（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，
让这些细胞生长和繁殖。
（2）动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白
酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
（3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁
细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。（4）动物细胞培养需要满足以下条件①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。
此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃＋0.5℃；pH：7.2～7.4。
④气体环境：95%空气＋5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。
（5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。2.动物体细胞核移植技术和克隆动物
（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。
（2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富。卵细胞的细胞质可使体细胞细胞核全能性得到表达。（3）体细胞核移植的大致过程是：（右图）
核移植
胚胎移植
（4）体细胞核移植技术的应用：
①加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育； ②保护濒危物种，增大存活数量；③生产珍贵的医用蛋白； ④作为异种移植的供体；⑤用于组织器官的移植等。
（5）体细胞核移植技术存在的问题：
克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。3.动物细胞融合
（1）动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两
个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。
（2）动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类
似，常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。
（3）动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物生物新品种
培育的重要手段。4.单克隆抗体
（1）抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。（2）单克隆抗体的制备过程：
两次筛选:第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。（3）杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。
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（4）单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。（5）在腹腔内增殖的优点：不需要特定的培养基，不需要严格的外界条件。（6）筛选的时候用：特定的选择性培养基进行筛选。抗原注入小鼠体内分离B淋巴细胞细胞融合杂交瘤细胞细胞培养（5）单克隆抗体的作用：选择培养细胞① 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、小鼠内培养基快速的优点。体内培养体外培养② 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”（借助单克隆抗体的导向作用），也从腹水提取从培养液提取有少量用于治疗其它疾病。单克隆抗体专题3 胚胎工程〖3.1 体内受精和早期胚胎发育〗胚胎工程的建立场所：睾丸的曲细精管时间：从初情期开始，到生殖机能衰退精子的发生 1）精原细胞→多个初级精母细胞（通过数次有丝分裂）过程 2）1个初级精母细胞→2个次级精母细胞→4个精子细胞（通过减数分裂，即MI和MII）3）精子细胞→精子（通过变形） 场所：卵巢 时间：从胎儿时期开始（胎儿时期完成了卵泡的形成和在卵巢内的储备）卵子的发生 1）卵原细胞→初级卵母细胞过程 2）1个初级卵母细胞→1个次级卵母细胞＋第一极体（排卵前后完成）3）1个次级卵母细胞→1个卵子＋第二极体（精子和卵子结合过程中完成） 概念：精子和卵子结合成合子（受精卵）的过程。 受精 场所：雌性的输卵管内1）受精前的准备阶段1：精子获能 过程 2）受惊前的准备阶段2：卵子的准备（到减数第二次分裂中期，具备与精子受精的能力）a.精子穿越放射冠和透明带：顶体反应，透明带反应3）受精阶段 b.进入卵黄膜：卵黄膜封闭作用c.原核形成和配子结合 卵裂期：细胞在透明带中进行有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加，或略有减小。早期胚胎发育 桑椹胚：胚胎细胞达32个左右，每一个细胞都是全能细胞囊胚：有囊胚腔，出现孵化过程。内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织。滋养层将发育成胎膜和胎盘。原肠胚：内细胞团细胞形成外胚层和内胚层，滋养层发育成胎膜和胎盘，内胚层包围着原肠腔〖3.2 体外受精和早期胚胎培养〗试管动物技术：通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎（桑葚胚或囊胚）后，第 4 页 共 8 页骨髓瘤细胞再经移植产生后代的技术。 方法一：用促性腺激素处理，使其超数排卵，从中输卵管冲取精子（针对卵母细胞的采集 实验动物，家畜猪、羊等） 方法二：从屠宰母畜卵巢中采集方法三：借助超声波探测仪、内窥镜、腹腔镜等工具直接从活体母畜 卵巢中吸取（针对大家畜或大型动物，如牛） 体外受精 卵母细胞的培养：在体外人工培养成熟 精子的采集：方法有假阴道法、手握法和电刺激法等精子的获能：方法有培养法（通过获能培养液）、化学诱导法（通过肝素或钙离子载体A23187） 获能溶液或专用的受精溶液受精：获能的精子 ＋培养成熟的卵子 完成受精 胚胎早期培养 条件：受精卵在发育培养液中培养 培养液成分：无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等〖3.3 胚胎工程的应用及前景〗概念：是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体叫供体（遗传特性和生产性能优秀），接受胚胎的个体叫受体（有健康的体质和正常繁殖能力）。应用：胚胎移植是转基因、核移植、或体外受精等技术的最后一道“工序”现状：在牛的胚胎移植中，技术方法更为简便、实用。意义：可充分发挥雌性优良个体繁殖潜力。供体主要职能只是产生优良特性的胚胎，缩短繁殖周期胚胎移植成功与否关系到：供体和受体的生理状况胚胎移植 1）供、受体生殖器官的生理变化相同，为胚胎提供相同的生理环境生理学基础 2）早期胚胎没有与母体子宫建立组织联系，为胚胎收集提供可能3）受体对外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，为胚胎的存活提供可能4）胚胎能与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但其遗传物质在孕育过程中不受影响1）供、受体的选择和处理（使用激素进行同期发情处理、（促性腺激素）超数排卵处理）2）配种或人工受精基本程序 3）胚胎收集（冲卵（早期胚胎））、检查（胚胎发育到桑椹胚或囊胚）、培养或保存（－196℃的液氮）4）胚胎移植：手术法（引出子宫和卵巢将其注入）；非手术法（用移植管将其送入子宫）5）移植后的检查（是否妊娠）等 概念：指采用机械方法将早期胚胎切割成2、4或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。 仪器设备：实体显微镜和显微操作仪 意义：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，属于无性繁殖。操作程序 1）选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚，移入盛有操作液的培养皿胚胎分割 2）用分割针或分割刀切开胚胎，吸出半个，注入空透明带或直接将裸半胚移植给受体。分割囊胚时要 将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。此时还可用分割针分割滋养层，做胚胎DNA分析性别鉴定。局限：刚出生的动物体重偏低，毛色和斑纹上存在差异，同卵多胎的可能性有限。概念：由早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞。简称ES或EK细胞。特点 形态上：体积小、细胞核大、核仁明显 功能上：具有发育的全能性，即可分化为成年动物体任何一种组织细胞；在体外可胚胎干细胞 增殖而不发生分化；可冷冻保存；可进行遗传改造第 5 页 共 8 页 1）移植ES细胞修复坏死或退化部位，治愈糖尿病、肝(心)衰竭、成骨不良等病症 意义 2）ES细胞体外诱导分化，可培育人造组织器官，解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题 3）ES细胞在牛黄酸、丁酰环腺苷酸等分化诱导因子作用下可向不同类型组织细胞分化（一）动物胚胎发育的基本过程1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。经过处理后获得的胚胎，还需移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。（二）胚胎干细胞3、胚胎干细胞的主要用途是：①可用于研究哺乳动物个体发生和发育规律；③可以用于治疗人类的某些顽疾，如帕金森综合症、少年糖尿病等；（三）胚胎工程的应用1.体外受精和胚胎的早期培养不同动物胚胎移植的时间不同。(牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植，小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植，人的体外受精胚胎可在8-16个细胞阶段移植。)专题4 生物技术的安全性和伦理问题（一）转基因生物的安全性争论 ：(1)基因生物与食物安全：反方观点：反对“实质性等同”、出现滞后效应、出现新的过敏原、营养成分改变正方观点：有安全性评价、科学家负责的态度、无实例无证据(2)转基因生物与生物安全：对生物多样性的影响反方观点：扩散到种植区之外变成野生种类、成为入侵外来物种、重组出有害的病原体、成为超级杂草、有可能造成“基因污染”正方观点：生命力有限、存在生殖隔离、花粉传播距离有限、花粉存活时间有限(3)转基因生物与环境安全：对生态系统稳定性的影响反方观点：打破物种界限、二次污染、重组出有害的病原微生物、毒蛋白等可能通过食物链进入人体正方观点：不改变生物原有的分类地位、减少农药使用、保护农田土壤环境（二）生物技术的伦理问题(1)克隆人：两种不同观点，多数人持否定态度。否定的理由：克隆人严重违反了人类伦理道德，是克隆技术的滥用；克隆人冲击了现有的婚姻、家庭和两性关系等传统的伦理道德观念；克隆人是在人为的制造在心理上和社会地位上都不健全的人。肯定的理由：技术性问题可以通过胚胎分级、基因诊断和染色体检查等方法解决。不成熟的技术也只有通过实践才能使之成熟。中国政府的态度：禁止生殖性克隆，不反对治疗性克隆。四不原则：不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人的实验。(2)试管婴儿：两种目的试管婴儿的区别两种。不同观点，多数人持认可态度。否定的理由：把试管婴儿当作人体零配件工厂，是对生命的不尊重；早期生命也有活下去的权利，抛弃或杀死多余胚胎，无异于“谋杀”。肯定的理由：解决了不育问题，提供骨髓中造血干细胞救治患者最好、最快捷的方法，提供骨髓造血干细胞并不会对试管婴儿造成损伤。(3)基因身份证：否定的理由：个人基因资讯的泄漏造成基因歧视，势必造成遗传学失业大军、造成个人婚姻困难、人际关系疏远等严重后果。肯定的理由：通过基因检测可以及早采取预防措施，适时进行治疗，达到挽救患者生命的目的。（三）生物武器 (1)种类：致病菌、病毒、生化毒剂，以及经过基因重组的致病菌。(2)散布方式：吸入、误食、接触带菌物品、被带菌昆虫叮咬等。(3)特点：致病力强、多数具传染性、传染途径多、污染面广、有潜伏期、不易被发现、危害时间长等。(4)禁止生物武器公约及中国政府的态度专题5 生态工程一、生态工程的基本原理1、生态工程的概念（1）原理技术第 6 页 共 8 页应用 生态学 和 系统学 等学科的基本理论和方法通过 系统设计、 调控 和 技术组装 （2）操作对 已破坏的生态环境 进行 修复、重建 对 已造成环境污染和破坏的传统生产方式进行 改善 （3）结果提高 生态系统的生产力 促进 人类社会和自然环境的和谐发展。2、生态工程所遵循的基本原理（1）.生态工程建设的目的：遵循 自然界物质循环的规律，充分发挥资源的生产潜力， 防止环境污染，达到 经济效益 和 生态效益的同步发展。（2）.生态工程的特点： 少消耗，多效益，可持续的生态工程。项目理论基础意义实例物质循环再生原可避免环境污染及影响物质循环无废弃物农业理系统的稳定和发展“三北”防护林建设中的单生态系统的生物多样性程度高，可提高物种多样性原理纯林问题，珊瑚礁生态系统稳定性系统的抵抗力稳定性的生物多样性问题生物与环境协调与平衡原理的协调与平可避免系统的失衡和破坏太湖富营养化问题衡社会、经济、统一协调各种关系，保障系林业建设中自然系统与社整体性原理自然统的平衡与稳定会、经济系统的关系问题复合系统系统的结构决定功能原理：分布改变和优化系统的结构以改桑基鱼塘式优善功能系统学和工程学于集中式和环式原理系统整体性原理：保持很高的系统生产力珊瑚礁藻类和珊瑚虫的关系整体大于部分二、生态工程的实例和发展前景1、生态工程的实例分析类型主要原理注意问题物质循环再生原理、整体性①核心：沼气工程原理、物种多样性原理农村综合发展型生态工程②优点：农林牧副渔全面发展；开发可更新资源，减少环境污染整体性原理、协调与平衡原①“综合”表现在同时考虑到生态效益和经济理、工程学原理效益小流域综合治理生态工程②不同气候带、不同自然条件和不同经济发展水平的地区，生态工程模式应各具特色物种多样性原理、协调与平工程建设中应注意的问题衡原理、整体性原理①考虑树种生态适应性问题，种植适宜品种大区域生态系统恢复工程②考虑树种多样性，保证防护林体系稳定③不同地区应根据当地情况采取不同策略湿地生态恢复工程协调与平衡原理、整体性原①主要措施：退耕还林理②主要困难：解决迁出湖区居民的生计问题系统学和工程学原理①种植耐旱的灌木、草和树矿区废弃地的生态恢复工程②确定合理载牧量③改良表土协调与平衡原理、整体性原①解决大气污染措施：禁止使用有铅汽油理城市环境生态工程②水污染：减少或禁止污水排放，进行污水净第 7 页 共 8 页化2、生态工程的发展前景（1）“生物圈2号”生态工程实验启示： 使人类认识到与自然和谐共处的重要性，深化了我们对自然规律的认识，即自然界给人类提供的生命支持服务是无价之宝。3、我国生态工程发展前景的分析与展望前景：解决我国目前面临的生态危机，生态工程是途径之一，需要走有中国特色的道路，不但要重视对生态环境的保护，更要注重与经济、社会效益的结合。存在问题：缺乏定量化模型的指导，难以设计出标准化、易操作的生态工程样板设计缺乏高科技含量，生态系统的调控缺乏及时准确的监测技术支持，缺乏理论性指导等。第 8 页 共 8 页
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