・６・ 医药论坛杂志２０１４年７月第３５卷第７期Ｊ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｆｏｒｕｍ Ｖｄ．３５ Ｎｏ．７ Ｊｕｌｙ ２０１４ ・论 著・ 地中海贫血筛查与基因检测结果分析 严伟玲 ，张志强 １．惠州市第一妇幼保健院检验科，广东惠州摘要：目的５１６００７；２．惠州市中心人民医院检验中心，广东惠州５１６００１ 探讨广东省惠州市惠城区人群地中海贫血的发生率及基因突变构成比分析。方法采用深圳迈瑞 公司生产的ＢＣ一５３８０全自动血球计数仪测定红细胞平均体积（ＭＣＶ）、镜下观察红细胞形态、美国Ｈｅｌｅｎａ公司 生产的ｓｐｉｆｅ３０００血红蛋白电泳仪综合进行血红蛋白分析，基因确诊采用美国ＡＢＩ公司生产的７５００ ＰＣＲ仪，ＰＣＲ 法或ＰＣＲ—ＲＤＢ技术进行基因确诊分型。结果Ｂ地贫。结论在５６４３例产检人群中，检出 地贫表型阳性１５６３例，阳性检 出率是２７．７％，经基因确诊６９９例ｃｔ地贫。检出 地贫表型阳性２５４例，阳性检出率４．５０％，经基因确诊２５ｉ例 ｆ经过具体数据分析获得惠州市惠城区人群的地贫基因携带率以及基因突变类型的分布情况，这 样能为产前检查提供科学参考。 关键词： 地中海贫血；Ｂ地中海贫血；基因突变 中图分类号：Ｒ５５６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２—３４２２（２０１４）０７－０００６－０３ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ ＹＡＮ Ｗｅｉ—ｌｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｚｈｉ—ｑｉａｎｇ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ｍａｔｅｒｎａｌ ａｎｄ Ｃｈｉｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆＨｕｉｏｚｈｏｕ， Ｈｕ￣ｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１６００７，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ ｏｆ Ｈｕｉｃｈｅｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｕｉｚｈｏｕ ｃｉｔｙ ｏｆ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｌｌ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｍｅａｎ ｃｏｒｐｕｓｃｕｌａｒ ｖｏｌｕｍｅ （ＭＣＶ）ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｂｙ ＢＣ一５３８０ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｃｏｕｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｓｈｅｎｚｈｅｎ Ｍｉｎｄｒａｙ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｎｏｒ— ｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｓｐｉｆｅ３０００ ｈｅｍｏｇｌｏ— ｂｉｎ ｅｌｅｅｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ｗｈｉｃｈ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｕ．Ｓ．Ｈｅｌｅｎａ．Ｔｈｅ ＰＣＲ ｏｒ ＰＣＲ—ＲＤＢ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｂｙ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ＡＢＩ ７５００ ＰＣＲ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ５６４３ ｐｒｅｎａｔａｌ ｃｒｏｗｄ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．１５６３ ｃａｓｅｓ ｗｅｒｅ ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ２７．７％ａｎｄ ６９９ ｃａｓｅｓ ｗｅｒｅ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｄｉａｇｎｏｓｅｄ．２５４ ｃａｓｅｓ ｗｅｒｅ Ｂ ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ４．５０％ａｎｄ ２５０ ｃａｓｅｓ ｗｅｒｅ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｄｉａｇｎｏｓｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｃａｒｒｉｅｒｓ ａｎｄ ｄｉｓｔｒｉ— ｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ ｏｆ Ｈｕｉｃｈｅｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｈｕｉｚｈｏｕ ｃｉｔｙ ｗｅｒｅ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｂｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｄａｔａ ａｎａｌｙ－ ｓｉｓ．ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｐｒｏｖｉｄｅ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｆｏｒ ｐｒｅｎａｔａｌ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：理ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ；Ｂ ｈａｌａｓｓｅｍｉａ；Ｍｕｔａｔｉｏｎ 地中海贫血（简称地贫）是一种由珠蛋白基因 缺失或突变导致肽链合成障碍而引起的遗传性溶 血性贫血，是广东省地区发病率较高的人类单基 因遗传病之一。据２０１２年由广东省妇幼保健院进 １资料与方法 １．１ 一般资料全部病例均来自惠州市第一妇 幼保健院２０１２年１月至２０１３年１１月，在产科门 诊进行产检的夫妇５６４３人，均进行血常规检测中 行的广东省地贫基线调查发现，广东省地贫基因 的携带率高达１６．８３％。地贫根据血红蛋白珠肽 链合成障碍的不同而分类和命名，临床上常见的 主要为 和Ｂ地贫两大类＿１ Ｊ，目前国内较常用的 筛查项目是：血常规检测中的红细胞平均体积 （ＭＣＶ），红细胞脆性试验及血红蛋白（Ｈｂ）电 的红细胞平均体积（ＭＣＶ）、镜下观察红细胞形态、 血红蛋白电泳检测的地贫筛查，并对其中的１８１７ 例表型阳性者进一步进行基因确诊。 １．２ 方法 １．２．１样本采集镜下观察红细胞形态、红细胞 泳 ｊ，因此结合惠州市第一妇幼保健院的实际情 况，对５６４３例产检人群进行地贫筛查，并对表型阳 性者进行基因分析。 平均体积（ＭＣＶ）：抽取静脉血２ｍＬ，ＥＤＴＡ抗凝； Ｈｂ电泳、基因分析分别抽取静脉血２ｍＬ，ＡＣＤ抗 凝。 医药论坛杂志２０１４年７月第３５卷第７期Ｊ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｆｏｒｕｍ Ｖｏ１．３５ Ｎｏ．７ Ｊｕｌｙ ２０１４ ・７・ １．２．２血常规测定采用ＢＣ一５３８０全自动血球 计数仪及其配套的试剂进行血常规测定，主要筛 查指标红细胞平均体积（ＭＣＶ）。严格按照操作规 程进行；ＭＣＶ￣＜８２ｆｌ为地贫筛查参数阳性。 １．２．３ Ｈｂ电泳分析采用美国Ｈｅｌｅｎａ公司生产 的ｓｐｉｒｅ３０００血红蛋白电泳仪，使用与仪器配套的 试剂及Ｈｂ琼脂凝胶板，扫描仪是ＥＰＳＯＮ Ｖ７００。 血红蛋白电泳检查；ＨｂＡ２正常值范围为：２．５～ ３．５％；ＨｂＡ２＞３．５０％考虑Ｂ地贫，ＨｂＡ２≤２．５０％ 怀疑仅地贫。 １．２．４ 镜下观察红细胞形态Ｈｅｉｎｚ小体 取 ０．０００４Ｍ美兰液及１．２５％亚葡萄糖液ｌ：１配 制，加０．７８％按１：９配成反应液，加静脉血一滴水 浴箱孵育３～６ｈ，取出加ｌ０％龙胆紫一滴再水浴 ３０ｍｉｎ，湿片镜检红细胞形态。 １．２．５本室地贫筛查表型阳性诊断标准① 地 贫表型阳性：ＭＣＶ≤８２ｆｌ、Ｈｅｉｎｚ小体阳性、ＨｂＡ２≤ ２．５％、红细胞形态异常。其中一项阳性者。②Ｂ 地贫表型阳性：ＭＣＶ≤８２ｆｌ、ＨｂＡ２＞３．５％、红细胞 形态异常。其中一项阳性者。 １．２．６地贫基因诊断表型阳性的样本采用深圳 益生堂生物企业有限公司生产的检ｉ贝０试剂盒进行 基因诊断，其中采取Ｇａｐ—ＰＣＲ方法诊断中国人常 见的３种仪地贫缺失型，分别为东南亚型（一ＳＥＡ／ ａａ）基因缺失、一ｔｘ３．７／ｔｒｏｔ基因缺失和一ｔｘ４．２／ａａ 基因缺失；采用ＰＣＲ结合反向点杂交（ＲＤＢ）技术 检测常见的ｌ７种Ｂ地贫点突变，分别为ＣＤ４１—４２ （一ＴＣＣＴ）、ＩＶＳ一Ⅱ一６５４（Ｃ—Ｔ）、一２８（Ａ—Ｇ）、 ＣＤ７１—７２（＋Ａ）、ＣＤ１７（Ａ＿Ｔ）、ＣＤ２６（Ｇ＿Ａ）、 ＣＤ３１（一Ｃ）、ＣＤ２７／２８（＋Ｃ）、ＩＶＳ—Ｉ～１（Ｇ Ｔ）、ＣＤ４３（Ｇ＿Ｔ）、一３２（Ｃ—｝Ａ）、一２９（Ａ—Ｇ）、一 ３０（Ｔ—Ｃ）、ＣＤ１４—１５（＋Ｇ）、ＣＡＰ＋４０—４３（一 ＡＡＡＣ）、ＩＶＳ—Ｉ一５（Ｇ—Ｃ）和起始密码子突变（Ｔ —Ｇ）。按照操作说明书进行操作。缺失型ａ地贫 通过进行１％琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物区带 位置，明确基因缺失类型。 ２结果 从５６４３例人群中检出１５６３例表型阳性，筛查 阳性率占２７．７％，经基因确诊６９９例为 地贫携 带者，基因类型见表１。 从表１分析：本调查主要为标准型仪地贫 （７５．５３％），其次为静止型 地贫（２１．９０％）。 ２．２ Ｂ地贫表型阳性检出率 从５６４３例人群中 检出２５４例表型阳性，筛查阳性率占４．５０％（其中 包括复合ａ地贫，不单独列出ａ基因型），经基因确 诊２５０例为６地贫携带者，基因类型见表２。 表Ｉ ａ地贫基因类型及构成比 表２ ８地贫基因类型及构成比 从上表分析：本调查确诊的Ｂ地贫患者分子 分型分析表明本地区主要ＣＩ）４１—４２（３８．８０％）， 其次为ＩＶＳ—ＩＩ一６５４（２２．００％）。 ３讨论 地中海贫血是人类最常见单基因遗传疾病， 它广泛存在于世界各地，但是根据调查其有明显 地理分布特征，多见于我国广东、广西、海南地区， 可能与此病具有抵抗疟疾的选择优势有关。但是 由于正常的珠蛋白肽链合成减少或缺失会引起严 重的临床症状。有临床意义的地贫是由ｐ或仅珠 蛋白链生物合成异常所造成的 Ｊ，地贫是危害公 共健康的一种主要疾病，可以防控，但是无法治 愈，因此高发地区各地都开始先筛查，后确诊的诊 断思路，可有效控制中重型地贫患儿的出生，从而 减轻社会、家庭的经济负担。 在５６４３例筛查中：仪地贫表型阳性检出率为 ２７．７％，明显高于以往用红细胞脆性（１７．５％）、 ＭＣＶ（１７．１％）、ＨｂＡ２（７．１％）检出可疑患者 Ｊ，这 与我室增加镜下观察红细胞形态有关，目的扩大 筛查面。从表１分析可见，静止型 地贫占了 ２１．９％，静止型 地贫其血液学 （下转第１０页） ・１０・ 医药论坛杂志２０１４年７月第３５卷第７期ＪＭｅｄｉｃａｌ Ｆｏｒｕｍ Ｖｏ１．３５ Ｎｏ．７ Ｊｕｌｙ ２０１４ 本组研究的数据显示，手术治疗组的临床治 疗优良率为７４．３％，手法复位治疗组的临床治疗 优良率为７７．１％，两组临床治疗优良率比较无明 显的差异（ｘ ＝０．２３，Ｐ＞０．０５）。其中，手术治疗 参考文献 ［１］ 洪峰，蒋延森，顾智荣．手术治疗踝关节骨折１００例疗效观察 ［Ｊ］．内蒙古中医药，２０１３，１２（３）：１－２． ［２］ 何生，谢造福，陈添，７６例踝关节骨折及脱位的手术治疗 ［Ｊ］．广东医学院学报，２０１０，ｌｌ（２）：１４９．１５０． 组中ｃ型患者的优良率与手法复位治疗组中ｃ型 患者比较具有统计学有意义（）（ ＝７．２３，Ｐ＜ ０．０５）。由此分析，二者治疗踝关节的效果比较相 似，但是手术治疗组中ｃ型患者的优良率与手法 复位治疗组比较具有明显的差异。因此，临床中 对于Ｃ型踝关节骨折患者应尽量采取手术治疗， ［３］Ｄｅｎｇ Ｄｅｊｉａｎ．Ｍａｎｕａｌ ｒｅｄｕｃｉｔｏｎ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｓｐｌｉｎｔ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｆｉｘａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｋｌｅ ｆｒａｃｔｕｒｅ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｊｉｌｉｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１０，１３（１２）：５２５－５２６． ［４］ 向自力．不同治疗方式在旋后外旋型Ⅲ、Ⅳ度踝关节骨折中 的应用［Ｊ］．局解手术学杂志，２０１３，１１（１）：２１１－２１２． 从而有效的提高临床治疗总体效果。而且临床中 采取手术治疗具有较好的稳定解剖结构，并且能 够快速的促进软组织的愈合，且并发症也比较少。 另外数据还显示，两组的随访时间比较统计学无 意义（ｔ＝１．２３０３，Ｐ＞０．０５）。由此分析，患者的骨 ［５］Ｔ０ ｆｌｙ ｏｎ Ｍｏｎｄａｙ，Ｙｕ Ｙａｎｇ Ｚｈａｎｇ Ｘｉａｏｌｅｉ，ｅｔ ａ１ Ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃＨｒａｔｉ￣ｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｎｋｌｅ ｆｒａｃｔｕｒｅｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｍａｎｕａｌ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａ，２０１２，２１（５）：４５６－４５７． ［６］Ｚｈａｎｇ Ｓｏｎｇ ｄｉａｇｒａｍ，Ｌｉｎ Ｙｉｒｏｎｇ，Ｃｈｅｎ Ｌｉａｎ ＳＯＵｒｃｅ．Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ａｎｋｌｅ ｆｒａｃｔｕｒｅ ｄｉｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｓｅ—ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａ，２０１０，１２（１０）：４３１－４３２． 折愈合情况比较相似，均能够促进患者骨折部位 的快速愈合，临床中应依据患者的接受程度进行 合理的选取治疗方法。 ［７］袁奇亮，解金三，朱明生，等．关节镜下手术治疗踝关节损伤 疗效观察［Ｊ］．中华实用诊断与治疗杂志，２０ｌ１，２５（３）：２７３— ２７４． 收稿日期：２０１４－０１－０３修回日期：２０１４－０４—１２责任编辑：刘亚丽 （上接第７页） 指标可无明显异常，也没有其他 异常的临床表现，筛查地贫的检验方法很多，国际 上并无统一临床实验方法 Ｊ，惯用方法一般是 ＭＣＶ、电泳ＨｂＡ２值、红细胞脆性试验。静止型仪 地贫在这些试验均无异常 Ｊ。本室增加镜下观察 红细胞形态，有关镜下观察红细胞形态筛查静止 型仪地贫应用价值报告已报道过 。本室采用了 平行联合检测诊断的方法，即几个实验中任何一 个实验出现阳性结果就判为阳性。本室筛查实验 ｐ０或ｐ＋。因此夫妇双方产前对基因型的确诊非 常必要，如果夫妇是同型，必要的可进行抽取羊 水，绒毛进行产前诊断来确定胎儿的去留，从而预 防重症地贫患儿的出生。本研究的这些数据由于 是来自惠州地区常住及流动的孕产妇，Ｂ地贫检出 率较整体人群筛查的结果偏低，不能代表惠州地 区人群Ｂ地贫的实际发病率。但这也从一个侧面 反映出惠州地区的孕产妇进行孕前，产前筛查的 必要性，这部分人群要密切关注，制定切实可行的 防治策略，才能有效阻止重度Ｂ地贫患儿出生，来 提高惠州地区的人口素。 参考文献 ［１］谭齐贤．临床血液学和血液检验［Ｍ］．北京：人民卫生出版 社。１９９９：１４７． 项目有：电泳ＨｂＡ２值与ＨｂＦ值；镜下红细胞形 态、Ｈｅｉｎｚ小体检查、ＭＣＶ值等项目指标，任何一个 检测指标出现阳性即判断平行联合检测阳性，这 样扩大人群筛查面，有效地减少漏诊。 Ｂ地贫的分子基础是由于位于人类ｌ１号染色 体中的两个Ｂ珠蛋白基因发生碱基置换、缺失或 插入，导致Ｂ珠蛋白合成减少或缺如所引起的一 ［２］ 蔡稔，梁昕，潘丽珍．血液学指标在育龄人群地贫筛查中的诊 断价值［Ｊ］．中国优生与遗传杂志，２００３，１ｌ（１）：１２９－Ｉ３２． ［３］ 曾溢滔．人类血红蛋白［Ｍ］．北京：科学出版社，２００２：８２． 种遗传性溶血性贫血。本院从５６４３例人群筛查出 ｐ地贫表型阳性率为４．５０％，后经基因确诊符合 率为９８．４％。从表２分析得出惠州地区孕产妇最 常见的Ｂ地贫存在４种类型为ＣＩ）４１—４２、ＩＶＳ—ＩＩ 一［４］ 李玉珠，史敦云，楼瑾，等．地中贫血筛查指标的临床应用价 值［Ｊ］．实用医技杂志，２００８，１５（３５）：１０３—１０５． ［５］ 高硕，方佩华，来，等．天津地区Ｇｒａｖｅｓ流行病学调杏 ［Ｊ］．中华核医学杂志，２００２，２２（４）：１９７—１９９． ［６］高慧，李上奎．０【～地贫静止型基因分析及临床意义［Ｊ］．中 国优生与遗传杂志，２００９，１７（１１）：１８ １９． ［７］ 赖兆新，欧丽荣．静止型“一地贫筛查方法分析及意义［Ｊ］． 中国医药指南，２０１２，ｌＯ（４）：１８６—１８７． 收稿日期：２０１４－０１－１６修回日期：２０１４－０４－０１责任编辑：杜东辰 ６５４、ＣＤ１７、一２８，占所有检出点突变的９０。０％， 其中ＣＤ４１—４２（３８．８０％）和ＩＶＳ—ＩＩ一６５４ （２２．００％）占前两位。我们知道ＣＤ４１—４２、ＩＶＳ— ＩＩ一６５４插入序列异常剪接突变存在异质性，可为
