＮＡ Ｌ，等．花生根瘤菌在根瘤菌系统分类中 氢活性的表达。等通过对花生根瘤菌１６ｓ ｒＲＮＡ的 的地位研究『Ｊ１＿微生物学报，１９９６，３６（３）：２２７—２３３． （上接第４１２７页） 『７１ ＡＮＧＥＮ０Ｎ Ｇ，ＶＡＮ Ｍ０ＮＴＡＧＵ Ｍ，ＤＥＰ ＩＣＫＥＲ Ａ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ３结论与讨论 ｓｔｏｐ ｃｏｄｏｎ ｃｏｎｔｅｘｔ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｎｕｃｌｅａｒｇｅｎｅｓ『Ｊ１．ＦＥＢＳ－Ｌｅｔｔ，１９９０，２７１： １４４－１４６． 目前ＰＣＲ是最常用和最有效的克隆基因方法ｌｌ】Ｊ。该试 ［８］滕文涛，宋同明．近等基因背景下对玉米胚乳突变基因 的遗传效 验利用已公布的高直链玉米淀粉分支酶基因序列设计引 应研究『Ｊ１．作物学报，２００１，２７（２）：１９０—１９５． 物，成功地从普通玉米中扩增出淀粉分支酶基因启动子片 『９１ ０Ｍ０ＲＵＬＬＥＨ Ｓ，ＡＢＲＡＨＡＭ Ｍ，Ｇ０Ｌ０ＶＫＩＮ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｏｕｂｌｅｄ ＣａＭＶ ３５Ｓ ｅｎｈａｎｃｅｒ ｅｌｅｍｅｎｔ 段，并且进行了测序分析，与已经公布的序列同源性较高， ｉｎ ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔｓ ｏｆ ｍａｉｚｅ『Ｊ１．Ｐ１ａｎｔ 达到９９－３％。现已准备把序列递交到ＮＣＢＩ，为更好地研究 Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ。１９９３。２１：４１５－４２８． 群体之间淀粉分支酶启动子差异提供序列信息。 『１０１ ＬＩＵ Ｑ，ｗＡＮＧ Ｚ，ＣＨＥＮ Ｘ．Ｓｔａｂｌｅ ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｗａｘｙ ｇｅＢｅ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｒｉｃｅ ｗｉｔｈ ｒｅｄｕｃｅｄ ａｍｙｌｏｓｅ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ 试验结果表明，高直链淀粉玉米与普通玉米的启动子 ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｑｕａｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｒｅｓ。２００３，１２（１）：７１—８２． 存在着差异，但是这种差异是否为造成玉米直链淀粉含量 ［１１］王颖，麦维军．高等植物启动子的研究进展『Ｊ１．西北植物学报， ２００３．２３（１１）：２０４０—２Ｏ４８． 变化的原因还需进一步研究。将高直链淀粉玉米与普通玉 『１２１ ＭＣＥＬＲ０Ｙ Ｋ，ＺＨＡＮＧ ＷＡＮＧＧＥＮ，ＧＡ０ ＪＵＮ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ 米的启动子序列分别接上ＧＦＰ等报告基因，分别转入常规 ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｃｔｉｎ ｐｒｏｍ ｏｔｅｒ ｆｏｒ ｕｓｅ ｉｎ ｒｉｃｅ ｔｒａｎｓｔｏｒｍａｔｉｏｎ『Ｊ１．Ｔｈｅ 玉米，此两种启动子控制下的基因表达水平尚在研究［１２－１７］。 Ｐ１ａｎｔ Ｃｅｋｋ，１９９０。２：１６３—１７１． ［１３］皮灿辉，易自力，王志成．提高转基因植物外源基因表达效率的途 参考文献 径『ＪＩ＿中国生物工程杂志，２００３，２３（１）：１－４． ［１１宋同明．发展我国特用玉米产业的意３７．［Ｊ１．玉米科学，１９９６（４）：６－１１． ［１４］袁正强，贾燕涛，吴家和，等．三个韧皮部特异性启动子在转基因烟 ［２］ＮＥＬＳＯＮ Ｏ，ＰＡＮ Ｄ．Ｓｔａｒｃｈ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ ｍａｉｚｅ ｅｎｄｏｓｐｅｒｍｓ［Ｊ］．Ａｎｎｕ 草中表达的比较研究『Ｊ１ｌ农业生物技术学报，２００２，１０（１）：６—９． Ｒｅｖ Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ ＰＭＢ，１９９５，４６：４７５—４９６． 『１５１ ＹＩＮ Ｙ，ＣＨＥＮ Ｌ，ＢＥＡＣＨＹ Ｒ．Ｐｒｏｍ ｏｔｅｒ ｅｌｅｍ ｅｎｔｓ ｒｅｑｕ ｉｒｅｄ ｆｏｒ ［３１ ＰＲＥＩＳＳ Ｊ，ＢＡＬＬ Ｋ，ＳＭＩＴＨ－ＥＨＩＴＥ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｈｌｏｅｍ ｓｐｅｃｉｆ ｉｃ ｇｅｎｅ ｄｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＲＴＢＶ ｐｒｏｍ ｏｔｅｒ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｔａｒｃｈ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｏｘｆ Ｓｕｒｖ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ ｒｉｃｅ『Ｊ１．Ｐｌａｎｔ，１９９７，１２（５）：１１７９—１１８８． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１９９４，７：５９—１４４． 『１６１ ＨＥＨＮ Ａ，Ｒ０ＨＤＥ Ｗ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｉｓ－ａｃｔｉｎｇ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ［４］谷明光，黄克虎．重视工业专用型高淀粉玉米品种的选育 ．玉米科 ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｓｔｒｅｎｇｔｈ ａｎｄ ｐｈｌｏｅｍｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｃｏｎｕｔ ｆｏｌｉｒａ 学，２００２，１０（１）：２４—２５． ｄｅｃａｙ ｖｉｒｕｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ［Ｊ］．Ｇｅｎ ｖｉｒｏｌ，１９９８，７９（６）：１４９５—１４９９． ［５］周洪生．玉米种子大全『Ｍ］．北京：中国农业出版社，２００１：３３２—３４９． 『１７１ ＭＥＤＢＥＲＲＹ Ｓ Ｌ，０ＬＳＺＥＷＯＫＩ Ｎ Ｅ．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｉｓ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ［６］王关林，方宏筠植物基因工程『Ｍ１２版．北京：科学出版社，１９９８：７４４． ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｃｏｍｍｅｌｉｎａ ｙｅｌｌｏｗ ｍｏｔｔｌｅ ｖｉｒｕｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ『Ｊ１． Ｐ１ａｎｔ，１９９３，３（４）：６１９—６２６．
