细胞培养

细胞培养

一、 基本知识

1. 培养皿常用的有三种：大、中、小培养皿。大培养皿的底面积是55cm²，容量为10ML；中培养皿的底面积是21cm²，容量为3ML；小培养皿的底面积是？

2. 加入培养基才能终止消化，因为培养基中的血清会使胰酶终止消化。

3. HACAT细胞比较难消化，所以，中皿的HACAT细胞需加1ML胰酶消化，消化时间延长，一般为10minutes，

4. 一般的细胞中皿要加？？ML胰酶来消化？

5. 若细胞长得好，容易培养，传代的时候可以1传3，若长得不好，则2传3.若看见死细胞（漂浮在培养基上面）则要考虑是否被污染了，或者需要清洗。

6. 清洗步骤：

细胞珍贵：将旧培养基吸出，用胰酶消化，加少量PBS液，离心（800转，3minutes），倒去液体，再加入PBS冲匀，再离心，重新贴壁。

细胞不珍贵：吸出旧培养基，用PBS液在培养皿里十字清洗，再加入培养基即可。

二、 步骤

1.复苏

2.传代

3.冻存

细胞传代

1用酒精棉球将无菌工作台擦干净，再用紫外线消毒30minutes.

2将需要用的物品准备好（，头，培养基，PBS，胰酶，酒精，架子，离心管），用75%的酒精消毒后放入无菌台，摆放好。

3将细菌培养皿取出，用酒精喷培养皿边缘，此时注意不要倾斜培养皿，放入无菌台。

4用5ML的吸走旧的培养基（中培养皿的容量是3ML，大培养皿的容量为10ML），用PBS清洗，（注意不能对底壁冲）摇匀。后加入胰酶，十字混匀，放入培养箱消化。（胰酶的量中皿500ul？？，消化时间5minutes？）

5细胞消化的时间，算好每个培养皿需要放多少培养基（中皿2ML）。

6细胞被消化后可看见培养皿底部云雾状，或者稍微倾斜培养皿，可见细胞往下流动。

7吸1ML培养基终止消化。若要离心，则将一定量的PBS液加入到离心管里，把细胞悬浮液转入离心管，离心5minute（离心时，试管里的液体为6ML最佳）。然后缓慢吸走上层液体，注意不要让底部的细胞团打散或者吸走，然后吸1ML培养基把细胞从细胞壁

里冲下来。再吸入已经放好培养基的培养皿里。若不离心，则将其放入培养皿里。