现代检验医学杂志第２９卷第１期２Ｏ１４年１月 Ｊ Ｍｏｄ Ｌａｂ Ｍｅｄ，ＶｏＩ．２９，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａ ２０１４ １Ｏ５ ＥＢ病毒和人巨细胞病毒核酸检测的实验研究 郭建巍 ，高毓蕊 ，田占月 ，陈昌国 ，王珍光 ，李文军 ，赵强元 （１．中国人民海军总医院检验科，北京摘要：目的１０００４８； ２．甘肃省第二人民医院体检中心，兰州 ７３００００） 检测血浆和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ｑ－ＥＢ病毒（ｅｐｓｔｅｉｎ ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）与人巨细胞病毒（ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏ— ｍｅｇａｌｏｖｔｒＵｓ，ＨＣＭＶ）ＤＮＡ含量，以期为两种病原体的早期诊断与监测提供敏感、准确、及时的实验室结果，并为两种病原 体感染的实验室诊断筛选出适宜的标本类型。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（ｒｅａｌ ｔｉｍｅ—ＰＣＲ）分别对２７０份血浆 和外周血单个核细胞中ＥＢ痛毒和ＨＣＭＶ病毒进行核酸检测并分析 结果 ２７０份血浆和外周血单个核细胞中ＥＢＶ ＤＮＡ检出率分别是３ｏ 和９６．７ ，血浆和外周血单个核细胞两种类型标本检测ＥＢＶ ＤＮＡ的联合检出率为１００ ；血浆 和外周血单个核细胞两种类型标本对ＨＣＭＶ ＤＮＡ检出率分别是４Ｏ 和８６．７ ，两种类型标本对ＨＣＭＶ ＤＮＡ的联合检 出率为ｉ００ 。结论 外周血单个核细胞标本对ＥＢ病毒和ＨＣＭＶ的检出率明显高于血浆标本，血浆和单个核细胞两种 类型标本对ＥＢＶ Ｄ Ａ和ＨｃＭＶ ＤＮＡ的联合检出率为１００ 。临床医生在疑似ＥＢＶ和ＨＣＭＶ感染患者的诊疗中要选 择适宜的标本类型；首选外周血单个核细胞标本进行检测，条件允许的情况下与血浆标本联合检测，以提高检测的敏感性 和准确性。 关键词：实时荧光定量聚合酶链反应；血浆；外周血单个核细胞；ＥＢ病毒；人巨细胞病毒 中图分类号：Ｒ３７３．１：Ｑ５０３文献标志码：ＡｄＯｉ：１０．３９６９／Ｊ．ｉｓｓｎ．１６７卜７４１４．２ｏ１４．Ｏ１ ０３６ 文章编号：１６７１—７４１４（２０１４）０１－１０５—０３ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｆｏｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ＤＮＡ ｏｆ Ｅｐｓｔｅｉｎ—Ｂａｒｒ Ｖｉｒｕｓ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ＧＵＯ Ｊｉａｎ—ｗｅｉ ÷ＧＡＯ Ｙｕ—ｒｕｉ。，ＴＩＡＮ Ｚｈａｎ—ｙｕｅ ，ＣＨＥＮ Ｃｈａｎｇ—ｇｕｏ ， ＷＡＮＧ Ｚｈｅｎ—ｇｕａｎｇ ，Ｌ１ Ｗｅｎ－ｊｕｎ ，ＺＨＡＯ Ｑｉａｎｇ—ｙｕａｎ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｎａｖｙ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ Ｌｉｂｅｒａｔｉｏｎ Ａｒｍｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００４８，Ｃｈｉｎａ；２．Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｃｈｅｃｋ－ｕＰ Ｃｅｎｔｅｒ，ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｇａｎｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｄ ｓｕｐｐｌｙ ａ ｍｄｒｅ ａｅｅａｆａｔｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｅａｒｌｙ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔ— ｍｅｎｔ；Ｅｐｓｔｅｉｎ—ｂａｉ ｒ ｖｉｒｕｓ ＤＮＡ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｔｎｅｇａｌｏ ｖｉｒｕｓ ＤＮＡ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｐｏｌ— ｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｔｗｏ ｋｉｎｄ ｓａｔｎｐｌｅｓ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ａｎｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｕ ｓｉｎｇ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，Ｅｐｓｔｅｉｎ—ｈａｒｒ ｖｉｒｕｓ ＤＮＡ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏ ｖｉｒｕｓ ＤＮＡ ｆｒｏｍ ２７０ ｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｐｌａｓｍａｓ ａｎｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ Ｅｐｓｔｅｉｎ—ｂａｒｒ ｖｉ— ｔＵＳ ＤＮＡ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｌａｓｍａｓ ａｎｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ３Ｏ ａｎｄ ９６．７ ．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ２ ｋｉｎｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｐｌａｓｍａ－ａｎｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕＣｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ａ ｈｉｇｈ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ １００％．Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏ ｖｉｒｕｓ ＤＮＡ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｐｌａｓｍａｓ ａｎｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｅｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ４０ ａｎｄ ８６．７ ．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ２ ｋｉｎｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ａｎｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ａ ｈｉｇｈ ｄｅｔｅｃｔｌｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ １００ ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ＤＮＡ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｐｅ— ｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ＣｅｌｌＳ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｉｎ ｐｌａｓｍａ．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ２ ｋｉｎｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ａｎｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ａ ｈｉｇｈ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ Ｗａｓ １ ００ ．Ｉｔ ｉｓ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｃｈｏｏｓｉｎｇ ａ ｃｏｒｒｅｃｔ ｓａｍｐｌｅ ｔｙｐｅ ｉｎ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｖｉｒｕｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｓａｍｐｌｅ ｏｆ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｔ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｆｉｒｓｔ ｃｈｏｏｓｉｎｇ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ａｎｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｅｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ｗｏｕｌｄ ｈａｖｅ ａ ｇｏｏｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｒｅｓｕｌｔｓ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｔＪＯｌｙｔｎｅｒａｓｅ ｃｈＭＮ ｒｅａｃｔｉｏｎ｝ｐｌａｓｍａ；ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ；ｅｐｓｔｅｉｎ—ｂａｒｒ ｖｉ— ｒｕｓ；ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏ ｖｉｒｕｓ ＥＢ病毒（ｅｐｓｔｅｉｎ—ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）和人巨细 测的标本类型主要为血浆和外周血单个核细胞，从 胞病毒（ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒＵｓ，ＨＣＭＶ）为人类 卫生经济学的角度到底哪种标本类型更适合或更 感染性疾病的常见病原。两种病毒感染机体后通 能对病毒核酸做出准确、敏感的检测呢？我们筛选 过检测血液中对应的病毒核酸就可对感染、进展及 出２７０份疑似ＥＢＶ和ＨＣＭＶ感染患者的血液进 转归做出判断。目前实验室对ＥＢＶ和ＨＣＭＶ检 行了比较研究，结果如下。 ＊作者简介：郭建巍（１９６５－－），男，博士，硕士研究生导师，主要从事临床分子诊断方商的研究・Ｅｍａｉｈｊｗｋｕｏ＠ｓｏｈｕ．ｃｏｉｎ，高毓蕊、田占月共为第一作者 １０６ 现代检验医学杂志第２９卷第１期２０１４年１月 Ｊ Ｍｏｄ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａ．２０１４ １材料与方法 １．１ 研究对象 ２０１２年１月～８月海军总医院血 本对ＥＢＶ ＤＮＡ的联合检出率为１００ 。 ２．２ ２７０份两种病毒感染患者血浆和单个核细胞 ＨＣＭＶ检测结果 ２７Ｏ份两种病毒感染患者血浆 和外周血单个核细胞检测ＨＣＭＶ ＤＮＡ检出率分 别是４０ （１０８／２７０）和８６．７ Ａ（２３４／２７０），血浆标 ｏ本的检出率明显高于外周血单个核细胞标本，经统 计学处理差异具有统计学显著性意义（Ｐ＜Ｏ．０１）， 液科和小儿科临床诊断疑似两种病毒感染患者的 ＥＤＴＡ抗凝全血。 １．２试剂与仪器 人淋巴细胞分离液（天津灏洋 生物制品科技有限责任公司）；ＥＢＶ和ＨＣＭＶ荧 光定量ＰＣＲ检测试剂（中山大学达安基因股份有 限公司）。荧光定量ＰＣＲ仪（美国ＡＢＩ公司ＳＴＥＰ 两种类型标本对ＨＣＭＶ ＤＮＡ的联合检出率为 ｏＮＥ）。 １．３ 实验方法 １．３．１血浆中病毒核酸的浓缩：取被检验者静脉 血２ ｍｌ，３ ０００ ｒ／ｒａｉｎ离心１０ ｍｉｎ，分离出血浆，吸 取１００ ｔＡ至ＥＰ管中与等量ＤＮＡ浓缩液充分混 匀，１３ ０００ ｒ／ｒａｉｎ离心１０ ｍｉｎ，弃上清液，留沉淀备 用。 １．３．２外周血单个核细胞的提取：吸取全血１ ｍ１ 至干燥试管中，加人生理盐水１ ｍｌ轻摇混匀。另 取干燥试管加入１ ｍｌ淋巴细胞分离液，将稀释好 的全血缓慢加入加有淋巴细胞分离液的试管中，２ ２００ ｒ／ｒａｉｎ离心１０ ｍｉｎ。将细胞层吸出至ＥＰ管 中，８ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，弃上清液，留沉淀备 用。 １．３．３两种类型标本中核酸的提取：分别向经初 步处理后的两种不同类型标本的沉淀ＥＰ管中加 入核酸裂解液３０ ｌ，漩涡震荡仪充分混匀后于 １００℃金属浴中恒温处理１０ ｍｉｎ，１２ ０００ ｒ／ｍｉｎ离 心５ ｍｉｎ，上清作为样本备用。 １．３．４荧光定量ＰＣＲ的操作及结果判断：按比例 （ＥＢＶ／ＨＣＭＶ的ＰＣＲ反应液４０“ｌ／人份＋Ｔａｐ 酶３ ｕｌ／人份）配制反应体系并以４３ ｕｌ／管分装。 分别加入处理后的样本２ ｌ于体系中，在ＦＱ－ＰＣＲ 仪器中反应。条件：５０℃２ ｍｉｎ，９５℃１５ ｍｉｎ，９４℃ １５ Ｓ，５５。Ｃ ４５ Ｓ（收集荧光），共４０个循环。每次实 验均设阴性质控、阳性质控，分别以阳性定量参考 品１Ｏ ，１Ｏ ，１Ｏ ，１Ｏ 浓度绘制标准曲线，并进行曲 线的相关与回归。结果判定：检测到核酸扩增，增 长曲线呈Ｓ型曲线趋势，判断为检出；无扩增曲线 判断为阴性。 １．４统计学分析 用ＳＰＳＳ１８．０统计软件，采用 。检验。 ２ 结果 ２．１ ２７０份两种病毒感染患者血浆和单个核细胞 ＥＢＶ检测结果 ２７０份两种病毒感染患者血浆和 外周血单个核细胞ＥＢＶ ＤＮＡ检出率分别是３Ｏ （８１／２７０）和９６．７ （２６１／２７０），血浆标本的检出率 明显高于外周血单个核细胞标本，经统计学处理差 异具有统计学显著性意义（Ｐ＜０．０１），两种类型标 １００ 。 ３讨论 实时荧光定量ＰＣＲ检测病毒ＤＮＡ具 有高灵敏度和高特异度，可以在感染早期明确病 因，能准确及时地反映病毒在体内的消长情况，因 此成为检测病毒常用的实验手段。本研究用实时 荧光定量ＰＣＲ法对２７０份标本中ＥＢＶ和ＨＣＭＶ 两种病毒核酸进行了检测，旨在探讨哪种标本类型 对疾病诊治和监测更具指导意义。 ＥＢＶ是一种嗜人淋巴细胞的双链ＤＮＡ疱疹 病毒＿１］。通常在受染细胞中以增殖性感染和潜伏 性感染两种状态存在，在增殖性感染中，ＥＢＶ基因 经合成ＥＢＶ早期抗原、ＥＢＶ壳抗原和ＥＢＶ膜抗 原等步骤组成完整的病毒颗粒而释放，从而导致受 染细胞的溶解死亡。在潜伏性感染，ＥＢＶ通过免 疫逃逸机制避开宿主免疫反应而感染Ｂ淋巴细 胞，病毒在Ｂ淋巴细胞不进行增殖，却表达１１种基 因产物。我们的检测结果：血浆标本和外周血单个 核细胞标本ＥＢＶ ＤＮＡ的检出率分别是３Ｏ 和 ９６．７ ，两者之问有明显的差异。结果提示：ＥＢＶ 感染的不同阶段单个核细胞中ＥＢＶ ＤＮＡ均有一 个较高的检出情况，在临床选择标本类型中应首选 单个核细胞作为检测对象，而两种方法的联合检出 率为１００ ，提示血浆标本不容忽视，血浆标本可 作为单个核细胞标本类型的有益补充，两者联合检 测可提高病毒核酸检出率。 ＨＣＭＶ是一种双螺旋ＤＮＡ病毒，也是疱疹 病毒家族中的重要成员。ＨＣＭＶ在世界范围内广 泛传播，感染大多数人，病毒长期潜伏于宿主细胞， 呈隐性感染，当妇女妊娠时，造成胎儿宫内感染，导 致流产、早产、死胎或胎儿先天畸形ｌ２］。当骨髓移 植、肝、肾、心脏等器官移植患者免疫功能受损时， 潜伏病毒被激活，增殖而发生严重感染，将导致患 者器官移植失败甚至死亡ｌ３“］。 既然ＨＣＭＶ长期潜伏于宿主细胞，呈隐性感 染，单个核细胞可作为首选标本，我们的检测结果 外周血单个核细胞ＨｃＭＶ ＤＮＡ检出率高于血浆 （８６．７ ｖｓ ４０ ）也进一步验证了上述理论，血浆 标本和外周血单个核细胞标本联合检出率为 １００ ，提示在疾病进程中血浆标本也不容忽视，两 现代检验医学杂志第２９卷第１期２０１４年１月 Ｊ Ｍｏｄ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａ．２０１４ １０７ ｎ ＭＡ，Ａｃｈｏｎｇ ＢＧ，Ｂａｒｒ ＹＭ．Ｖｉｒｕｓ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ ｒ－１］ Ｅｐｓｔｅｉ者联合检测可提高病毒核酸的检出率。 ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｓ ｆｒｏｍ ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ ｌｙｍｐｈｏｍａＥＪ３． ＰＢＭＣ作为外周血中重要的抗原呈递细胞，在 Ｌａｎｃｅｔ，ｌ９６４，ｌ（７３３５）：７０２—７０３． 系列病毒性疾病的发生和发展中发挥着非常重 ｇ ＭＪ．Ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｉｃｒｏａｒ— ［２］ Ｓｔｏｅｖｅｓａｎｄｔ Ｏ，Ｈｅ Ｍ，Ｔａｕｓｓｉ要的作用。在病毒的潜伏阶段对ＰＢＭＣ中的病毒 ｒａｙｓ ｐｒｉｎｔｅｄ ｆｒｏｍ ＤＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏ１，２Ｏ１１，６７１（１）：９５—１Ｏ６． 核酸进行检测可以对疾病进行早期的诊断和发展 Ｏ，Ｖｅｔｔｅｒ Ｍ。Ｋａｓｔｅｌｉｃ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｃｅｌｌ ｆｒｅｅ Ｓｔｏｅｖｅｓａｎｄｔ评估；一旦病毒在ＰＢＭＣ中进行增殖，必然会造成 ［３］ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｕｔ ｏｎ ｔｈｅ ｓｐｏｔ：ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ 细胞的损伤和破裂，病毒释放入血液，此时对血浆 ｐｒｏｔｅｉｎ ａｒｒａｙｉｎｇ ｆｒｏｍ ＤＮＡ（ＤＡＰＡ）［Ｊ］．Ｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎ— 进行检测具有非常重要的意义。建议临床在选择 ｏｌ，２０１１，２８（３）：２８２—２９０． ｂｅｒ ＳＬ．Ｐｒｉｎｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｓ ｍｉ— 上述ＥＢＶ和｝｛ＣＭＶ病毒核酸检测的时候兼顾血 Ｅ４３ ＭａｃＢｅａｔｈ Ｇ，Ｓｃｈｒｅｉｃｒｏａｒｒａｙｓ ｆｏｒ ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ 浆和ＰＢＭＣ两种类型标本，两种标本类型联合检 ｌ Ｊ ｊ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００，２８９（５４８５）：１７６０—１７６３． 测可提高病毒核酸的检出率。 收稿日期：２０１３－０９—１７ 修回日期：２０１３－ｌ１—２５ 一参考文献： （上接１０４页）人群中患病率为１．９ ，大多数病例 如及早诊治；可以得到治愈，且大多数嗜铬细胞瘤 是临床可以治愈的一种继发性高血压。 ｕｓｉｎｇ ｍｉｃｒｏ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ＶＭＡ ｉｎ ｔｈｅ ｕｒｉｎｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｒｄｅｒｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄ— ｉｃｉｎｅ，２００３，１８（１）：１４－１５． 我们自２００５年１月以来，逐步建立并完善了 微柱分光度法的检测技术，并将此方法应用于临床 多种疾病的常规检测。对２ ０００多例门诊及住院 患者样本进行２４ｈ尿液１７－ＯＨ，１７一ＫＳ和ＶＭＡ的 检测和临床观察。本研究随机选取２０ｉ０年４月以 ［６］ 张华，李永兴．高效液相电化学法检测尿儿茶酚胺 和ＶＭＡ诊断嗜铬细胞瘤［Ｊ］．现代检验医学杂志， ２００３，１８（３）：８－９． Ｚｈａｎｇ Ｈ，Ｌｉ ＹＸ．Ｕｒｉｎａｒｙ ｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｓ ａｎｄ ＶＭＡ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｇｙ （ＨＰＬＣ）ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＥＣＤ）ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏ— 来３４９例住院患者作为研究对象，探讨肾上腺皮质 及髓质激素代谢产物的检测对临床诊治过程的指 ｓｉｓ ｏｆ ｐｈｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａｌ，Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｌａ— ｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００３，１８（３）：８－９． 导作用，为临床疾病诊断、鉴别诊断、预后判断以及 治疗提供有力的理论依据。 参考文献： Ｌ．Ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ，ｒａｐｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｆｒｅｅ ａｎｄ ［１］ Ｋｏｒｎｅｌ ａ１．Ｌｉｑｕｉｄ ［７］ Ｍａｇｅｒａ ＭＪ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＡＬ，Ｍａｔｅｒｎ Ｄ，ｅｔｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｔａｎｄｅｍ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｎｉｌｌｙｌｍａｎｄｅｌｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｕｒｉｎｅ ［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，４９（５）：８２５—８２６． ｍａｎ Ｐ，Ｂｏｒｓｔｒｏｋ Ｊ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｕｒｉｎａｒｙ ｖａ－ ［８］ Ｍｏｌｎｉｌｌｙｌｍａｎｄｅｌｉｃ ａｃｉｄ ｂｙ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ １７一ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒａｉｄｓ ｉｎ ｕｒｉｎｅ［Ｊ］． Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，１９５９，８（４Ｐｔ１）：４３２ ４４０； ｗｏｄ ＡＪ，Ｋｎｉｇｈｔ Ｒ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ３－ｍｅ— ［２２ Ｗｏｉｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ，１ ９８３，２９ （５），８７８—８８１． ｔｈｏｘｙ ４－ｈｙｄｒｏｘｙ ｍａｎｄｅｌｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｕｒｉｎｅ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ，１９６２，１５（４）：３８８—３８９． ［９］ 李 伟，吴惠毅．尿液香草扁桃酸和高香草酸检测的 方法学及临床意义［Ｊ］．１临床检验杂志，２００９，２７（３）： ２３８—２４Ｏ． ［３］ Ｒｉｃｈａｒｄｓ ＤＡ．Ｄｅｔｅｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ４－ｈｙｄｒｏｘｙ－３一ｍｅｔｈｏｘｙ— ｍａｎｄｅｌｉｃ ａｃｉｄ（ＨＭＭＡ）ｉｎ ｕｒｉｎｅ Ｉ－Ｊ］．Ｍｅｄ Ｌａｂ Ｓｅｉ÷ １９７６，３３（２）：１５５—１６０． Ｌｉ Ｗ。Ｗｕ ＨＹ．Ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｕｒｉｎａｒｙ ｖａ— ｎｉｌｌｙｌｍａｎｄｅｌｉｃ ａｃｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｈｏｍｏｖａｎｉｌｌｉｃ ａｃｉｄ ｄｅ— Ｅ４２ 余斌杰；符名潮，黄葆钧，等．尿３一申氧基一４羟苦杏仁 ｔｅｃｔｌｏｎ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００９，２７（３）：２３８—２４０． ｄｒｕｇｓ ｏｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｔ— ［１ｏ］ Ｙｏｕｎｇ ＤＳ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ酸（ＶＭＡ）重氮法与吲哚法测定比较ＥＪ３．中山医学院 学报，１９８０，１（２）：１６８—１７６． Ｙｕ ＢＪ，Ｆｕ ＭＣ，Ｈｕａｎｇ ＢＪ，ｅｔ ａ１．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｒｍｉ ｎａｔｉｏｎ ｏｆ ３－Ｍｅｔｈｏｘｙ一４一Ｈｙｄｒｏｘｙ－Ｍａｎｄｅｌｉｃ Ａｃｉｄ （ＶＭＡ）ｉｎ ｕｒｉｎｅ—Ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａ１ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｉｎｄｏｌｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ａｎｄ ｄｉａｚｏｔｉｚｅｄ Ｐ—－ｎｉｔｒｏ—－ ｅｓｔｓＥＪ］．４ｔｈ Ｅｄ．ＡＣＣＰｒｅｓｓ，１９９５． ［１１］ 饶莉．继发性高血压诊断思路［Ｊ］．现代临床医学， ２Ｏ１１，３７（４）ｔ３１２ ３１４． Ｒａｏ Ｉ ．Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｌＪ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２Ｏ１１，３７（４）：３１２－３１４． ａｎｉｌｉｎｅ ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｅｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｕｎ Ｙａｔ—ｓｅｎ ＵｎｉＶｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃａ１ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ），１９８０。１ （２）：１６８—１７６． ［１２２ 赵宝珍．肾上腺疾病与高血压［Ｊ］．山西医药杂志， ２００９，３８（６）：３－６． ［５］ 陈曼娜，廖 瑛，俞纯山 等．微柱比色法检测尿液 ＶＭＡ含量的评价［Ｊ］．现代检验医学杂志，２００３，１８ （１）：１４－１５． Ｚｈａｏ ＢＺ．Ａｄｒｅｎａｌ ｇｌａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ［Ｊ］．Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，２００９，３８（６）：３－６． 收稿日期：２０１３－０７—１０ 修回日期：２０１３－１０ ２８ Ｃｈｅｎ ＭＮ。Ｌｉａｏ Ｙ，Ｙｕ ＣＳ，ｅｔ ａ１．Ｔｏ ｅｎｖａｌｕｅ ｔｈｅ ｗａｙ ｏｆ
