医院废水中总大肠菌群的测定

[适用对象] 环境科学专业 [实验学时] 4学时

一、实验目的

通过本实验学会测定医院废水中总大肠菌群的方法，通过本实验

把握无菌操作的基本规程，掌握水中总大肠菌群测定的基本原理，利用相关仪器根据既定的步骤测定水中的总大肠菌群。

二、预习与参考

参考实验指导书，结合实验特色查阅相关文献资料进行实验设计。

三、实验内容

1、原理

应用灭菌的滤纸吸收选择性培养基，细菌通过滤纸纤维膨胀而被固定并生长繁殖，大肠菌群在发育时伴随产生琥珀酸脱氢酶将纸片上的TTC（红四碳唑）还原状成不可逆的甲臜产生红色色素，即大肠菌在纸片培养基上呈红色菌落，菌落周围产生苏圈是大肠菌分解乳糖产酸使指示剂变色的结果。 2、水样采集

用采水器或其他灭菌器采集水样500ml放入灭菌瓶内，如果是经加氯处理的废水，需加1．5％硫代硫酸钠5ml除去余氯。

3、方法和步骤

每份预监测水样，接种水样总量为55．5ml，分别接种大纸片五张，小纸片10张。每张大纸片接种10ml水样，五张小纸片每张接种1ml，另五张小纸片接种1：10稀释的水样lml。接种水样时要均匀涂布于纸片上，用手轻轻压平，作好标记于铺有湿纱布的搪瓷盘中。测总大肠菌群37℃±l℃培养18～24h观察结果，测粪大肠菌群44．5℃±l℃培养18～24h，观察结果。 4、判定标准

（1）纸片上出现紫红色菌落，周围有黄圈者为阳性或出现片状红晕周围为黄地者亦为强阳性。

（2）纸片为一种颜色而无菌落生长者为阴性。

（3）纸片呈紫红色或紫色，菌落周围无黄圈者为阴性。

（4）酸性水样接种后纸片变黄，经培养无紫红色菌落者为阴性。

（5）纸片变色并呈不典型菌落结果可疑者，应作复发酵进行验证。

5．报告结果

根据阳性纸片张数，查MPN值表，报出1L水中大肠菌群或粪大肠菌群数。

四、主要食品设备功能和材料清单

灭菌的滤纸、选择性培养基、1．5％硫代硫酸钠、采水器、灭菌瓶。

五、实验要求

如水样污染较重可采取适当稀释后接种，乘以稀释倍数，报出结果。

六、实验报告要求

1、根据实验要求，在实验时间内到实验室进行实验时，一边测量，一边记录实验数据。报告要求准确、美观。

2、 在实验中，如果发生实验测量数据与事先的计算数值不符，甚至相差过大，此时应该找出原因，不能不了了之。同时要把通过实验所测量的数据与计算值加以比较，如果误差一般5％以下。

3、在报告的最后要完成指导书上要求解答的思考题。

七、思考题

1、此种方法还可适用于哪种污水中大肠杆菌的测定？

2、对于生活饮用水测定水中大肠杆菌可采用哪用方法？

八、实验成绩评定办法

本门实验课程考核成绩占课程总成绩的30％，考核分实验预习、实验过程操作、实验报告和实验技能等四个方面，其成绩计算为预习实验（包括资料搜集）占10%、实验过程操作（包括实验流程、调试过程）占25％、实验报告（包括原理描述、数据记录、实验结果和效果）占25％、实验技能考核（包括解决问题的能力）或考试占40％。凡考核不及格者，应参加补考或重修。