２０１１年２４卷１期 Ｖｏ１．２４ Ｎｏ．１ 西南农业学报 ３１９ Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｃｈｉｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｌｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 文章编号：１００１—４８２９（２０１１）０１—０３１９—０３ 雷山小香羊促黄体素／Ｅ；亚基基因 Ｉ酶切多态性分析 朱红刚 ，田兴贵 ，杨正梅 ，王家鹏 ，杨 云 ， 吴 飞 ，罗终菊 ，唐 静 ，主 性 ，刘若余 （１．贵州大学动物科学学院，贵州贵阳５５００２５；２．贵州省雷山县畜牧兽医局，贵州雷山５５７１００） 摘要：为了给雷山小香羊品种遗传资源的合理利用及进一步选育提供科学依据，同时为更全面地了解其种质特性提供基础性资 料，利用ＰＣＲ—Ｒｎ 技术对６７只雷山小香羊促黄体素口亚基基因进行了ｓｐｈ Ｉ内切酶酶切位点多态性分析。结果表明，所扩增的 促黄体素ＪＢ亚基基因序列中仅有１个却＾Ｉ酶切位点，且不具有多态性。 关键词：雷山小香羊；促黄体素 亚基基因；ＰＣＲ—ＲＦＬＰ；Ｓｐｈ Ｉ；多态性 中图分类号：￥８５８．２６ 文献标识码：Ａ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ Ｈｏｒｍｏｎｅ ｛！｝Ｓｕｂｕｎｉｔ Ｇｅｎｅ ｏｆ Ｌｅｉｓｈａｎ Ｓｍａｌｌ Ｘｉａｎｇ Ｇｏａｔ ＺＨＵ Ｈｏｎｇ—ｇａｎｇ ，ＴＩＡＮ Ｘｉｎｇ—ｇｕｉ“，ＹＡＮＧ Ｚｈｅｎｇ—ｍｅｉ ，ＷＡＮＧ Ｊｉａ—ｐｅｎｓ￣ＹＡＮＧ Ｙｕｎ ， ，ＷＵ Ｆｅｉ‘，ＬＵＯ Ｚｈｏｎｇ－ｊｕ ，ＴＡＮＧ Ｊｉｎｇ２，ＺＨＵ Ｘｉｎｇ 。ＵＵ Ｒｕｏ・ｙｕ （１．Ｃｏ￣ｅｇｅ ｏｆＡｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｇｕｉｙａｎｇ５５００２５．Ｃｈｉｎａ；２．Ｌｅｉｓｈａｎ Ｂｕｒｅａｕ ｏｆＡｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａ－ ｒｙ，Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｌｅｉｓｈａｎ ５５７１００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ ８ ｓｕｂｕｎｉｔ ｇｅｎｅ ｏｆ ６７ Ｌｅｉｓｈａｎ ｓｍａｌｌ Ｘｉａｎｇ ｇｏａｔｓ ｗ８ｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＰＣＲ—ＲＦＬＰ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｔｈｅ ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｒａｔｉｏｎａｌ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｏｆ Ｌｅｉｓｈａｎ ｓｍａｌｌ Ｘｉａｎｇ ｇｏａｔ ａｎｄ ｔｏ ｏｖｅｒａｌｌ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｉｔｓ ｇｅｒｍ— ｐｌａｓｍ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ．Ｔｈｅ ｅｓｕｌｒｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｏｎｅ Ｓｐｈ Ｉ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅ ｃｕｔｔｉｎｇ ｓｉｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｍｐｌｉｉｆｅｄ ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ口ｓｕｂｕｎｉｔ ｇｅｎｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｌｅｉｓｈａｎ ｓｍａｌｌ Ｘｉａｎｇ ｇｏａｔ；Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ口ｓｕｂｕｎｉｔ ｇｅｎｅ；ＰＣＲ—ＲＦＬＰ；Ｓｐｈ Ｉ；Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ 促黄体素（Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ Ｈｏｒｍｏｎｅ，ＬＨ）是由腺垂 ＲＦＬＰ技术对雷山小香羊ＬＨ口亚基基因部分序列 体的嗜碱性细胞合成并分泌的一种大分子糖蛋白， 由 和口２个亚基非共轭结合而成， 亚基基因在 同一物种完全相同，而 亚基具有物种和激素的特 异性…，ＪＢ亚基是单拷贝基因 Ｊ，由３个外显子和２ 个内含子组成。因为促黄体素的特异性作用主要取 决于 亚基，因此，目前对卢亚基的研究较多，且主 要集中于人、猪上 。但对山羊ＬＨ 亚基基因多 态性的报道较少，有关雷山小香羊ＬＨ／３亚基基因 多态性的研究至今未见报道。为此，采用ＰＣＲ． 的多态性进行分析，以期为雷山小香羊品种遗传资 源的合理利用及进一步选育提供科学依据，同时为 更全面地了解其种质特性提供基础性资料。 １材料与方法 １．１试验材料 雷山小香羊６７只，颈静脉采血，每只采５ ｍＬ， 肝素钠为抗凝，一８Ｏ℃超低温冰箱冻存。 １．２血液基因组的提取 参照全血基因组提取试剂盒（Ｅ．Ｚ．Ｎ．Ａ．ＳＱ 收稿日期：２０１０—１０—２０ Ｂｌｏｏｄ ＤＮＡ Ｋｉｔ）说明书进行，所提基因组ＤＮＡ于一 ２Ｏ℃保存。 １．３引物设计和ＰＣＲ扩增 根据ＮＣＢＩ中登录的山羊ＬＨ 基因序列 （ＡＹ８５３２７５），利用ＤＮＡＳＴＡＲ分析软件设计１对引 基金项目：贵州省科技厅农业攻关项目“优质高产小香羊选育 和养殖配套技术示范”［黔科合ＮＹ字（２００８）３０４６］；贵州省科 学基金项目“贵州山羊肌肉生长抑制素基因多态性与生产性能 相关性研究”［黔科合Ｊ字（２００９）２１３６］ 作者简介：朱红刚（１９８５一），男，在读硕士，研究方向：生殖生理 学，｝为通讯作者。 物，扩增ＬＨ 基因部分５’非翻译区到第３外显子 ３２０ 西南农业学报 ２３卷 部分序列，上游引物：ＡＣＴＣＴｒＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＡＣＣ； 下游引物：ＡＧＣＧＣＡＧＣＴＣＡＴＧｃＴＡＧＧＴＧ。引物由上 用０．７％琼脂糖凝胶电泳检测，结果表明：提取的基 因组ＤＮＡ无降解，没有拖尾现象，且亮度较好（图 海捷瑞生物工程有限公司合成。 ＰＣＲ总反应体系：２０ ｔｘｌ，含１０ Ｘ Ｂｕｆｆｅｒ ２ ｉｘｌ， ｄＮＴＰ（１０ ｍｍｏＶＬ）０．４ ｌ，引物（１０１ｘｍｏｌ／Ｌ）各０．４ ，ｉ）。说明，ＤＮＡ的完整性较好，含量较高，可直接用 于后续反应。 ２．２ ＰＣＲ扩增 模板ＤＮＡ １—２ Ｉｘｌ，Ｔａｑ聚合酶（５ Ｕ／ １）０．２ ｌ， 利用ＰＣＲ法扩增得到小香羊ＬＨ卢基因部分序 列（图２）可知，ＰＣＲ扩增产物特异性高，目的条带清 晰，适于后续酶切反应。 ２．３ ＬＨ 基因部分序列 ｈ Ｉ酶切 补加灭菌三蒸水至２０ ｌ。 ＰＣＲ反应条件：首先９４ ｑｃ预变性５ｍｉｎ，然后进 入循环条件，９４℃变Ｉ生４０ ｓ，５５℃退火３０ Ｓ，７２ ｏＣ延伸 ９０ Ｓ，共进行３Ｏ个循环，最后７２℃延伸５ ｍｉｎ，４℃保 存。 取ＰＣＲ产物３ 与加样缓冲液０．６ ｔｘｌ混匀， 于１．０％琼脂糖凝胶中电泳，１００ Ｖ电压，电泳约３Ｏ ａｒｉｎ，溴化乙锭（ＥＢ）染色，紫外成像仪观察结果并拍 照保存。 １．４ ＰＣＲ产物的ＲＦＬＰ分析 用Ｓｐｈ Ｉ限制性内切酶酶切ＬＨ 基因的扩增 产物。酶切反应体系２０ ｌ，其中扩增产物１０ ｌ，限 制性内切酶印 １ ０．２ Ｉｘｌ，Ｂｕｆｆｅｒ ２ ｐ．１，然后加双蒸水 至２０ ｌ，３７ ｑＣ反应３ ｈ，酶切产物经２％琼脂糖凝 胶进行电泳，ＥＢ染色，凝胶成像系统拍照保存。 ２结果与分析 ２．１基因组ＤＮＡ的提取 取基因组ＤＮＡ ５ ｔｘｌ与加样缓冲液Ｉ Ｉ混合， 图１小香羊基因组ＤＮＡ电泳图谱 Ｆｉｇ．１ Ｔｈｅ ｅｌｅｅｔｒｏｐｈｏｒｏｇｒａｍ ｏｆ ｓｍａｌｌ Ｘｉａｎｇ ｇｏａｔ’ｓ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ 图２小香羊ＬＨｐ基因ＰＣＲ产物电泳图谱 Ｆｉｇ．２ Ｔｈｅ ｅｌｅｅｔｒｏｐｈｏｒｏｇｒａｍ ｏｆ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ Ｘｉａｎｇ ｇｏａｔ’ｓ 由测序结果可知，在第４０１位有１处正常酶切 位点，采用限制性内切酶Ｓｐｈ Ｉ对该段基因ＰＣＲ扩 增产物进行消化，结果酶切片段长度均为４０１ｂｐ、 ５２８ ｂｐ（图３），未发现Ｓｐｈ Ｉ酶切多态性位点。 ３小结与讨论 ３．１促黄体素（ＬＨ）的生理功能 促黄体素的分泌受促性腺激素释放激素（Ｇｎ— ＲＨ）、抑制素、激动素以及雌激素等因子的反馈调 节，在动物的生殖过程中ＬＨ与ＦｓＨ协同作用促进 卵泡成熟、触发排卵、促进黄体形成并分泌雌激素和 孕激素 ８ Ｊ。编码促黄体素的 亚基基因发生突变 常使动物的生殖过程出现障碍。有研究表明，人的 ＬＨ ８亚基基因第５４编码子发生碱基变异，导致氨 基酸由Ｇｌｎ—Ａｒｇ，从而导致青春期延迟 』，第１０２ 编码子发生碱基变异，导致氨基酸由ｓｅ卜＋Ｇｌｙ，致使 月经紊乱和不育¨…。 ３．２ ＬＨ口基因多态性与产羔数的关系 在猪的研究中，张付军等 在不同品种猪的 ＬＨ ＪＢ调控区上游＋１一一６２７ｂｐ范围内没有发现变 异；王爱华等 研究发现，猪的ＬＨ 亚基基因的３ 个外显子和３ 调控区内没有任何ＳＮＰｓ位点，说明， Ｍ １ ０ ３ ４ ｊ ６ Ｍ：ＤＩ２０００分子量标记：１：ＰＣＲ产物；２—６：酶切产物 Ｍ：ＤＬ２０００ Ｍａｒｋｅｒ；１：ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ；２—６：Ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ 图３小香羊ＬＨ 基因 ＾Ｉ酶切结果 Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ ｂａｎｄ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ＬＨ ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｗｉｔｈ却＾Ｉ ｉｎ ｓｎｌａｌｌ Ｘｉａｎｇ ｇｏａｔ １期 朱红刚等：雷山小香羊促黄体素卢亚基基因ｓｐｈ Ｉ酶切多态性分析 ３２ｌ ＬＨ 亚基基因高度保守，仅在内含子１的１３６７位 点和内含子２的１８２３位点发现２个多态性位点。 有研究表明，内含子可能与基因的表达调控有关，内 含子对某些基因的特异性表达是必不可少的 卜 ］， 因此，推测该基因的内含子可能存在某些调控序列。 在羊的研究中，黄勤华等¨ 在贵州黑山羊ＬＨ 基 因８３２ｂｐ核苷酸系列中，共发现２个多态位点，而第 １３８ｂｐ位点的多态性可能与贵州黑山羊繁殖性能之 间存在相关性。而济宁青山羊的ＬＨ口基因５ 调控 区的３种基因型的产羔数差异均不显著（尸＞０． ０５），其外显子２的突变与产羔数极显著相关（Ｐ＜ ０．０１）［１４１。任珍珍等－】纠在黔北麻羊的ＬＨ 基因 中检测到２个突变位点所产生的基因型的产羔数无 差异（Ｐ＞０．０５）。李利等¨ 研究表明，南江黄羊的 ＬＨ 基因内含子１中存在Ｓｐｈ Ｉ酶切多态位点，从 第２胎开始ＡＡ型母羊的产羔数和窝重有增加趋 势，但是在各基因型间，从１～５胎的初生窝重和产 羔数差异不显著（Ｐ＞０．０５）。 本研究发现，雷山小香羊的ＬＨ 基因存在Ｓｐｈ Ｉ酶切位点，但不具有多态性。这与李利等¨ 的研 究结果不同，可能是因羊的品种不同，或是因该研究 样本量少而产生的差异。雷山小香羊是否具有Ｓｐｈ Ｉ酶切位点多态性以及与生产性能是否关联，需进 行深人研究。 参考文献： ［１］Ｐｉｅｒｃｅ Ｊ Ｇ，Ｐａｒｓｏｎｓ Ｔ Ｆ．Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｈｏｒｍｏｎｅｓ：ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｒｕｎｅ— ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９８１，５０：４６５—４９５． ［２］Ｔａｌｍａｄｇｅ Ｋ，Ｂｏｏｒｓｔｅｉｎ Ｗ Ｒ，Ｆｉｄｄｅｓ Ｊ Ｃ．Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｅ ｃｏｎｔａｉｎｓ ｓｅｖｅｎ ｇｅｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｂｅｔａ—ｓｕｂｕｎｉｔ ｏｆ ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ ｂｕｔ ｏｎｌｙ ｏｎｅ ｇｅｎｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｂｅｔａ—ｓｕｂｕｎｉｔ ｏｆ ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ【ｊ］．ＤＮＡ， １９８３。２（４）：２８１—２８９． ［３］Ｅｈｅｒ Ｋ，Ｅｒｅｌ Ｃ Ｔ，Ｃｉｎｅ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ Ｔｒｐ—Ａｒｇ ａｎｄ Ｉｌｅ１５一Ｔｈｒ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ ｂｅｔａ—ｓｕｂｕｎｉｔ ｉｎ ｗｏｍｅｎ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ ｏｖａｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ］．Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，１９９９，３：４２５—４３０． ［４］Ｒａｊｋｈｏｗａ Ｍ，Ｔａｌｂｏｔ Ｊ Ａ，Ｊｏｎｅｓ Ｐ Ｗ，ｅｔ １ａ．Ｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ａｎ ｉｍｍｕｎｏ－ ｌｏｇｉｃａｌ ＬＨ ｂｅｔａ，．ｓｕｂ． ｕｎｉｔ ｖａｒｉａｎｔ ｉｎ ａ ＵＫ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅａｌｔｈｙ ｗｏｍｅｎ ａｎｄ ｗｏｍｅｎ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｅｙｓｔｉｃ ｏｖａｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｅｒｉｎｏｌ （Ｏｘｆ），１９９５，４３：２９７—３０３． ［５］Ｊａｍｅｓｏｎ Ｊ Ｌ．Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｏｎａｄｏｔｏｒｐｉｎ ｈｏｒｍｏｎｅｓ［Ｊ］， Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１９９６，１２５（１—２）：１４３—１４９． ［６］张付军，李宁，陈永福，等．猪种ＬＨ卢基因５ 端部分调控区的 克隆及序列分析［Ａ］．见：第八次全国动物遗传育种学术讨论会 论文集［Ｃ］．北京：中国农业科技出版社，１９９５．５３—５６． ［７］王爱华，李宁，吴常信．猪ＬＨ卢亚基基因的单核苷酸多态性研 究［Ｊ］．遗传，２００２，２４（６）：６４９—６５２． ［８］严军丽，冯强，柳海珍，等．卵泡闭锁与其ｔｐＡ，ＬＨ受体及抑制 素ａ，３／＿ｉ亚基基因表达的关系［Ｊ］．中国科学：Ｃ辑，１９９９，２９ （６）：５９２—５９９． ［９］Ｗｅｉｓｓ Ｊ，Ａｘｅｌｒｏｄ Ｌ，Ｗｈｉｔｃｏｍｂ Ｒ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｈｙｐｏｇｏｎａｄｉｓｍ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ａ ｓｉｎｇｌｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ卢ｓｕｂｕｎｉｔ ｏｆ ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ ｈｏｒ— ｍｏｎｅ［Ｊ］．Ｎ Ｅｎ Ｊ Ｍｅｄ，１９９２，３２６（３）：１７９—１８３． 【１Ｏ］Ｒａｍａｎｕｊａｍ ＬＮ，ＨａｏＷ Ｘ，ＲｏｙＡ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ａｓｓｏｃｉａｔｏｎ ｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｖａｒｉａｎｔｓ ｏｆ ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ ｗｉｔｈ ｍｅｎｓｔｒｕａｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ（Ｏｘｆ），１９９９，２：２４３—２４６． ［１１］Ｋｉｍ Ｃ Ｈ，Ｋｉｍ Ｈ Ｓ，Ｃｕｂｅｌｌｓ Ｊ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ａ ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ ｕｎｄｅｓｃｒｉｂｅｄ ｉｎ－ ｔｒｏｎ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ５＂ｕｐｓｔｒｅａｍ ｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｂｕｔ ｎｏｔ Ｐｈｏｘ２ａ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．ａｒｅ ｎｅｃｅｓｓａｒｙ ｆｏｒ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌ ｃｅｌｌ ｔｙｐｅ・ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｌ Ｃｈｃｍ， １９９９，７４（１０）：６５０７—６５１８． ［１２］Ｋｌｅｕ Ｃ Ｐ，Ｂｏｎｎｅｒ Ｔ Ｉ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔ Ｍ１ ｍｕｓｃａｒｉｎｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｒｏｍｏｔｅｒ［ｊ］．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ，１９９９，７２（３）： ９００—９０９． ［１３］黄勤华，张超，胡万林，等．贵州黑山羊促黄体素口基因多态 性及其与产羔数的关系［Ｊ］．贵州农业科学，２０１０，３８（６）：１６２— １６４． ［１４］狄冉，梁琛，储明星，等．促黄体素口基因多态性及其与济宁 青山羊产羔数的关系［Ｊ］．畜牧兽医学报，２００９，４０（８）：１１７１一 ｌ１７８． ［１５］任珍珍，罗卫星，蔡惠芬，等．黔北麻羊ＬＨ 基因多态性及其与 产羔数的相关性分析［Ｊ］．山地农业生物学报，２０１０，２９（２）：１３５ —１３８． ［１６］李利，张红平，吴登俊．南江黄羊ＬＨ 基因序列多态性与产 羔数的相关分析［Ｊ］．吉林农业大学学报，２００６，２８（５）：５６７— ５７３． （责任编辑冯卫）
