・８６８‘ 塞旦医堇杂蠢２ 年８ Ｂｇ ２０卷第８期Ｊａｕｒｎａｌ ０ｆＰｍｃｔｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｉａｕｅｓ，Ａｕｇｕ８ｔ ２０１３，Ｖｏ１．２０，Ｎｏ．８ 腺癌组织中细胞外基质中Ｉ型、Ⅳ型胶原蛋白的表达作了 初步探讨，发现Ⅳ型胶原蛋白主要在纤维囊性乳腺病囊肿 包膜和乳腺癌组织（细胞与基底膜）中呈阳性或强阳性表达， 两者在组织发生与发展、分化与变异等方面可能存在着联 【４】Ｌｕｃｋ ＭＲ，Ｚｈａｏ Ｙ．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｖｉｎｅ ｃｏｒｐｕｓ ｌｕｔｅｕｍ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｉｔｈ ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ ｎｄ ｔａｉｓｓｕｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｆｅｒｔｉｌ，１９９３，９９（２）：６４７—６５２． 【５】姜彬．蛋白质免疫印迹分析法实验条件的研究．实验技术与管 理，２０ｏ８，２５（５）：５３—５５． 系，为进一步研究乳腺癌癌前病变与乳腺癌之间的关系提供 参考。 【６】魏权，杨湘越，兰小鹏．人自身抗原ＳＳＡ／Ｒ０６０的基因克隆和 参考文献 …ｔ 田斌，孙涛，牛虎，等．ＰＴＥＮ，ＰＣＮＡ，１Ｖ型胶原在乳腺癌中的 原核表达．实用医技杂志，２００５，１２（１２Ａ）：３３９３—３３９４． 【７】张健康，李晓丽，李亮成，等．Ⅳ型胶原、层黏连蛋白、纤维黏 连蛋白在胃癌中表达及意义．山西医科大学学报，２００２，１４ （２）：１０３．１０４． 表达及其临床意义．第四军医大学学报，２００８，２９（５）：４５７ ４６０． ［２】周云海，刘学忠，周士福，等．层黏连蛋白、尿激酶型纤溶酶 原激活物在乳腺浸润性导管癌中的表达及其相关性．中国临 床医学，２００９，１６（５）：６７６．６７８． ［８］王芳，高进．小鼠肺腺癌体内、外生长、运动和侵袭与细胞外 基质相关性的研究．中华病理学杂志，１９９４，２３（２）：１０７． ［９】赵勇，蔡方，孟庆雯．乳腺癌血清纤维粘连蛋白、Ⅳ型胶原含 量变化及临床意义．实用癌症杂志，２００２，１７（６）：５９７．５９８． 【３］ 吕婉娴．血清ＰｍＮＰ、ＩＶ．Ｃ联合测定对肝硬化的诊断意义．实 用医技杂志，２００５，１２（１２Ａ）：３５６３． （收稿日期：２０１３．０３．２３） 检测乙型肝炎两对半三种常见方法的比较 四川省自贡市第四人民医￣（６４３ｏｏｏ） 四川省自贡市中心血站 李彬 刘先卉 乙型肝炎是乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）引起 的全球性传染病，全世界乙型肝炎携带者达５亿人之多，而 我国是ＨＢＶ流行地区，ＨＢＶ携带者占总人口的１０％以上，是 一１．２仪器、试剂：ＴＲＦＩＡ采用ＳＹＭ—Ｂ１０时间分辨荧光免疫测 量仪及Ｅｆｆｉｅｕｔａ全自动样本前处理系统，ＴＲＦＩＡ定量试剂盒 由苏州新波生物技术有限公司提供，批号：２０１１０８１５；ＥＬＩＳＡ 试剂盒由郑州安图绿科生物工程有限公司提供，批号： 种严重危害人类健康的疾病，血清学标志物检测为临床医 师提供了可靠的依据【１］，其防治的关键是早诊断、早接种、早 治疗。目前较为广泛采用的是酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）法， ２０１１０６２３—１，仪器有３７℃干恒温箱、ＤＮＸ一９６２０电脑洗板机、 ＭＵＴＬＩＳＫＡＮ．ＭＫ３读板机；ＧＩＣＡ试剂由艾康生物技术有限公 司提供，批号：２０１１０８２８５。 １．３方法：对以上两组血清标本分别采用３种方法（ＴＲＦＩＡ、 其方法简便、价廉，适合一般实验室推广，它常用聚苯乙烯为 固相载体，使其与待测标本中的相应抗体或抗原结合，然后 加酶标记的抗原或抗体，再加底物显色，最后根据色泽深浅 来推算待测抗原或抗体的含量。此方法特异性高，有效测定 ＥＬＩＳＡ和ＧＩＣＡ）对其ＨＢＶ标志物检测，所有操作步骤均严格 按照仪器及试剂盒说明书进行。 ｌ－４阳性判断标准：ＴＲＦＩＡ阳性判断标准：ＨＢｓＡｇ＞０．２ ｎｇ／ｍＬ、 乙型肝炎病毒表面抗体（ＨＢｓＡｂ）＞５ ｍＵ／ｍＬ、乙型肝炎病毒 ｅ范围可达到２０～５００ ｎｇ／ｍＬ。随着现代医学技术的发展，越来 越多的医院采用时间分辨免疫荧光分析法（ＴＲＦＩＡ）对机体血 清中乙型肝炎病毒含量进行定量检测。ＴＲＦＩＡ是用镧系元素 抗原（ＨＢｅＡｇ）＞０．５ ＰＥＩＵ／ｍＬ、乙型肝炎病毒ｅ抗体（ＨＢｅＡｂ） Ｅｕ （铕）螯合物作为示踪物标记抗原或抗体上解离下来并与 增强液中的组分形成新的具有强烈荧光的螯合物，用特定的 仪器测定荧光强度，从而判断反应体系中被测物浓度 ３１。亦 有不少地方医院因胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ）操作简便，快 ＞０．２ ＰＥＩＵ／ｍＬ、乙型肝炎病毒核心抗体（ＨＢｃＡｂ）＞０．９ ＰＥＩＵ／ｍＬ， 结果为阳性；其他２种方法按试剂说明书判定结果。 １．５统计学处理：２种方法比较进行四格表 检验，以Ｐ＜ ０．０５为差异有统计学意义。 ２结 果 ＴＲＦＩＡ和ＥＬＩＳＡ两种方法测定ＨＢｓＡｇ、ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｇ、 捷，不需仪器且适用于单个样本的检测而采用此法。本文用 上述３种方法对疑似乙型肝炎患者及献血者血清进行检测 并比较其结果，探讨每种方法的临床应用价值。 １资料与方法 ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ结果符合率分别为９５．８％、９７．３％、９７．３％、 ９０．３％、９１．３％，经配对 检验２种检测方法ＨＢｓＡｇ．ＨＢｓＡｂ、 ＨＢｅＡｇ结果差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），检测ＨＢｅＡｂ、 ＨＢｃＡｂ结果差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５ ｏ ＴＲＦＩＡ法阳性率 １．１临床资料：健康对照组：８０例乙型肝炎病毒表面抗原 （ＨＢｓＡｇ）阴性血标本为中心血站提供，年龄１８～５０岁，中位年 龄３４岁，其中男性４９例，女性３ｌ例。及时分离血血浆后， 置一２０℃保存。乙型肝炎组：３２６例ＨＢｓＡｇ阳性血标本来源 高于ＥＬＩＳＡ，见第８６９页表１。ＴＲＦＩＡ和ＧＩＣＡ ２种方法测定 ＨＢｓＡｇ、ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｅＡｂ结果符合率分别为 ７８．８％、９４．３％、９５．６％、８２．５％、８６．Ｏ％，经配对 检验２种检测 方法结果差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５ ｏ ＴＲＦＩＡ法阳性率明显 于本院门诊及住院患者，年龄ｌ ９３岁，中位年龄４７岁，其中 男性１９３例，女性１３３例。及时分离血清后，置一２０℃保存。 实用医技杂志２０１３年８月第２０卷第８期ＪｏｕｍＭ ｏｆ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｉａｕｅｓ，ＡｕｇＩｌ８ｔ ２０１３，Ｖ０１．２０，Ｎｏ．８ ・８６９・ 高于ＧＩＣＡ法，见表２。 表１ ＴＲＦＩＡ和ＥＬＩＳＡ对ＨＢＶ ＴＲＦＩＡ法比较，阳性例数均低于ＴＲＦＩＡ法，经配对 检验差 异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。 ５项指标测定结果 ＴＲＦＩＡ以镧系元素为标记物，通过时间延迟去除非特异 性荧光，在固定时间检测特异性荧光，解决了自然背景干扰问 题，明显提高了检测灵敏度；并通过激发光与发射光之间较大 的Ｓｔｏｋｅｓ位移，明显排除了非特异性荧光干扰，提高了光谱的 分辨率，使特异性明显增强。ＥＬＩＳＡ法在检测ＨＢＶ血清标志 物５项指标，有诸多影响检测结果的因素，如试剂、标本、温度 等 ，特别是ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ浓度稍高于正常时易出现漏检， 而ＴＲＦＩＡ可弥补这点不足 。ＴＲＦＩＡ定量测定ＨＢｓＡｇ的灵 敏度可达０．０５ ｎｇ／ｍＬ以下，低浓度的ＨＢｓＡｇ可作为乙型肝炎 的早期诊断标志，缩短窗口期；同时，分析ＨＢｓＡｇ和ＨＢｓＡｂ 浓度的变化，可预见急性乙型肝炎是否处于恢复期。若ＨＢ— ｓＡｇ浓度降低，ＨＢｓＡｂ浓度逐渐升高，可说明病情正向恢复 期发展。反之，ＨＢｓＡｇ浓度处于较高水平或上升趋势，而 ＨＢｓＡｂ一直处于较低水平，则易发展为慢性乙型肝炎或病毒 携带者。ＨＢｓＡｇ阳性通常意味着ＨＢＶ现症感染的存在，如持 续阳性时间＞６个月，则提示进展为慢性ＨＢＶ感染日。ＨＢＶ感 染后可造成急性、慢性肝炎和无症状病毒携带者，少数可并发 严重型肝炎，严重危害人体健康，所以在健康体检人群中应加 强乙型肝炎的防治和乙型肝炎病毒的检测，强化免疫，降低乙 型肝炎发病率。 ＨＢｓＡｂ定量值在１０～１００ ｍＵ／ｍＬ时定性虽为阳性，但此 时机体对ＨＢＶ的免疫力较弱，甚至不能预防ＨＢＶ感染，只 有ＨＢｓＡｂ的含量达到１００ ｍＵ／ｍＬ以上时，才可确定具有抵抗 ＨＢＶ入侵作用。因此ＴＲＦＩＡ定量测定对乙型肝炎疫苗免疫力 的评价和高危人群预防免疫具有重要意义。同时，分析ＨＢｅＡｇ 和ＡｂＨＢｅ浓度的变化，可反映病情变化和治疗效果，定量 测定能明确检测ＨＢｅＡｇ向抗．ＨＢｅ转换的时期，即表现为 ＨＢｅＡｇ浓度下降和ＨＢｅＡｂ浓度升高的过程。高浓度的ＨＢｅＡｇ 还可间接提示病毒处于高复制状态，具有较高的传染性；高浓 ３讨 论 度的ＨＢｅＡｂ不仅提示病情好转，而且在某些时候（如肝功能 指标很差）还可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有关。抗一ＨＢｃ浓度 的高低可反映病毒感染的状态，高浓度抗．ＨＢｃ提示乙型肝炎 ＴＲＦＩＡ是以镧系元素为示踪剂，用具有双功能基团的镧 系元素标记抗原或抗体，当与抗体或抗原结合时，抗原抗体 复合物在增强液中解离，在特定激发光激发下发出特定波长 的荧光，用时间分辨荧光仪测定复合物中稀土离子发射的荧 光强度，从而确定待测样品中抗原或抗体的浓度值，以达到 定量分析的目的【羽。ＥＬｔＳＡ法方法简单、特异、敏感，但在操 急性感染，恢复期浓度降低；慢性乙型肝炎呈抗一ＨＢｃ持续高 浓度，而低浓度的抗。ＨＢｃ一般表示恢复期或既往感染。 ＴＲＦＩＡ法不仅能定量测定，而且灵敏度和特异性更高。这不仅 是方法学上的进步，更重要的是对评估ＨＢＶ感染后病情转归 及抗病毒治疗疗效等具有重要的临床意义四。 检测结果中表达模式有ｌ２种，检测人员应该对各种模式 认真分析，准确反映被检测者的病毒携带状况，必要时可检测 作中影响因素较多，易污染，无法定量，只能满足临床对单纯 阳性、阴性结果的判断。从表１可以看出，ＴＲＦＩＡ法测得 ＨＢｓＡｇ、ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｂ的阳性例数高于ＥＬＩＳＡ法，经配对 检验差异无统计学意义（尸＞Ｏ．０５），ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ高于ＥＬＩＳＡ 法，但经配对 检验差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。ＧＩＣＡ是将 各种反应试剂以条带状固定在同一试纸条上，待检标本加在 ＨＢＶ．ＤＮＡ定量和乙型肝炎病毒前ｓ１抗原，它们与ＨＢＶ具 有互补性【 ０，１１】，这样针对出现特殊血清模式，能更好地解释体 内病毒的复制情况。 试纸条的一端，将一种试剂溶解精通过毛细作用在层析条上 渗滤移行并于膜上另一种试剂接触发生特异性免疫反应；层 析过程中免疫复合物别截留，聚集在层析材料的检测带，通 过可目测的胶体金标记物得到直观的显色结果。ＧＩＣＡ法与 综上所述，ＴＲＦＩＡ法可以为临床提供更为稳定、准确、实 用、可靠及定量的检测结果，ＥＬＩＳＡ法适用于体检或基层单 位检查，而ＧＩＣＡ法的阳性检出率偏低，仅适于作为前两种方 法的补充及验证。因此，ＴＲＦＩＡ是目前较为先进、科学、实用的 ・８７０・ 匿撞盘查 Ｑ 生 旦筮２Ｑ鲞筮 』ｏｕ ｏｆ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃ８１ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｕ如ｓｔ ２０１３，ｖ０１２０，Ｎ０．８ ．乙型肝炎５项检测方法，应大量应用于临床，为临床和患者 提供更为可靠、有用的结果。 参考文献 【１】刘磊，刘新启．ＨＢｓＡｇ携带者乙肝血清学标志物模式分析．当 代医学，２０１１，１７（６）：２８．２９． 【６】韦平宜．乙肝病毒血清学标志物ＴＲＦＩＡ与ＲＩＡ定量检测结果． 广西预防医学，２００６，１２（２）：１１３—１１４． 【７］杨荣征．两种方法检测低水平ＨＢｓＡｇ的方法学比较．检验医学 与临床，２０１１，８（１２）：１４９７—１４９８． 【８】陈瑜，夏宁邵，李兰娟．病毒性肝炎病原学实验室诊断研究进 展．中华检验医学杂志，２００９，３２（９）：９７１．９７６． 【９】陈永伟，黄飚，肖华龙，等．抗．ＨＢｃ时间分辨荧光免疫分析法 ［２】朱艳冰，李庆阁，王桂兰，等．新整铕络合物用于ＨＢｓＡｇ的时 间分辨荧光免疫检测．标记免疫分析与临床，２００２，９（３）： １５７．１６０． 的建立．临床检验杂志，２００２，２０（５）：２９１．２９２． 【１０】侯佩强，刘玮红．１１Ｏ例乙肝病毒血清标志物与前ｓｌ抗原检 测结果比较．泰山医学院学报，２００４，２５（５）：３９９． 【１１】全志琴．某中学初中新生乙肝病毒感染状况调查．职业与健 【３】蔡军．测定乙型肝炎五项血清标志物的两种方法比较．实用诊 断与治疗杂志，２００６，２０（９）：６６８—６６９． 【４】罗开忠，杨旭，苏先狮，等．时间分辨免疫荧光法检测乙型肝 炎病毒标志物．中华肝脏病杂志，２００３，ｌ１（９）：５６９． 【５】孙辉，赵佳强，孙刚，等．内源性疑似干扰物对ＥＬＩＳＡ检测结 果的影响．检验医学与临床，２０１１，８（５）：５４３．５４４． 康，２００５，２１（１２）：２０２２．２０２３． （收稿日期：２０１３—０４．１１） 妊娠晚期妇女７ １ １例血清碱性磷酸酶水平分析 安徽省合肥市第二人民医ｂ％（２３００１１） 血清碱性磷酸酶（ＡＬＰ）是一种含锌的糖蛋白，在碱性环 李自光陈正徐黄成利 组比较ＡＬＰ值差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；常龄孕妇组与高 境中（ｐＨ＝ｌｏ）可以水解各种天然及人工合成的磷酸单酯化合 物底物，其广泛存在于各组织器官中，以肝脏为最多，其次为 。肾脏、胎盘、小肠、骨骼等，血清中的ＡＬＰ主要来自肝脏和骨 骼【ｌＪ。因此，临床上测定ＡＬＰ主要用于骨骼、肝胆系统疾病 的诊断和鉴别诊断。但在临床操作中发现，妊娠妇女特别 是２８周后的妊娠晚期妇女ｔ￣ＡＬＰ可出现明显的生理性增高。 为探讨不同孕龄孕妇的ＡＬＰ水平，对２０１２年健康体检的 ７１１名不同孕龄的健康晚期孕妇的血清ＡＬＰ结果进行分析 报告如下。 １资料与方法 龄孕妇组比较ＡＬＰ值差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。 ３讨 论 健康妇女在妊娠期由于胎儿的生长发育需要，身体会发 生一系列适应性生理变化，一些酶活性有不同程度的增高１３］。 ＡＬＰ是孕期水平变化较大的一个生化指标，其有３种同工酶， 即肝，骨／肾ＡＬＰ、胎盘ＡＬＰ和肠ＡＬＰ 。妊娠期妇女血清中 ＡＩＪＰ水平在妊娠３个月开始升高，随着孕期的增加而逐渐上 升，９个月达高峰，升高的ＡＬＰ来自胎盘，与胚泡壁的细胞滋 养层的发育程度有关，是胎盘逐渐成熟的标志，可用于判断 胎盘功能＿５】。本研究检测结果显示，妊娠晚期常龄孕妇组、 高龄孕妇组血清ＡＬＰ水平明显高于对照组（氏０．０１），与陈小 １．１一般资料：２０１２年３５１名门诊体检未孕健康妇女作为对 照组，经过试验证实对照组肝功能、肾功能、血糖均在正常范 围。年龄１８ ４８岁，中位年龄２９岁。７１１名健康妊娠晚期妇女 为来我院产科门诊产检者，其中６３８名＜３５岁的妊娠妇女作 为常龄组，年龄１６～３４岁，中位年龄２６岁，７３例≥３５岁孕妇 作为高龄组Ｉ引，年龄３５ ４８岁，中位年龄３８岁。 １．２试剂与仪器：美国强生Ｖｉｔｒｏｓ ３５０全自动干化学生化分 舟 和邱定周ｆ７鲒果相符，均验证了上述观点。本研究检测结 果也显示，常龄孕妇组血清ＡＬＰ水平明显高于高龄孕妇纺 （Ｐ＜０．０１）。与张莉等 道结果有较好的一致性。孕晚期增高 的ＡＬＰ主要来自于胎盘，高龄孕妇组ＡＬＰ水平较常龄孕妇组 低，可能是由于胎盘分泌的胎盘ＡＬＰ减少而导致血清总ＡＬＰ 水平较低。是否与高龄孕妇妊娠风险增加有一定关系还有待 析仪。用于化学速率法定量测定血清中的血清ＡＬＰ活性，参 考范围为３８～１２６ Ｕ／Ｌ。试剂、质量控制品、校准品均由美国强 生公司配套提供。 １．３统计学处理：采用ＳＰＳＳ １６．０统计软件进行分析。计量资 于进一步研究。正常妊娠时ＡＬＰ升高是由于骨钙的缺失导致 的代偿性增高目，因此在孕晚期的孕妇要及时补充充足的钙 质。 综上所述，ＡＩＪＰ是孕期，特别是晚期妊娠妇女胎盘功能良 料用； 表示。组间均数比较采用方差分析。以Ｐ＜０．０５为差 异有统计学意义。 ２结 果 好的监测指标，监测晚孕妇女ＡＬＰ的水平为保证晚期妊娠妇 女的安全生产和胎儿的优生优育起到积极作用。因此，设立 ＡＬＰ妊娠晚期的参考范围尤为重要。此外，因常龄孕妇组和 高龄孕妇组中ＡＩＪＰ水平的差异，设立ＡＬＰ妊娠晚期的参考范 围时应区分孕妇因年龄不同所致的变化。通过测定分析，本 研究妊娠晚期常龄孕妇组的参考范围为（６３～３２５）Ｕ／Ｌ，高龄 孕妇组的参考范围为（５４ ２９７）Ｕ／Ｌ。有研究表明妊娠高血压 不同组别血清ＡＬＰ水平测定结果比较：对照组３５１名， ＡＩ 值（６６±ｌ６）Ｕ／Ｌ；常龄孕妇组６３８名，ＡＬＰ值（１９４￣６７）Ｕ／Ｌ；高 龄孕妇组７３例，ＡＬＰ值（１７５￣６２）Ｕ／Ｌ；对照组与常龄孕妇组 比较ＡＬＰ值差异有统计学意义（尸＜Ｏ．Ｏ１）；对照组与高龄孕妇
