一、 蔗糖的测定…………………………………………………第
22页
二、 脂肪的测定…………………………………………………第
24页
三、总固形物的测定 ……………………………………………第25页
四、酸度的测定 …………………………………………………第26页
五、冰淇淋蛋白质的测定 ………………………………………第26页
六、水的硬度的检测 ……………………………………………第29页
七、锅炉水碱度的测定 …………………………………………第32页
八、消毒工作液中过氧乙酸有效浓度的测定 …………………第
33页
九、水中亚硝酸及硝酸盐含量检测 ……………………………第34页
一、 蔗糖的测定(依据国标GB/T5009.8-2003)
（一）原理：试样经除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为还原糖，再按还原糖测定。水解前后还原糖的差值为蔗糖含量。 反应原理：一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等体积混合后，生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钠反应，生成深蓝色的酒石酸钠铜的络合物。再加热条件下，以次甲基兰作指示剂，用样液直接滴定经标定的碱性酒石酸铜溶液，还原糖将二价铜还原为氧化亚铜。待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖将次甲基兰还原，溶液由兰色变为无色，即为终点。
+2[H]
次甲基兰(蓝色)∣←—→ 还原型次甲基兰（无色）+HCI +2[O]
（二）试剂：
1. HCl（1+1）：量取50ml盐酸注入少量水中，用水稀释至100ml； 2. 乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加入3ml冰乙酸，加蒸馏水溶
解并稀释至100ml；
3. 106g/l亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100ml；
4. 碱性酒石酸铜溶液：
（1）甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）和0.05g次甲基兰，加水溶解并稀释至1000ml；
（2）乙液：称取50g酒石酸钾钠和75gNaoH溶于水中，加入4g亚
铁氰化钾，加水溶解并稀释至1000ml；
5. 葡萄糖标准溶液： （1）配制：
精确称取1.0000g经过96±2℃干燥2小时的纯葡萄糖，加水溶解后，再加入5ml盐酸，并以水稀释至1000ml，注入滴定管备用。 （2）标定酒石酸铜溶液： a：预测：
精确吸取甲液，乙液各5ml置于150ml三角瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2-3粒，置于电炉上，控制在2分钟内加热至沸腾，在沸腾状态下（沸腾15秒后），以先快后慢的速度从滴定管中滴加葡萄糖标准溶液，待溶液颜色变浅时，以每两秒一滴的速度滴定直至溶液蓝色消失即为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的体积数； b：标定：
精确吸取碱性酒石酸铜甲液，乙液各5ml，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加玻璃珠2-3粒，从滴定管中加入比预测体积少1ml的葡萄糖标液，将此锥形瓶置于电炉上，控制在2min内加热至沸腾（沸腾2分钟后），趁沸以每两秒一滴的速度继续加溶液直至蓝色消失即
为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的体积，同法平行操作三次，取其平均值，按下式计算A值 m1 × v1
A = -------------- 1000 式中：
A——10ml酒石酸铜溶液（甲、乙各5ml）相当于葡萄糖溶液的质量，g
m——葡萄糖的质量，g
V1——消耗葡萄糖标准溶液的体积的平均值，ml 1000——配制标准溶液的体积，ml （三）蔗糖的测定： 1. 沉淀：
称取固体试样2.50—5.00g，液体试样25.00-50.00ml（冰淇淋称2.50-5.00 g；花色奶称取10 g—15 g），置于250ml容量瓶中，加入50ml蒸馏水，稀释混匀，慢慢加入5ml乙酸锌及5ml亚铁氰化钾溶液，加蒸馏水至刻度，摇匀静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液后备用； 2. 转化：
吸取50ml 滤液于100ml容量瓶中，加入5ml盐酸，在68—70℃恒温水浴中水浴15min，立刻取出冷却至35℃，加两滴1g/l（乙醇）甲基红指示剂，用NaoH（200 g/L）溶液中和置中性（即溶液由红色变为橙色）加水置刻度，混匀，即为转化液； 3. 滴定：
将试样滤液及转化液分别置于滴定管中滴定，记录消耗试样的体积，滴定方法与标定碱性酒石酸铜溶液方法相同； 4. 分析结果的计算式：
A
总糖（以葡萄糖计）%= -------------------------------- × 100 M × 50 × V2 250 100
A
还原糖（以葡萄糖计）%= ----------------------- × 100 m × V1 250 蔗糖%=（总糖 — 还原糖）×0.95 式中：
A——10ml酒石酸铜溶液（甲、乙各5ml）相当于葡萄糖溶液的质量g
V1——消耗试样糖液的体积，ml V2——消耗试样转化液的体积，ml
0.95——还原糖（以葡萄糖计）换算成蔗糖的系数 m——样品的质量，g
允许误差：同一样品两次测定结果之差不得超过平均值的5%。 （四）注意示项：
1. 加入乙酸锌-亚铁氰化钾目的是为沉淀蛋白质，滤出；
2. 转化时，温度不易太高，同时，时间不易太长，原因在于，糖液的转化属于水解反应，蔗糖分解为果糖和葡萄糖，果糖不稳定，若温度过高，或时间过长，果糖会分解为CO2和水，影响滴定结果； 3. 滴定时必须在沸腾状态下进行：
（1）滴定时，所发生的反应属氧化一还原反应，反应速度慢且需要能量；
（2）O2具有氧化性，若反应速度慢，会使酒石酸铜溶液与O2发生氧化一还原反应。当沸腾时，蒸气将瓶口气封隔绝空气的进入，防止氧化；
二、 脂肪的测定：[依据国标GB/T5009.6-2003（酸水解法）] （一）原理：
试样经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得总脂肪含量。酸水解法测得的为游离及结合脂肪的总量， （二）试剂：
1.盐酸 2.乙醇（95%） 3.乙醚
4.石油醚（30-60℃沸程） （一） 仪器： 100 ml具塞刻度量筒 （四）分析步骤：
1.样品处理：将均匀的样品称取10.00克，置于50 ml烧杯中，加入10 ml 浓盐酸，放于70-80℃水浴中，每隔5-10分钟搅拌1次，至试样消化完全为止，约40-50分钟。
2.取出加入10 ml 95%乙醇，混合，冷却后移入100ml 具塞量筒中，以25 ml乙醚分次洗烧杯，一并倒入量筒中，待乙醚全部倒入量筒后，加塞振摇1分钟，小心开赛，放出气体，再塞好，静置12min，小心开塞，并用石油醚—乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪，静置10—20min，待上部液体清晰，吸出上清液于已恒重的锥型瓶内，再加5ml乙醚于具塞量筒内，振摇，静置后，仍将上层乙醚吸出，放入原锥形瓶内，将锥形瓶置水浴中蒸干，置100±5℃烘箱中干燥2小时，取出放干燥器内冷却0.5小时后称量，重复以上操作至恒重 M1-M0
X= ----------- ×100 M2
X—试样脂肪含量，g/100 g M1—锥形瓶和脂肪的质量，g M0--锥形瓶的质量，g M2—试样的质量，g
三、总固形物的测定（依据标准 SB/T10009-1999）
精确称取经融化均匀的试样2—3克（精确至0.0001g），于已烘干至恒重的称量皿中，置于水浴上蒸干，移入100—105℃电烘箱（或水浴烘箱）中烘三个半小时，取出加盖置于干燥器中冷却（约25—
30分钟后），称量，重复干燥，冷却称量至恒重，计算式为：
W2-W1 总固形物%= ---------- × 100
W1-W
W——称量皿的质量，g W1——试样和称量皿的质量，g W2——烘干后试样和称量皿的质量，g 四、酸度的测定 (一) 试剂：
1%酚酞指示剂：称取1g酚酞溶入100ml95%的乙醇中； 0.1mol/L NaoH：依据标准溶液的配制方法进行配制； （二）方法：
精确称取融化均匀的样品4-5g于250ml 三角瓶中，加入120ml煮沸冷却后的蒸馏水，加入2-3滴1%的酚酞指示剂，用0.1 mol/L NaoH滴定至溶液呈粉色，并保持30秒钟不褪色，即为终点 计算：
V×N×0.09
酸度%= ---------------- ×100（以乳酸计） W
式中：W——样品重（g）；
V——NaoH溶液滴定的体积数； 0.09——乳酸的系数；
五、冰淇淋蛋白质的测定：(依据国标GB/T5009.5-2003) 1.原理：
蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。测定步骤：消化→ 蒸馏→滴定。 2.试剂与仪器：
1）硫酸铜(催化剂)、硫酸钾（提高硫酸沸点由3300C升至4000C）、浓硫酸.
2）硼酸溶液（20g/L）：20g硼酸（分析纯）溶于1000ml热蒸馏水中，混匀备用。
3）混合指示液：1份甲基红乙醇溶液（1 g/L）与5份溴甲酚绿乙醇溶液（1 g/L）临用时混合。也可用2份甲基红乙醇溶液（1 g/L）与1份亚甲基蓝乙醇溶液（1 g/L）临用时混合。
4）氢氧化钠溶液（400g/L）：400g 氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中。 5）硫酸标准溶液[c(1/2H2SO4)=0.0500moL/L]或盐酸标准溶液[c(HCI)=0.0500moL/L]。 3.操作步骤： （1）样品的制备：
固体样品0.20—2.00g（如乳粉），半固体样品2.00-5.00g，液体样品10—25ml（如牛奶）。把样品放入消化瓶中，同时加入6 g硫酸钾，0.2g硫酸铜，20ml浓硫酸。 （2）消化：
先微火加热到100。C左右，以防瓶内泡沫冲出而影响结果，当瓶内发泡停止，稍加大火力。当内溶物的颜色逐渐转化成透明的淡绿色时，继续消化0.5—1h（若消化瓶内壁沾有碳粒时，进行摇动或待冷却后，用过氧化氢溶液冲下，继续消化至透明的兰绿色为止）。然后从消化炉上取下放冷，小心加入20ml水。 （3）蒸馏和吸收：
方法一：(依据GB/T5009.5-2003)
1）将澄清的消化液放冷后，小心移入100ml容量瓶中，以水冲洗数次消化瓶，洗涤液一起并入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水定容至刻度，摇匀。
2）在冷凝器的下端放置一个盛有10 ml硼酸溶液1-2滴甲基红-溴甲
酚绿混合指示剂的300mL的锥型瓶（接收瓶）中，使冷凝器下端的玻璃管，在液面以下。吸取10ml消化液于定氮蒸馏瓶中，将氢氧化钠溶液慢慢地加入蒸馏瓶中，（溶液呈强碱性，加入量约10毫升），然后通入蒸汽进行蒸馏，蒸馏5min。提出冷凝器下端的玻璃管，用少量蒸馏水冲洗冷凝管下端，将洗液一并聚集于硼酸溶液中，让玻璃管靠在锥形瓶的瓶壁，再蒸馏1min。用少量蒸馏水冲洗冷凝管下端，取下锥型瓶（接收瓶）。
注：蒸馏时要注意蒸馏情况，避免瓶中的液体发泡冲出，进入接收瓶。火力太弱，蒸馏瓶内压力减低，则接受瓶内液体会倒流，造成实验失败。
方法二： 1）将澄清的消化液小心移入100ml容量瓶中，以水冲洗数次消化瓶，洗涤液一起并入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水定容至刻度，摇匀。
2）在冷凝器的下端放置一个盛有50 ml 硼酸溶液3滴甲基红-溴甲酚绿混合指示剂的300mL的锥型瓶中，使冷凝器下端的玻璃管，在液面以下。吸取10ml消化液于定氮蒸馏器中，将氢氧化钠溶液慢慢地加入蒸馏瓶中，（溶液呈强碱性,加入量约10毫升），然后通入蒸汽进行蒸馏，蒸至液面达到200mL时，提出冷凝器下端的玻璃管，用少量蒸馏水冲洗冷凝管下端，将洗液一并聚集于硼酸溶液中，让玻璃管靠在锥形瓶的瓶壁，出液口在250mL刻度线以上，继续蒸馏，蒸至液位达250ml。用少量蒸馏水冲洗冷凝管下端，取下锥型瓶（接收瓶）。 备注：不管采用那种蒸馏方法，必须保证NH3全部被回收，必要时可以采用PH试纸验证蒸馏物是否呈碱性。 备注：使用FOSS Kjeltec的定氮仪，使用方法二。 （4）滴定：
用硫酸或盐酸标准溶液滴定接收液，滴定至灰色或蓝紫色为终点（使用KDN-08A定氮仪蒸馏：终点颜色由兰绿色变为酒红色）。记
录所用硫酸标准溶液的体积。同时进行空白试验，并在结果中加以矫正。
（5）计算：
（V1—V0）×C×0.0140×F×100
Pro含量% = ------------------------------------- M×（V/100）
式中：V1——样品消耗酸体积，ml
V0——空白消耗酸的体积，ml C——酸标准溶液的浓度，moL/L； M——称取样品的质量，g；
V——从容量瓶中吸取消化液的体积，ml 0.0140——氮原子的摩尔质量，Kg/ moL
F——氮换算成粗蛋白的系数（一般食品为6.25；乳制品6.38；面粉为5.70；玉米、高粱为6.24；花生为6.45；米为5.95；大豆及其制品为5.71；肉及肉制品为6.25；大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83；芝麻、向日葵为5.30；纯谷类配方食品5.90，含乳婴儿谷物配方食品6.25） 4.注意事项：
1）消化开始温度不宜过高，以防泡沫冲出。 2）消化时打开水阀，以利于废气导出。 3）消化完毕不得用冷水冷却，应自然冷却。 4）若需用H2O2水冲，必须在冷却后。 5）蒸馏时要打开水阀，作冷却水用。 6）吸收时必须伸入液面以下。 5、备注：
① 加入硫酸钾的作用：提高硫酸的沸点（338℃），增进反应速度。加入定量的硫酸钾将硫酸沸点提高到400℃,但过多的硫酸钾会造成沸点太高。生成的硫酸铵在513℃会分解，故此加入硫酸钾量一定要准确。
② 加入硫酸铜的作用：催化剂，使氧化作用加速。 六、水的硬度的检测:(依据国标GB 5750-1985)
水的硬度原系指沉淀肥皂的程度。使肥皂沉淀的原因主要是由于水中的钙、镁离子，此外铁、铝、锰、锶及锌等金属离子也有同样的作用。
多采用乙二胺四乙酸二钠容量法测定钙、镁离子的总量，并经过换算，以每升水中碳酸钙的毫克数表示。
本法的干扰物质有以下两类。
1.悬浮性或胶体有机物可影响终点的观察。此时可将水样蒸干并于550℃灰化，干扰即可除去。
2.金属离子如Cu2＋、Ni2＋、Co2＋、Al3＋、Fe3＋及高价锰等，由于封闭现象使指示剂褪色或终点延长。硫化钠及氯化钾可掩蔽重金属的干扰，盐酸羟胺可使高铁离子及高价锰离子还原为低价离子而消除其干扰。
若取50ml水样，本法测定的最低检测浓度为1．0mg/L。 （一）原理：
乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）在PH值为10的条件下与水中的钙、镁离子生成无色可溶性络合物，指示剂铬黑T则与钙、镁离子生成紫红色络合物。用EDTA-2Na滴定钙、镁离子至终点时，钙、镁离子全部与EDTA-2Na络合而使铬黑T游离，溶液即由紫红色变为蓝色。 （二）仪器：
150ml三角瓶；10或25ml滴定管。 （三）试剂：
1．0．01mol/L乙二胺四乙酸二钠标准溶液：称取3．72g乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O，简称EDTA－2Na），溶于纯水中，并稀释至1000ml，按如下步骤标定其准确浓度。
（1）锌标准溶液：准确称取0.6～0.8g的锌粒，溶于1＋1盐酸中，置于水浴上温热至完全溶解。移入容量瓶中，定容至1000ml。
W
M1= -----------
m 式中：M1——锌标准溶液的摩尔浓度，mol/L；
W——锌的重量，g；
m——锌的分子量是65.37，g。
（2）吸取25.00ml锌标准溶液于150ml三角瓶中，加入25ml纯水，加氨水调至近中性，再加2ml缓冲溶液及5滴铬黑T指示剂，用EDTA－2Na溶液滴定至溶液由紫红变为蓝色。按式（30）计算。 M1×V1
M2= ---------
V2
式中：M2——EDTA－2Na溶液的摩尔浓度，mol/L；
M1——锌标准溶液的摩尔浓度，mol/L； V1——锌标准溶液体积，ml； V2——EDTA－2Na溶液体积，ml。
（3）校正EDTA－2Na溶液的摩尔浓度为0.0100mol/L。
注：0.0100mol/L EDTA－2Na溶液也可依据国标GB/T5009.1-2003中方法进行配制和标定。 2．缓冲溶液（pH10）
（1）氯化铵－氢氧化铵：称取16.9g氯化铵（NH4Cl），溶于143ml浓氢氧化铵中。
（2）称取0.780g硫酸镁（MgSO4·7H2O）及1.178g乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O），溶于50ml纯水中，加入2ml氯化铵－氢氧化铵溶液和5滴铬黑T指示剂（此时溶液应呈紫红色，若为天蓝色，应再加极少量硫酸镁使呈紫红色）。用EDTA－2Na溶液滴定至溶液由紫红色变为天蓝色，合并（1）及（2）两种溶液，并用纯水稀释至250ml，合并后如溶液又变为紫色，在计算结果时应扣除试剂空白。
注：①氢氧化铵－氯化铵缓冲液应贮存于聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶中。防止使用中因反复开盖，使氨水浓度降低而影响pH值。
②配制缓冲溶液时，加入EDTA－Mg是为了使某些含镁较低的水样滴定终点更敏锐。如果备有市售EDTA－Mg试剂，则可直接取1.25gEDTA－Mg，配人250ml缓冲溶液中。
③EDTA－2Na滴定钙、镁离子时，以铬黑T为指示剂其溶液在pH值9.7～11的范围内，越偏碱终点越敏锐。但可使碳酸钙及氢氧化镁沉淀，从而造成滴定误差。因此滴定选用pH值10为宜。 3． 固体指示剂：称取0.5g铬黑T，加100g氯化钠，研磨均匀，贮于棕色瓶内，密塞备用，可较长期保存。
注：铬黑T指示剂配成溶液后较易失效。如果在滴定时终点不敏锐，而且加入掩蔽剂后仍不能改善，则应重新配制指示剂。 4．5％硫化钠溶液：称取5.0g硫化钠（Na2S·9H2O）溶于纯水中，并稀释至100ml。
5．1.0％盐酸羟胺溶液：称取1.0g盐酸羟胺〔NH2OH·HCl〕，溶于纯水中，并稀释至100ml。
6．10％氰化钾溶液：称取10．0g氰化钾（KCN）溶于纯水中，并稀释至100ml。注意，此溶液剧毒！ （四）方法步骤：
1.取水样50ml（若硬度过大，可少取水样用水稀释至50ml。若硬度过小，改取100ml），置于150ml三角瓶中。
注：为防止碳酸钙及氢氧化镁在碱性溶液中沉淀，滴定时水样中的钙、镁离子含量不能过多，若取50ml水样，所消耗的0．01mol/L EDTA－2Na溶液体积应少于15ml。
2.若水样中含有金属干扰离子使滴定终点延迟或颜色发暗，可另取水样，加入0．5ml盐酸羟胺溶液及1ml硫化钠溶液或0．5ml氰化钾溶液。
3.加入1～2ml氢氧化铵－氯化铵缓冲溶液及5滴铬黑T指示剂（或一小勺固体指示剂），立即用EDTA－2Na标准溶液滴定，充分振摇，至溶液由紫红色变为蓝色，即表示到达终点。 4.计算：
V1×C1×1000
p(CaCO3)= ---------------- m mol/L
V水样
式中：P——水样的硬度，m mol/L
V1—消耗EDTA-2Na的体积数，ml C1——EDTA-2Na的摩尔浓度，mol/L 注意：检测自来水时取水样25 ml，其它步骤同上。 p(CaCO3)=（V1×C1×100.09×1000）/V自来水样 [mg/L]
总硬度除用碳酸钙表示外，尚可用度及毫克当量/升表示。其相
互换算方法见表： 硬度单位的换算 硬度单位 毫克当量/升 度 碳酸钙，[mg/L] 毫克当量/升 1 0.35663 0.01998 度 2.804 1 0.0560 碳酸钙，[mg/L] 50.045 17.847 1 七、锅炉水碱度的测定（依据国标GB 1576-2001） 1.目 的：
锅炉水的碱度对锅炉设备的结垢、腐蚀和蒸汽品质均有重大的影响，碱度过高则易引起锅炉设备的碱性腐蚀和苛性脆化，并易使锅炉水起泡及汽水共腾，恶化蒸汽品质。但是过低则锅炉易结生水垢，不利于锅炉的安全运行。因此，需要控制其碱度。 2.原 理：
水的碱度是指水中含有能接受氢离子的物质的量，例如氢氧根、碳酸盐、重碳酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、硅酸盐、硅酸氢盐、亚硫酸盐、腐植酸盐和氨等，都是水中常见的碱性物质，它们都能与酸反应。
因此,用标准酸溶液进行滴定，便可测出水中的碱度的含量。 3.试 剂：1）1%的酚酞指示剂 2）0.1%甲基橙（水溶液）
3）0.1000mol/L(1/2H2SO4)硫酸标准溶液 4.测 定：
取100ML水样注入锥形瓶，加2—3滴1%酚酞，此时若溶液显红色，则用硫酸标准溶液滴定至恰好无色，记录耗酸体积V1，然后再加入2滴甲基橙指示剂，继续用硫酸标准溶液滴至呈橙红色为止，记录第二次耗酸体积V2（不包括V1） 计算式：
C×(V1+V2) × 1000 m mol/L V
式中：C——硫酸(1/2H2SO4)标准溶液的浓度，mol/L;
V1、V2——耗酸的体积,ML; V—— 水样的体积,ML.
八、消毒工作液中过氧乙酸有效浓度的测定 1.用滴管加入A液5滴，摇匀； 2.用滴管加入B液5滴，摇匀； 3.用滴管加入C液5滴，摇匀；
3.用滴管吸取D液（硫代硫酸钠溶液）一滴一滴的加入试管中，边加边摇，滴加至溶液蓝色消失为终点，记录所消耗滴数N。 4.过氧乙酸浓度计算：过氧乙酸（ppm）=5ppm×N
因使用浓度控制在100——300 ppm，所以，滴定液消耗滴数为10——30滴。 5.注意事项：
（1）取样前必须将试管用待测工作液清洗3次。
（2）保证试管溶液的凹面与刻度线平行。保持滴定液的液滴大小一致。
（3）滴定试剂须在低温条件下放置，并保持不被污染。 （4）待测定的工作液测试前温度应低于30℃，必要时应冷却。 备注： 快速滴定试剂的配制 A 液 2mol/lH2SO4
量取112ml的浓硫酸（分析纯）加入50ml蒸馏水中，搅拌均匀后加蒸馏水至1000ml即可。 B 液 10%KI
称取10g KI (分析纯)溶于100ml蒸馏水中，即可。 C 液 0.5%淀粉指示剂
称取0.5g可溶性淀粉（化学纯）加5ml水，使成糊状，加到90ml
沸水中，煮沸1-2分钟，稀释至100ml。 D 液 0.025NaS2O3滴定液的配制：
配制 称取6.5g硫代硫酸钠NaS2O3.5H2O（或4g无水硫代硫酸钠）溶于1000ml水中，缓缓煮沸10分钟，冷却标定后备用。 九、水中亚硝酸及硝酸盐含量检测：（依据国标GB 5750-1985） （一）亚硝酸盐氮（重氮化偶合分光光度法）
水中亚硝酸盐氮是标志水体被有机物污染的指标之一。它是含氮化合物分解的中间产物，不稳定，易氧化成硝酸盐，也可被还原成氨。它的含量与硝酸盐和氨的含量结合考虑，可推测水体污染程度及净化能力。 1.应用范围
（1）本法适用于测定生活饮用水及其水源水中亚硝酸盐氮。 （2）水中三氯胺产生红色干扰。三价铁、铅等离子可产生沉淀，引起干扰。二价铜离子起催化作用，可分解重氮盐，因而使结果偏低。有色离子有干扰作用，也不应存在。
注：试剂加入的次序改为先加盐酸N-（1—萘基）-乙烯二胺，后加对氨基苯磺酰胺，可稍减低三氯胺产生的红色干扰。但三氯胺浓
度大时仍能产生橙色。
（3）本法最低检测量为0.05μg亚硝酸盐氮，若取50ml水样测定，则最低检测浓度为0.001mg/L。 2.原理
在pH1.7以下，水中亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺起重氮作用，再与盐酸N—（1—萘基）—乙烯二胺产生偶合反应，生成紫红色的偶氮染料，比色定量。 3.仪器
（1）50ml具塞比色管。 （2）分光光度计。 4.试剂
（1）亚硝酸盐氮标准贮备溶液：称取0.2463g在干燥器内放置24h的亚硝酸钠（NaNO2）。溶于纯水中，并定容至1000ml。每升内加2ml氯仿保存。此溶液1.00ml含50.0μg亚硝酸盐氮。
（2）亚硝酸盐氮标准溶液：取10.00ml亚硝酸盐氮贮备溶液，用纯水稀释至500ml，再从中吸取出10.00ml，用纯水定容100ml。1.00ml含0.10μg亚硝酸盐氮。
（3）氢氧化铝悬浮液：称取125g硫酸铝钾〔KAl（SO4）2·12H2O〕或硫酸铝铵〔NH4Al（SO4）2·12H2O〕，溶于1000ml纯水中。加热至60℃，慢慢加入55ml浓氨水，使成氢氧化铝沉淀。充分搅拌后静置，弃去上清液。反复用纯水洗涤沉淀，至倾出液无氯离子（用硝酸银检定）为止。最后加入300ml纯水成悬浮液。使用前振荡均匀。 （4）1％对氨基苯磺酰胺溶液：称取5g对氨基苯磺酰胺（NH2C6H4SO3NH2），溶于350ml 1＋6盐酸中。用纯水稀释至500ml。此试剂可稳定数月。
（5）0．1％盐酸N—（1—萘基）—乙烯二胺溶液：称取0.5g盐酸N－（1－萘基）－乙烯二胺（C10H7NH2CHCH2NH2·2HCl，又名N
－甲萘基盐酸二氨基乙烯，简称NEDD），溶于500ml纯水中。贮于棕色瓶内，于冰箱内保存，可稳定数周。如变为深棕色，则应重配。 5.步骤
（1）若水样浑浊或色度较深，可先取100ml，加入2ml氢氧化铝悬浮液，搅拌后静置数分钟，过滤。
（2）先将水样或经处理后的水样，用酸或碱调节至中性，取50.0ml，置于比色管中。
（3）另取50ml比色管8支，分别加入亚硝酸盐氮标准溶液0、0.50、1.00、2.50、5.00、7.50、10.00及12.50ml，用纯水稀释至50ml。 （4）向水样及标准色列管中分别加入1ml对氨基苯磺酰胺溶液，摇匀后放置2～8min。加入1.0ml盐酸N—（1—萘基）—乙烯二胺溶液，立即混匀。
（5）于540nm波长下，用1cm比色皿以纯水作参比，在10min至2h内，于分光光度计上测定吸光度。如亚硝酸盐氮浓度低于4μg/L时，改用3cm比色皿。
（6）绘制校准曲线，从曲线上查出水样管中亚硝酸盐氮含量。 6.计算
M
C=-------
V
M——从校准曲线上查得样品管中亚硝酸盐氮含量，μg； V——水样体积，ml。 (二)硝酸盐氮（镉柱还原法） 1.应用范围
（1）本法适用于测定生活饮用水及水源水中硝酸盐氮的含量。 （2）本法不经稀释直接还原测定的适用范围为0.006～0.25mg/L的硝酸盐氮加亚硝酸盐氮。将水样稀释，可使测定范围扩大。
式中：C——水样中亚硝酸盐氮（N）浓度，mg/L；
（3）本法最低检测量为0.05μg硝酸盐氮，若取50ml水样测定，则最低检测浓度为0.001mg/L硝酸盐氮。 2.原理
在一定条件下，镉还原剂能将水中的硝酸盐氮还原为亚硝酸盐氮，还原生成的亚硝酸盐氮（包括水样中原有的亚硝酸盐氮）与对氨基苯磺酰胺重氮化，再与盐酸N－（1－萘基）乙烯二胺偶合，形成玫瑰红色偶氮染料，用光度法测定，减去不经镉柱还原，用重氮化偶合比色法测得的亚硝酸盐氮含量，即可得出硝酸盐氮含量。
水样浑浊或有悬浮固体时会堵塞柱子，可先将水样过滤。浊度高的水样，在过滤之前可加硫酸锌和氢氧化钠预处理，以去除水样中存在的大部分颗粒物质。
注：镉还原剂指汞－镉颗粒、铜－镉颗粒和海绵状镉，可选用其中一种。
于水样中加入乙二胺四乙酸二钠，以消除铁、铜或其他金属的干扰。 3.仪器
（1）还原柱：见下图。
（2）250ml容量瓶。 （3）100ml三角瓶。 （4）分光光度计。 4.试剂
（1）苯酚：如苯酚不纯或有颜色，将盛苯酚（C6H5OH）的容器隔水加热，融化后倾出适量于具空气冷凝管的蒸馏瓶中，加热蒸馏，收集182～184℃的馏分，置棕色瓶中，冷暗处保存。精制苯酚应为无色纯净的结晶。
（2）二磺酸酚试剂：称取15g苯酚，置于250ml三角瓶中，加入105ml浓硫酸，瓶上放一小漏斗，置沸水浴内加热6h。试剂应为浅棕色稠液，保存于棕色瓶内。
（3）硝酸盐氮标准贮备溶液：称取7.218g在105～110℃烘过1h的硝酸钾（KNO3），溶于纯水中，并定容至1000ml。加2ml氯仿作保存剂，至少可稳定6个月。此贮备溶液1.00ml含1．00mg硝酸盐氮。
（4）硝酸盐氮标准溶液：吸取5.00ml硝酸盐氮标准贮备溶液，置于瓷蒸发皿内，在水浴上加热蒸干，然后加入2ml二磺酸酚，迅速用玻璃棒摩擦蒸发皿内壁，使二磺酸酚与硝酸盐充分接触，静置30min，加人少量纯水，移入500ml容量瓶中，再用纯水冲洗蒸发皿，合并于容量瓶中，最后用纯水稀释至刻度。此溶液1.00ml含10.0μg硝酸盐氮。
（5）1％对氨基苯磺酰胺溶液：称取5g对氨基苯磺酰胺（NH2C6H4SO3NH2），溶于350ml 1＋6盐酸中。用纯水稀释至500ml。此试剂可稳定数月。
（6）0.1％盐酸N－（1－萘基）－乙烯二胺溶液：称取0.5g盐酸N－（1－萘基）－乙烯二胺（C10H7NH2CHCH2NH2·2HCl，又名N
－甲萘基盐酸二氨基乙烯，简称NEDD），溶于500ml纯水中。贮于棕色瓶内，于冰箱内保存，可稳定数周。如变为深棕色，则应重配。 （7）氯化铵－乙二胺四乙酸二钠（EDTA－2Na）溶液：称取100g氯化铵（NH4Cl）和1gEDTA－2Na（C10H14N2O8Na2·2H2O）；溶于纯水中，并稀释至500ml。
（8）10％硫酸锌溶液：称取100g硫酸锌（ZnSO4·7H2O），溶于纯水中，并稀释至1000ml。 （9）镉还原剂
1）海绵状镉：如无市售品，可用下法制备。投入足够的锌片（或锌棒）于500ml 20％硫酸镉溶液中，3～4h后将置换出来的海绵状镉用玻棒轻轻刮下，捣碎至20～40目，用纯水冲洗后置0．5％氯化铵溶液中保存。
2）汞－镉颗粒：取40～60目的金属镉粒（用过的也可重复使用）约50g，置于烧杯中，先用1＋1盐酸溶液洗涤，弃去溶液后用纯水冲洗镉粒数次，再加入1％氯化汞溶液100ml，搅拌3min，倾去溶液，用纯水冲洗汞－镉颗粒数遍，然后用1＋99硝酸溶液很快冲洗一下，再用1＋99盐酸溶液洗数次，用纯水洗至水中不含亚硝酸根为止。置0.5％氯化铵溶液中保存。
3）铜－镉颗粒：取40～60目的金属镉粒（用过的也可重复使用）约50g，置于烧杯中。先用1＋1盐酸洗涤，弃去溶液后用纯水冲洗数次，再加入2％硫酸铜溶液100ml，摇动5min或至溶液蓝色变浅。倾去溶液，再加入新的硫酸铜溶液，重复处理，直到在镉粒上出现褐色胶体沉淀为止。用纯水洗涤铜－镉粒至少10次，以去除所有沉淀，置于0.5％氯化铵溶液中保存。 5.镉还原柱的制备
（1）填料的装柱与老化：放入一小团玻璃棉于还原柱的底部，加满纯水，再分次加入镉填料至30cm高度（加填料时应注意避免在填料
中间引入空气泡）。在200ml纯水中加入2ml氯化铵－EDTA溶液，用活塞控制流速为每分钟7～10ml，让其流过新制备的镉填料，再用每升含0.1％硝酸盐氮、8ml氯化铵－EDTA溶液的水溶液200ml流过柱子，使镉填料老化。
注：新镉填料还原能力较强，司将亚硝酸盐氮进一步还原为氮，必须用硝酸盐氮溶液处理，使镉柱适当老化。
（2）镉柱还原率的检查：为了检查镉柱的还原率，可在每天作样品分析前，按步骤6（2），将0.1～0.2mg/L的硝酸盐氮标准溶液经柱还原、显色，用1cm比色皿测定吸光度，与相同浓度的亚硝酸盐标准溶液显色测得的吸光度相比较，可确定还原柱的还原率。
为了计算方便，可用因数F来表征还原柱的还原效率：
Cs×L F=-----------
As×Ab 式中：Cs——硝酸盐氮标准溶液的浓度，mg/L；
L——比色皿厚度，cm；
As——硝酸盐氮标准溶液经柱还原显色后测得的吸光度； Ab——流经还原柱的试剂空白的吸光度。
F值应用标准溶液三个平行测定结果的平均值求得。如果在一天中测定多批样品，应在分析开始、中间、末尾用硝酸盐氮标准溶液校验F值。计算F值常选用0.1～0.2mg/L的硝酸盐氮标准溶液，1cm比色皿。
当选用汞－镉颗粒和铜－镉颗粒作填料时，随使用时间延长，其还原效率会逐渐降低，当F值持续高于0.33时，应分别按4（9）2）或4（9）3）所述方法重新活化。 6.步骤 （1）预处理
1）去除浊度：水样中有悬浮物时，可用孔径0.45μm的滤膜过滤。当水样的浊度很高时，则取100ml水样，加入1ml硫酸锌溶液，充
分混合，滴加氢氧化钠溶液调节pH值为10.5。放置数分钟待絮凝状沉淀析出，倾出上清液供分析用。
2）去除油和脂：如水样中有油和脂，取100ml水样，用浓盐酸调pH值为2，每次用25ml氯仿，萃取2次。
3）调节水样的pH值：如水样的PH在5以下或9以上，则用浓盐酸或浓氨水调pH为5～9。
注：溶液的pH值对镉柱的还原效率有影响，必须控制pH值在3.3～9.6的范围内。 （2）测定
1）试剂空白吸光度的测定：分析前用100～200ml纯水，流经还原柱后弃去，再取5ml氯化铵－EDTA溶液，用纯水稀释至200ml，分次倒入还原柱贮液池，以每分钟7～10ml的流速通过还原柱，弃去最初流出的约50ml溶液，再用2个50ml量杯交替各接取25ml流出液3次，按6（2）3）测定吸光度，取平均值。
2）硝酸盐氮还原：在250ml容量瓶中加入5ml氯化铵－EDTA溶液，吸取一定量的水样移入容量瓶中（控制容量瓶中硝酸盐氮的浓度在0．20mg/L以下），加纯水至刻度。将10～20ml容量瓶中的水样溶液倾于贮液池中，让其从柱内流过后弃去，再倒入30～40ml，控制流速每分钟7～10ml，其流出液用来冲洗2只50ml量杯后弃去。将容量瓶中剩下的水溶液分次倾入贮液池，用2只量杯交替各接取25ml流出液共3次，并分别转入3个100ml三角瓶中（如还要分析另外的水样，两样品之间不用洗柱，只要用30～40ml另一样品溶液流经还原柱后弃去，即可接取另一样品作测定）。
注：①水样与镉填料应有足够的接触时间，硝酸盐氮才能定量还原，因此流速不宜太快。但太慢将增加分析时间，且可能使结果偏低。
②溶液中加入氯化铵，可与镉离子络合，减少柱内镉盐沉淀及缓解对亚硝酸根的还原作用。
3）显色与测定吸光度：还原后的水样应立即加入0.5ml对氨基苯磺酰胺试剂，摇匀后2～8min内加入0.5mlNEDD试剂，放置10min后，于2h内测定吸光度（波长540nm，纯水为参比）。求出3个三角瓶中溶液的平均吸光度。
注：①溶液的pH值对显色有影响，pH值在1.7以下时颜色最深，如果用于还原的水样pH在8以下，一般均能达到业硝酸盐重氮化所需的酸度条件（pH值1.4），并使加入NEDD试剂后pH在1.7以下，否则溶液的吸光度大大降低。
②显色后颜色的稳定性与室温有关。在10℃时放置24h，吸光度值降低2～3％；20℃时放置2h，吸光度值开始降低；30℃时显色后1h颜色开始变浅；在40℃的室温下，显色45min后吸光度值即迅速下降。 7.计算
F
C= (Aw-Ab)×N×---- - CNO2
L Aw——试样的吸光度； Ab——试剂空白的吸光度； N——水样稀释倍数；
F——表征镉还原柱还原效率的因数； L——比色皿的厚度，cm；
CNO2——水样中亚硝酸盐氮（N）的浓度，mg/L。
式中：C——水样中硝酸盐氮（N）的浓度，mg/L；
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