(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 111187244 A(43)申请公布日 2020.05.22
(21)申请号 202010058121.7(22)申请日 2020.01.19
(71)申请人 青岛科技大学
地址 266100 山东省青岛市崂山区松岭路
99号(72)发明人 吉喆 陈夫山 王高敏 王霞
宋晓明 (74)专利代理机构 济南克雷姆专利代理事务所
(普通合伙) 37279
代理人 张祥明(51)Int.Cl.
C07D 311/30(2006.01)
权利要求书1页 说明书5页 附图2页
(54)发明名称
一种从芹菜中提取芹菜素的新方法(57)摘要
本发明属于食品及药品技术领域，具体涉及一种从芹菜中提取芹菜素的新方法。本发明以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界CO2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经制备型液相色谱分离得芹菜素。本发明首次采用利用超临界CO2流体与乙醇共同萃取芹菜素，并且采用液相色谱分离得单一的芹菜素纯品，本发明的提取方法简单易行，芹菜素纯度高，得率高，而且整个提取过程中不涉及有毒溶剂，安全无毒，适用食品及药品生产领域。
CN 111187244 ACN 111187244 A
权 利 要 求 书
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1.一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，其特征在于，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界CO2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经制备型液相色谱分离得芹菜素。
2.根据权利要求1所述的一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，其特征在于，所述乙醇为体积分数为95％的乙醇。
3.根据权利要求1所述的一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，其特征在于，其具体步骤为：
a.将原料干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；b.取上述芹菜粉X1g置于超临界萃取釜中，萃取温度25～40℃，萃取压力为25～40MPa，萃取时间2.5小时；
c.从超临界萃取釜的分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液；d.使用制备型液相色谱对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；e.将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素。4.根据权利要求3所述的一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，其特征在于，步骤b中，乙醇与超临界CO2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。
5.根据权利要求3所述的一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，其特征在于，超临界CO2流体以X2g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以X3ml/min的速度泵入萃取釜，其中，X1/X2＝5，X1/X3＝78-79。
6.根据权利要求3所述的一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，其特征在于，步骤d中，液相色谱条件为：分析管柱Kromasil 100-5-C18，250mm×4.6mm，5μm，分析波长设定为343nm，流速为1mL/min；以甲醇为流动相A，以1％的乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱；
HPLC分析之洗脱梯度
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CN 111187244 A
说 明 书
一种从芹菜中提取芹菜素的新方法
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技术领域
[0001]本发明属于食品及药品技术领域，具体涉及一种从芹菜中提取芹菜素的新方法。背景技术
[0002]芹菜素，又称芹黄素，是一种黄酮类化合物，在自然界中广泛分布，其中以芹菜中含量最高，分子式为C15H10O5，其分子结构中含有三个羟基，因此具有非常良好的抗氧化作用。此外，经国内外大量研究发现，芹菜素还可以降低血管脆性及异常的通透性、降血脂，有舒张血管及降血压的作用，有助于诱导血管生成。
[0003]目前国内外提取芹菜素的方法一般有以下几种：[0004]a.溶剂提取法。该方法应用范围最广，但是得到的芹菜素纯度并不高，且溶剂消耗量大，有时甚至需要有毒溶剂，不适合食品及药品生产；[0005]b.大孔树脂纯化法。该方法可以有效地提高芹菜素的纯度，但是产率低，不适合大规模工业生产。
发明内容
[0006]针对上述问题，本发明提出了一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界CO2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经制备型液相色谱分离得芹菜素，既可以提高芹菜素的产率，又可以提高芹菜素的纯度。[0007]其中，本发明所述乙醇优选体积分数为95％的乙醇，即乙醇与水的体积比为95:5。本发明所述的一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，其具体步骤为：[0008]a.将原料干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；[0009]b.取上述芹菜粉X1 g置于超临界萃取釜中，萃取温度25～40℃，萃取压力为25～40MPa，萃取时间2.5小时；
[0010]c.从超临界萃取釜的分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液，主要为黄酮类化合物；
[0011]d.使用制备型液相色谱对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；[0012]e.将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素。[0013]本发明中，原料优选芹菜叶，可以在一定程度上实现废物利用。[0014]为了最大程度的实现芹菜素等有效成分的充分萃取，步骤b中，乙醇与超临界CO2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。本申请中，超临界CO2流体和乙醇采用实时泵入的方式进行萃取，新鲜溶剂可明显提高萃取能力。超临界CO2流体以X2 g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以X3ml/min的速度泵入萃取釜，其中，X1/X2＝5，X1/X3＝78-79。[0015]经萃取浓缩后，获得浓缩提取液。步骤d中，液相色谱条件为：分析管柱Kromasil100-5-C18，250mm×4.6mm，5μm，分析波长设定为343nm，流速为1mL/min；以甲醇为流动相A，以1％(质量分数)的乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱。
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说 明 书
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表1 HPLC分析之洗脱梯度
[0017]
本发明首次采用利用超临界CO2流体与乙醇共同萃取芹菜素，并且采用液相色谱
分离得单一的芹菜素纯品，本发明的提取方法简单易行，芹菜素纯度高，得率高，而且整个提取过程中不涉及有毒溶剂，安全无毒，适用于食品及药品生产领域。附图说明
[0019]图1为芹菜素标准品的HPLC谱图；
[0020]图2为比较例3获得的浓缩提取液的HPLC谱图；[0021]图3为比较例2获得的浓缩提取液的HPLC谱图；[0022]图4为实施例1获得的浓缩提取液的HPLC谱图。
具体实施方式[0023]实施例1
[0024]一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界CO2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。[0025]其具体步骤为：
[0026]取新鲜马家沟芹菜，将芹菜干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度30℃，萃取压力为30MPa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液；使用制备型液相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为53.36μg/g，纯度97.5％。[0027]所述乙醇为体积分数为95％的乙醇。[0028]步骤b中，乙醇与超临界CO2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。超临界CO2流体以50g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以3.2ml/min的速度泵入萃取釜。[0029]步骤d中，液相色谱条件为使用Kromasil 100-5-C18(250mm×4.6mm，5μm)作为分析管柱，分析波长设定为343nm，流速为1mL/min，移动相则以表1的梯度进行冲抵，标准物的滞留时间为95min。[0030]实施例2
[0031]一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界CO2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。[0032]其具体步骤为：[0033]取新鲜西芹，将芹菜干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度25℃，萃取压力为25MPa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液；使用制备型液
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相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为52.49μg/g，纯度95.3％。[0034]所述乙醇为体积分数为95％的乙醇。[0035]步骤b中，乙醇与超临界CO2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。超临界CO2流体以50g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以3.2ml/min的速度泵入萃取釜。[0036]步骤d中，液相色谱条件为：使用Kromasil 100-5-C18(250mm×4.6mm，5μm)作为分析管柱，分析波长设定为343nm，流速为1mL/min，移动相则以表1的梯度进行冲抵，标准物的滞留时间为95min。[0037]实施例3
[0038]一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界CO2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。[0039]其具体步骤为：[0040]取新鲜金口芹菜，将芹菜叶干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度40℃，萃取压力为35MPa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液；使用制备型液相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为52.35μg/g，纯度95.7％。[0041]所述乙醇为体积分数为95％的乙醇。[0042]步骤b中，乙醇与超临界CO2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。超临界CO2流体以50g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以3.2ml/min的速度泵入萃取釜。[0043]步骤d中，液相色谱条件为：使用Kromasil 100-5-C18(250mm×4.6mm，5μm)作为分析管柱，分析波长设定为343nm，流速为1mL/min，移动相则以表1的梯度进行冲抵，标准物的滞留时间为95min。[0044]实施例4
[0045]一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界CO2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。[0046]其具体步骤为：[0047]取新鲜金口芹菜，将芹菜叶干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度35℃，萃取压力为40MPa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液；使用制备型液相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为53.32μg/g，纯度97.5％。[0048]所述乙醇为体积分数为95％的乙醇。[0049]步骤b中，乙醇与超临界CO2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。超临界CO2流体以50g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以3.2ml/min的速度泵入萃取釜。[0050]步骤d中，液相色谱条件为：使用Kromasil 100-5-C18(250mm×4.6mm，5μm)作为分
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析管柱，分析波长设定为343nm，流速为1mL/min，移动相则以表1的梯度进行冲抵，标准物的滞留时间为95min。[0051]实施例5
[0052]一种从芹菜中提取芹菜素的新方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界CO2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。[0053]其具体步骤为：
[0054]取新鲜马家沟芹菜，将芹菜叶干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度40℃，萃取压力为25MPa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液；使用制备型液相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为53.25μg/g，纯度97.3％。[0055]所述乙醇为体积分数为95％的乙醇。[0056]步骤b中，乙醇与超临界CO2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。超临界CO2流体以50g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以3.2ml/min的速度泵入萃取釜。[0057]步骤d中，液相色谱条件为：使用Kromasil 100-5-C18(250mm×4.6mm，5μm)作为分析管柱，分析波长设定为343nm，流速为1mL/min，移动相则以表1的梯度进行冲抵，标准物的滞留时间为95min。[0058]比较例1
[0059]一种从芹菜中提取芹菜素的方法，以芹菜/芹菜叶为原料，首先以超临界CO2流体为主溶剂，以乙醇为辅溶剂共同萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。[0060]其具体步骤为：
[0061]取新鲜马家沟芹菜，将芹菜干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度30℃，萃取压力为30MPa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，旋转蒸发至无醇味，得浓缩提取液；使用制备型液相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为41.96μg/g，纯度95.4％。[0062]所述乙醇为体积分数为99％的乙醇。[0063]步骤b中，乙醇与超临界CO2流体在超临界萃取釜入口端之前预先混合，之后共同进入超临界萃取釜萃取芹菜素。超临界CO2流体以50g/min的流速泵入萃取釜，乙醇以3.2ml/min的速度泵入萃取釜。[0064]步骤d中，液相色谱条件为：使用Kromasil 100-5-C18(250mm×4.6mm，5μm)作为分析管柱，分析波长设定为343nm，流速为1mL/min，移动相则以表1的梯度进行冲抵，标准物的滞留时间为95min。[0065]比较例2
[0066]一种从芹菜中提取芹菜素的方法，以芹菜/芹菜叶为原料，以超临界CO2流体为溶剂萃取，然后经液相色谱分离得芹菜素。[0067]其具体步骤为：
[0068]取新鲜马家沟芹菜，将芹菜干燥粉碎，过40目筛，得芹菜粉；取上述芹菜粉250g置
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于超临界萃取装置的萃取釜中，萃取温度30℃，萃取压力为30MPa，使用超临界萃取装置萃取芹菜素，萃取2.5小时；从分离槽收集提取液，经处理，得浓缩提取液；使用制备型液相色谱分离对浓缩提取液进行分离、纯化、收集；将收集到的物质冷冻干燥，得到的浅绿色粉末即为芹菜素，芹菜素得率为5.86μg/g，纯度96.4％。[0069]超临界CO2流体以50g/min的流速泵入萃取釜。[0070]比较例3
[0071]采用现有技术中常用的溶剂提取法进行提取，溶剂采用甲醇[0072]根据实施例1以及对比例1、对比例2及对比例3的对比可知，对比例3仅仅采用95％的乙醇进行萃取，萃取得到的成分复杂，且芹菜素含量低；对比例2超临界CO2流体为溶剂萃取，萃取得到的成分相对简单，但是芹菜素含量较低；对比例1采用99％乙醇和超临界CO2流体，芹菜素的得率以及纯度有所提高；实施例1采用超临界CO2流体和95％的乙醇共同萃取，萃取得到的成分相对简单，而且芹菜素含量较高，采用本发明所述的液相条件能够实现各种成分的完全分离，最终芹菜素得率高，纯度高。
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