山药多糖提取实验方案(最新)

仪器与试剂：

冰箱；PH计；恒温水浴锅；离心机；鼓风干燥箱；无水乙醇（分析纯）；液氮；纯水。 实验步骤：

取样称重（约2g）→磨浆→加水到一定料液比（b）→调节pH（d）→恒温（a）水浴→提取2h→离心（3000r/min,15min）取上清液A→沉淀再次提取→离心得上清液B→AB混合减压浓缩（60℃）→加一定量乙醇（c）4℃静置约10h→离心（3000r/min,30min）→干燥（40℃）→粗多糖。

正交法探究最佳提取条件

（正交试验设计的基本特点是：用部分试验来代替全面试验，通过对部分试验结果的分析，了解全面试验的情况。）

分别按以下数据对各项影响因素设置梯度进行正交试验。 a. 提取温度： 60℃；70℃；80℃；90℃；100℃ b. 料液比：1:8；1:10；1:12；1:15；1:20

c. 乙醇：浓缩液（体积）：1:1；1:2；1:3；1:4；1:5 d. pH：7.0；7.5；8.0；8.5；9.0

四因素五水平正交试验，选用L25（5）正交表 因素 1 2 3 a.提取温度 60℃ 60℃ 60℃ b.料液比 1:8 1:10 1:12 c. 乙醇：浓缩液（体积） 1:1 1:2 1:3 d.pH 7.0 7.5 8.0 蕲山药多糖提取率（%） 6

4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 60℃ 60℃ 70℃ 70℃ 70℃ 70℃ 70℃ 80℃ 80℃ 80℃ 80℃ 80℃ 90℃ 90℃ 90℃ 90℃ 90℃ 1:15 1:20 1:8 1:10 1:12 1:15 1:20 1:8 1:10 1:12 1:15 1:20 1:8 1:10 1:12 1:15 1:20 1:4 1:5 1:2 1:3 1:4 1:5 1:1 1:3 1:4 1:5 1:1 1:2 1:4 1:5 1:1 1:2 1:3 8.5 9.0 8.0 8.5 9.0 7.0 7.5 9.0 7.0 7.5 8.0 8.5 7.5 8.0 8.5 9.0 7.0 21 22 23 24 25 100℃ 100℃ 100℃ 100℃ 100℃ 1:8 1:10 1:12 1:15 1:20 1:5 1:1 1:2 1:3 1:4 8.5 9.0 7.0 7.5 8.0 标准曲线的制备 1、对照品溶液的制备。精密称取105℃干燥至恒质量的无水葡萄糖对照品250mg，置250 mL 量瓶中，加适量水溶解，稀释至刻度，摇匀，即得1 mg/mL 葡萄糖溶液。 2、 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 葡糖糖液/ml 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 水/ml 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 再加水/ml 最终浓度/ml 0.0000 0.0125 0.0250 0.0375 0.0500 0.0625 0.0750 0.0875 0.1000 3.5ml 3、向9支试管加入5%苯酚溶液 1 mL，摇匀，迅速加入浓硫酸5 mL（98%），摇匀，放置10min，置 40℃水浴中保温 18 min，取出后迅速冷却至室温，以一号管为空白对照，可见光分光光度法，在490nm的波长处测定吸光度。已吸光度为纵坐标-浓度为横坐标制作标准曲线。

山药总糖的提取及测定

1、 将提取出的多糖溶解，定容至250ml，取10ml加水定容至100ml，待测。 2、 测定 试剂 一 总糖提取液/ml 5%苯酚溶液/ml OD值（490nm） 4 1 管号 二 4 1 摇匀，迅速加入浓硫酸5 mL（98%），摇匀，放置10min，置 40℃水浴中保温 18 min，取出后迅速冷却至室温，测定吸光度。 使用葡萄糖标准曲线，计算提取多糖总量。 3、计算每克多糖提取率。