维普资讯 http://www.cqvip.com ·论著· 2007年8月第4卷第24期 革兰阴性茵脓毒血症患者早期N K细胞 及可溶性粒细胞靶受体对病人预后的影响 高学军’,鲍翠霞 ,聂大平 (1.青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院检验中心,山东烟台264000; 2.大连医科大学附属第二医院微生物室,辽宁大连 116000) 【摘要】目的:探讨革兰阴性菌脓毒血症患者早期NK细胞及血清可溶性粒细胞靶受体(sTREM一1)对病人预后的影 响。方法:脓毒血症发生后12 h内,采集49例高度怀疑革兰阴性菌感染患者的外周血,应用流式细胞术分析NK细 胞,ELISA法测定血清sTREM一1的浓度,同时使用生物梅里埃API20E鉴定系统进行细菌鉴定;采集16个健康人的 血样品作为对照。结果:49例患者均确诊为革兰阴性菌感染。与对照组相比。脓毒血症患者外周血NK细胞明显增多 (P<0.01),且淋巴细胞中NK细胞比例>20%的患者生存期长于NK细胞≤20%的患者(P<0.05)。患者血清sTREM一1 水平较对照明显增高(P<0.01),且血清sTREM一1浓度>180 pg/ml的患者生存期长于sTREM一1浓度≤180 pg/ml的患 者(P<0.05)。结论:革兰阴性菌脓毒血症患者早期NK细胞增加和血清sTREM一1水平增高可改善患者的生存期。 【关键词1脓毒血症;革兰阴性茵;NK细胞;血清可溶性粒细胞靶受体 【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】1673—7210(2007)08(c)一014—03 The prognostic influence 0f NK cells and sTREM-1 on the patients with ear· ly severe Gram-negative sepsis GA0 Xue4un1,BA0 Cui-xia1,NIE Da-pinf (1.Center of Laboratory Medicine,The Afifliated Yuhuangding Hospital of Qindao University Medical College,Yantai 264000,China;2.Department of Microorganism,The Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University,Dalian 1 1 6000,China) [Abstract]Objective:To explore the prognostic influence of NK cells and soluble tirggering receptor expressed on myeloid cells一1 fsTREM一11 on the patients with early severe Gram—negative sepsis.Methods:Within 12 hours of the advent of se— vere sepsis,blod was smplaed from 49 patients who were highly suspected being infected by Gram-negative pathogens. And blood sampled from 16 healthy was as the contro1.NK cells were targeted wih monoelonatl antibodies and were ana— lyzed by flow cytometry.Serum sl’REM-1 was determined by ELISA.At the same time pathogenic bacteria Was identiied fby API20E system.Results:NK cells were signiicantfly higher in the patients with sepsis than those in the control fP< 0.011;and patients with NK ceUs>20%survived longer compared with those patients wiht NK cells≤20%fP<0.05).The serum levels of sTREM一1 were signiicantfly elevated in the patients with severe sepsis compared with the"controls fP< 0.01);and patients with sTREM-I>180 pg/ml survived longer compared with those patients witll sTREM一1≤180 pg/m(P< 0.05).Conclusion:The increase of NK cells and serum level of sTREM一1 Can improve he sturvival of patients witll early severe Gram——negative sepsis. [Key words]Pyemia;Gram-negative bacteria;NK cells;sTREM-1 在脓毒血症的发病过程中,NK细胞作为淋巴细胞的一 个亚群,发挥着先天免疫的作用『l1。同时,中性粒细胞和单核 细胞在脓毒血症时,细胞膜上表达粒细胞靶受体121,其可溶性 形式即血清可溶性粒细胞靶受体(soluble triggering receptor expressed on myeloid cells一1,sTREM一1)作为抗炎介质,与脓 49例,其中急性肾盂肾炎24例,急腹症18例,医原性肺炎7 例。所有病例在过去12 h内均有脓毒血症的症状,其临床特 征见表1,脓毒血症诊断标准是:感染性疾病基础上发生一 个以上器官的急性功能障碍,即出现一个以上脓毒血症体征阁。 选取临床健康查体者16例作为对照组,其中男10例,女6 例,平均年龄56岁,均无感染性疾病,无肝、肾及心脑血管疾 病,血常规、尿常规、血糖及心电图均正常。 1.2试剂与仪器 毒血症向脓毒血症性休克转化有密切关系刚。本课题通过对 49例革兰阴性菌感染的脓毒血症患者外周血的研究,探讨 脓毒血症早期NK细胞及血清sTREM一1水平对患者预后的 影响。 1资料与方法 1.1研究对象 荧光标记单克隆抗体试剂由美国BD公司提供。‘NK细 胞检测使用美国BD公司FacsCalibur流式细胞仪。血清 sTREM一1 ELISA检测试剂盒购自上海科华公司,使用an— thos2010酶标仪检测。 我院2006年1月至2007年1月的早期脓毒血症患者 1 4巾国医药导报CHINA MEDICAL HERALD 维普资讯 http://www.cqvip.com 2007年8月第4卷第24期 表1 49例早期脓毒血症病人的临床特征 特征 脓毒血症 年龄(岁) 67 男/女(例) 31/18 感染类别 急性肾盂肾炎(例) 24 急腹症(例) 18 医院性肺炎(例) 7 感染病原体 大肠杆菌(例) 26 肺炎克雷伯杆菌(例) l1 硝酸盐阴性不动杆菌(例) 9 摩氏摩根菌(例) 3 1.3方法 1.3.1标本采集在发生脓毒血症后12 h内采集每一病例的 静脉血10Ⅱll,其中加5 ml到培养瓶中进行细菌培养;加3 ml 到Sysmex公司EDTA抗凝管中,用于NK细胞测定;剩下2 ml加到无菌试管中,离心后将血清保存于一60℃,用于测定血 清sTREM一1水平。对照组的血样采集同上。 1.3.2细菌鉴定培养瓶培养7 d,细菌鉴定使用生物梅里埃 API20E鉴定系统。 1.3.3 NK细胞检测NK细胞由CD3一CD16’CD56’而确定。用 BD公司的Cellquest软件进行测定和分析.每次获取1 000 个细胞,统计结果。 1.3.4 sTREH—l测定采用双抗体夹心酶免分析法.操作按 照试剂盒说明进行。 1.4统计学方法 NK细胞测定结果用中位数和四分位间距表示,两组间 比较用t检验:计数资料用X 检验;生存时间用Kaplan— Meier生存曲线表示.采用Log—rank检验。P<0.05为差异有统 计学意义。 2结果 49例患者均确诊为革兰阴性菌感染。 早期脓毒血症病人与对照组NK细胞的比较见表2。从 表中可以看出。早期脓毒血症病人NK细胞数较对照组明显 增高(P<0.01)。从表3可以看出脓毒血症患者早期血清 sTREM一1水平增高.与对照组相比差异有统计学意义(P< 0.01)。 据NK细胞数量划分的病人的生存曲线见图1。图中 可见淋巴细胞中NK细胞比例>20%的患者生存期长于NK 细胞≤20%的患者(P<0.05)。38例NK细胞≤20%的患者 中有24例死亡(占63.2%).而11例NK细胞>20%的患者 中有3例死亡(占27.3%),两者比较差异有统计学意义 (P<0.05)。 据血清sTREM一1水平划分的病人的生存曲线见图2。 图中可见血清sTREM一1浓度>180 pg/ml的患者生存期长 于sTREM一1浓度≤180pg/ml的患者(P<0.05)。33例 sTREM一1浓度≤180 pg/ml的患者中有22例死亡(占 66.7%),而16例sTREM一1浓度>180 pg/ml的患者中有5 例死亡(占31.3%),两者比较差异有统计学意义(P< 0.05)。 ·论著· 表2 49例早期脓毒血症患者与16例健康对照组外周血NK细胞的 检测结果 表3 49例早期脓毒血症患者与16例健康对照血清sTREM一1的 检测结果 1 Ill 辇 军 ‘ 柏p4州 OD 生存时间(天) 图1不同NK细胞数■患 图2不同sTREM一1浓度患者 者的生存率曲线 的生存率曲线 3讨论 细菌感染导致的脓毒血症是一种严重的临床疾病,病死 率较高。脓毒血症患者发生器官衰竭后的短时间内体内免疫 状态会发生一系列的改变,这些早期改变与脓毒血症从一个 阶段向另一个阶段的转变有关,更重要的是这些变化可影响 患者的预后[61。本研究所选患者经血培养均证实为G一菌感染。 选择研究G『菌感染的原因.是由于临床上发生C『菌病原体 感染的频率较高 。本试验揭示了 菌脓毒血症发生后12 h 内NK细胞及血清sTREM一1水平的变化。 Hotchkiss等[81.对脓毒血症病人尸解获得的脾细胞进行 免疫表型分析.发现NK细胞数量增加,但与对照相比差异 无统计学意义。但我们的研究结果证实,脓毒血症早期NK 细胞明显增加,与对照组比较差异有统计学意义。另外,动物 链球菌感染的实验研究表明,NK细胞增加会导致实验动物 免疫应答增强 Ol。本课题通过对G一菌脓毒血症患者的研究 发现.NK细胞在淋巴细胞中比例>20%时,病人的生存时间 明显延长。这可能与NK细胞的先天免疫作用有关,但具体 机制有待进一步研究。 本研究还发现,脓毒血症病人早期血清sTREM一1水平 增加.同时生存曲线显示.当血清sTREM一1水平>180 pg/, ̄ 时.病人生存时间明显延长。这可能是因为sTREM—l是一种 新的抗炎介质,在脓毒血症时发挥抗炎的作用圈。据报道,sTREM一1 与NK细胞膜上的NKp44受体功能相似_1】1,但NK细胞本身 能否产生sTREM一1未见有报道。如果脓毒血症病人的NK 细胞能产生sTREM一1,就可以说明在脓毒血症早期NK细胞 增加对机体具有保护作用。 脓毒血症早期NK细胞数量及sTREM一1浓度增加对机 体具有某种保护作用,它们能够延长病人的生存时间,改善 病人的预后 CHINA MEDICAL HERALD巾目医药导报1 5 维普资讯 http://www.cqvip.com 论著· 2007年8月第4卷第24期 良、恶性胃病变组织表达C EA m RNA的差别 王竹君,李玲,孙宝信,申兴彬,胡建功,薛承岩 (承德医学院附属医院中心实验室,河北承德067000) 【摘要】目的:研究良、恶性胃病变组织表达癌胚抗原(CEA)mRNA的差别,评估其在胃癌诊断中的应用价值。方法: 以胃癌和良性胃病组织为检测标本,应用反转录套式聚合酶链反应技术检测CEA mRNA。结果:胃癌组织CEA mRNA的阳性表达率为82.4%、良性胃病组织标本为6.7%,差别有统计学意义 <0.01)。应用CEA mRNA指标诊断 胃癌的特异性为93I3%、敏感性为82.4%。结论:CEA mRNA在胃细胞恶性变时有高水平的表达,检测组织标本CEA mRNA指标诊断胃癌具有较高的应用价值。 『关键词】CEA mRNA;胃癌;胃良性病变 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1673—7210(2007)08(c)一016—02 Study on the diferent expression of carcinoembryonic antigen messenger ri- bonucleic acid in benign and malignant pathological changes of gastric tissues WANG Zhu-jun,LI Ling,SUN Bao-xin,SHEN Xing-bin,HU Jian-gong,XUE Cheng-yan (Center Laboratory,Affiliated Hospital of Chengde Medical College,Chengde 067000,China) [Abstract]Objective:To study the diferent expression of carcinoembryonic antigen messenger ribonucleic acid(CEA mR- NA)in benign and malinantg gastirc tissues,and acquaint the applied value of CEA mRNA in gastirc tissue to diagnose gastric cancer.MethOds:There were 107 patients with gastric cancer and 105 patients with gastric benin leions in tghe study.CEA mRNA in the specimens was detected by reverse transcriptase—nested primers—polymerase chain reaction rRT— NP—PC R),while cancer cells were detectd by reoutine pathologic method.Results:The positive results of CEA mRNA were 82.4%in the gastic cancer tirssues and were 6.7%in the gastic benign lresion tissues.The difference positive expres- sion results of CEA mRNA were sinigifcant(P<0.01)between the gastirc cancer tissues and gastirc benin tgissues.The speciifcity was 93-3%and the sensitivity was 82.4%on CEA mRNA in diagnosing gastric cancer.Conclusion:The expres- sional level of CEA mRNA is higher in gastric cancer tissue.CEA mRNA is a useful index in diagnosis of gastric cancer. [Key words】Carcinoembryonic antigen mRNA;Gastirc cancer;Gastirc benin lgesion 目前认为,细胞恶性变时相关的肿瘤特异性mRNA呈高 水平表达,与检测肿瘤相关蛋白比较,检测细胞内的指导合 性胃病变组织CEA mRNA的表达情况,旨在了解CEA mR. NA在诊断与鉴别诊断胃癌方面的应用价值。 1材料与方法 1.1研究对象 成肿瘤相关蛋白的mRNA.对诊断与监测恶性肿瘤有更高的 特异性和敏感性。癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA) mRNA是一种mRNA类肿瘤特异性标志。本研究检测良、恶 选取212例胃病住院患者为研究对象,均经临床检查、 【参考文献】 [1]Emoto M,Miyamoto M,Yoshizawa I,et o1.Critical role of NK cells rather than Vd14+NKT cells in lipopolysaccharide induces lethal shock 1084—1()93. [7]Annane D,Aege ̄er P,Jars-Guineestre MC,et .Current epidemiology of septic shock The CUB-Rra network.Am J Resp Crit Care Med,2003, in mice『J1.J Inmmnol,2002,169(3):1426—1432. [2】Bouchon A,Facchetti F,Welgand MA,et O1.TREM—l ampliifes inflam— 168(2):165-172. [8】Hotehkiss RS,Tinsley KW,Swanson PE,et o1.Sepsis—induced apoptosis causes progressive profound depletion of B and CD4+T lymphocytes in mation andisa crucialmediatorofseptic sh0ck Nature,2001,410(6832): 1103—1107. humans叨.J Inmmnol,2001,166(1):6952-6963. 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