药物分析实验习题答案

实验一 甲硝唑片溶出度的测定-----------------------------------------------------------------------------------------------1 实验二 RP(Reverse Phase)-HPLC(High Performance Liquid Chromatography)测定醋酸地塞米松片的含量2 实验三 Gas Chromatography(GC,气相色谱法)测定维生素E软胶囊的含量-----------------------------------------2 实验四 永停滴定法测定磺胺嘧啶的含量-----------------------------------------------------------------------------------3 实验五 复方磺胺甲噁唑片的含量测定--------------------------------------------------------------------------------------4 实验六 阿司匹林Aspirin的红外光谱(IR, Infrared Spectroscopy)鉴别-------------------------------------------------4 实验七 薄层扫描法测定卷烟中尼古丁的含量-----------------------------------------------------------------------------5 实验八维生素B1注射液的含量测定------------------------------------------------------------------------------------------5 实验九 荧光分光光度法测定维生素B2片的含量-------------------------------------------------------------------------6 实验十AAS法龙牡壮骨颗粒中钙的含量--------------------------------------------------------------------------------------6

实验一 甲硝唑片溶出度的测定

1. 何为溶出度？哪些类型药物需做溶出度实验？

溶出度：是指药物从片剂等固剂在规定溶剂中溶出的速度和程度。溶出度是片剂质量控制的一个重要指标，对难溶性的药物一般都应作溶出度的检查。凡检查溶出度的制剂，不再进行崩解时限的检查。

2. 为什么溶出度测定时，吸取溶出液需“自取样至滤过应在30秒钟内完成” ？

溶出、释放是一个连续过程，溶出结果时刻在发生变化，而溶出度都是具体某个时间点的结果，如果时间不限定在一个相对窄的范围，结果的重复性就会变差，特别是才释放的初期，取样时间对结果的重复性影响更大。为了使结果客观反映药物本身的真实质量，有必要将影响结果重复性的因素降低到最小，因此有这样的规定。

3.为什么要弃去3mL粗滤液？

此过滤为干过滤

a主要原因:滤液在经过滤纸时，滤纸会吸收部分水分，所以初滤液的实际浓度要高于其原浓度。 b.其他原因

b1.初滤液可以起到润洗承接容器的作用 。

b2.滤纸孔隙大，经过一段过滤后，滤纸孔被附着的滤渣所覆盖，孔隙变小，滤液也会更加澄清。 b3.滤纸本身加工不那么的精细，表面有一些可溶性的杂质，除去初滤也就是为了防止这些杂质进入溶液当中，保证溶液的纯度。

4.溶出度测定方法

Ch. P. 2010规定三种

第一法 篮法 第二法 浆法 第三法 小杯法

实验二 RP(Reverse Phase)-HPLC(High Performance Liquid Chromatography)测定醋酸地塞米松片的含量

1. 由于操作不当，系统中混入了气泡，则对测定结果有何影响？如何排除这些气泡？

由于气泡的存在，会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降；气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏。 吹氦脱气法、加热回流法、抽真空脱气法、超声波脱气法、在线真空脱气法

2. 更换溶剂时，直接将一种互不相溶的溶剂替换前一种溶剂时，对色谱行为有何影响？如何消除这些影响？

液相中有可能析出流动相中的盐分，可能堵住柱子 ；找与两者都能互溶的溶剂过渡一下.

3. HPLC法中常用的定量方法有哪几种？

外标法，内标法，工作曲线法

实验三 Gas Chromatography(GC,气相色谱法)测定维生素E软胶囊的含量

1．气相色谱实验操作程序中，为什么要先打开载气，再加升柱温?

操作时要先开载气，这样可以保护检测器和色谱柱，某些固定液，如：硅酮类、聚乙二醇等，在高温时遇氧会发生变化，在惰性的载气流下则稳定。 实验结束时，要先降温，再关闭载气?

各种固定相均有最高使用温度的，为延长色谱柱的使用寿命，在分离度达到要求的情况下尽可能选择低的柱温。开机时，要先通载气，再升高气化室、检测室温度和

分析柱温度，为使检测室温度始终高于分析柱温度，可先加热检测室，待检测室温度升至近设定温度时再升高分析柱温度；关机前须先降温，待柱温降至50℃以下时，才可停止通载气、关机。 FID检测器须用3种不同的气体：载气、氢气和空气，由于毛细管柱的柱内载气流量太低(常规柱为1～5ml／min)，不能满足检测器的最佳操作条件，所以使用毛细管柱时要采用辅助气(尾吹气)，即在色谱柱后增加一路载气直接进入检测器，就可保证检测器在高灵敏度状态下工作，尾吹气的另一个重要作用是消除检测器死体积的柱外效应。一般情况下，氮气(尾吹气+载气)、空气和氢气三者的比例接近或等于1：1：10(如：氮气30～40mI／min，空气300～400ml／min，氢气30～40ml／min)时，FID的灵敏度最高。

2. 维生素E结构中哪一部分最不稳定？中国药典规定检查什么特殊杂质？

维生素E是苯并二氢吡喃醇衍生物，苯环上有一个乙酰化的酚羟基，故称生育酚醋酸酯。此物质对酸和碱不稳定，会转化为生育酚，所以中国药典规定检查的特殊杂质：生育酚

3．气相色谱法测定维生素E含量时为什么使用内标法? 内标的选择原则是什么?

当配置校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液，使用等量浓度的内标物质溶液时，Cs=Cs’，则配置内标物质溶液不必精确称(量)取。

内标法由于不受进样量和操作条件变化的影响，可以消除仪器、操作或制备样品时带来的误差，结果较准确。

实验四 永停滴定法测定磺胺嘧啶的含量

1．配制NaNO2标准溶液时，为什么要加适量的无水碳酸钠?

因亚钠液（0.1 mol/L）在pH=10左右最为稳定，故此在配制1000ml溶液时加入0.1gNa2CO3作为稳定剂。

2．磺胺嘧啶含量测定时，加入KBr目的是什么?

1.酸的种类及浓度

（1）重氮化反应的速度与酸的种类有关，在HBr中比在HCl中为快，在HNO3或H2SO4中则较慢，但因HBr的价格较昂，故仍以HCl最为常用。此外，芳香伯胺类盐酸盐的溶解度也较大。

（2）重氮化反应的速度与酸的浓度有关，一般常在1～2mol/L酸度下滴定，这是因为酸度高时反应速度快，容易进行完全，且可增加重氮盐的稳定性。如果酸度不足，则已生成的重氮盐能与尚未反应的芳伯胺偶合，生成重氮氨基化合物，使测定结果偏低。 [Ar-N+≡N]Cl-+ArNH2→Ar-N=N-NH-Ar+HCl

当然，酸的浓度也不可过高，否则将阻碍芳伯胺的游离，反而影响重氮化反应的速度。 2.反应温度

重氮化反应的速度随温度的升高而加快，但生成的重氮盐也能随温度的升高而加速分解。 [Ar-N+≡N]Cl-+H2O→Ar-OH+N2↑+HCl

另外，温度高时HNO2易分解逸失，导致测定结果偏高。实践证明，温度在15℃以下，虽然反应速度稍慢，但测定结果却较准确。如果采用“快速滴定”法，则在30℃以下均能得到满意结果。 3.滴定速度 快速滴定法：

将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用亚钠滴定液迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至永停仪的电流计指针突然偏转，并持续1分钟不再回复，即为滴定终点。 4.苯环上取代基团的影响

苯胺环上，特别是在对位上，有其它取代基团存在时，能影响重氮化反应的速度。

（1）亲电子基团，如-NO2、-SO3H、-COOH、X等，使反应加速。 （2）斥电子基团，如-CH3、-OH、-OR等，使反应减慢。 （3）对于慢的重氮化反应常加入适量KBr加以催化。

实验五 复方磺胺甲噁唑片的含量测定

1．在双波长法测定中，如何选择适当的测定波长和参比波长? 双波长分光光度法(双波长等吸收法) (1)测定波长选择：样品在2处有最大吸收

(2)参比波长选择： 对照品吸光度与1处吸光度相等的时候，此时1为参比波长 测定波长一般选测定组分的最大吸收波长，参比波长可选在组分无吸收的位置

ABABB

AAAAlc111A1lcB1

AA2BAA2AB2A2lcAB2lcB

AAAAA2BAA1B(1)lcA2

AB1AB2

2为测定波长, 1为参比波长

可见，在双波长分光光度法中吸光度的差值与干扰组份B无关。

2．本法的主要误差来源何在?

①由化学干扰物引起的误差，但这种误差要比单波长法小得多；

②由物理干扰引起的误差，但可以通过采用较小的双波长差等方法来减少误差，而且这种误差本身就比单波长法更小；

③由仪器的非理想性如比色杯的性质和位置，以及信号失调、狭缝过大和杂散光等引起的误差，其中尤以后者引起的误差为大，因此要求仪器的波长精度在高并且尽量减少杂散光。 3．在选择实验条件时，是否应考虑赋形剂等辅料的影响?如何进行?

上图中，线4表示辅料，应当考虑，测定波长大于辅料紫外吸收为0的截止波长

实验六 阿司匹林Aspirin的红外光谱(IR, Infrared Spectroscopy)鉴别 1．傅里叶变换红外光谱仪是基于什么原理进行分光的?

化合物受红外辐射照射后，使分子的振动和转动运动由较低能级向较高能级跃迁，从而导致对特定频率红外辐射的选择性吸收，形成特征性很强的红外吸收光谱，红外光谱又称振-转光谱。所用仪器应按现行国家质量与核查技术监督局傅里叶变换红外光谱仪检定规程”和《中国药典》附录规定，并参考仪器说明书，对仪器定期进行校正检定 2．压片法制样应注意什么?

a、确认使用的KBr是分析纯或者光谱纯；

b、使用的研磨用具均应清洗干净并烘干后，再使用

c、研磨KBr时应按同一方向（顺时针或逆时针）均匀用力，如不按同一方向研磨，有可能在研磨过程中使待测样品产生转晶，从而影响测定结果

d、研磨时必须保证所处环境的干燥度，若保证不了，可在红外烤灯下进行研磨，或者将研磨好的KBr粉末放入烘箱烘干再使用；

e、保证研磨的KBr颗粒度足够小，研磨到试样中不再有肉眼可见的小粒子即可，以保证KBr压片的均匀度和透明度

f. 在使用压片机的时候，要保证压力大小在12~25MPa之间，时间在1分钟左右即可.

g. 以溴化钾最常用。若供试品为盐酸盐，可比较氯化钾压片和溴化钾压片法的光谱，若二者没有区别，则使用溴化钾。

3．测定红外吸收光谱时对样品有何要求?

关于样品的纯度 提取后活性成分的纯度在90%～95%的范围内就能基本满足制剂红外鉴别的要求。 4. 对照品比较法和图谱比较法各有什么特点？

a. 对照品比较法的要求是对照品和供试品在同一条件下测定。能得到较为准确的测定IR光谱 b. 图谱比较法较为方便.一定程度上能完成定性任务

实验七 薄层扫描法测定卷烟中尼古丁的含量

1. 讨论薄层扫描法的优点和不足之处。

薄层扫描法是用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有紫外光和可见光吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于化合物的鉴别、检查和含量测定的方法。薄层扫描法具有分离效能高、快速、简便、成本低等特点，因而适用于中药的分析。薄层扫描法虽然精密度不如HPLC,GC法高，但可作为补充，用于无紫外吸收，或不能用HPLC法分析的组分如蔗糖酯、贝母生物碱等

2. 本实验采用双波长扫描的原理是什么？

如采用双波长扫描，应选用待测斑点无吸收或最小吸收的波长为参比波长，供试品色谱中待测斑点的比移值(Rf值)和光谱扫描得到的吸收光谱图或测得的光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结果的准确性。薄层扫描定量测定应保证供试品斑点的量在线性范围内，必要时可适当调整供试品溶液的点样量，供试品与对照品同板点样、展开、扫描测定和计算。

3. 对照品溶液与供试品溶液为什么分别交叉点于同一硅胶G薄层板上? 显色，烘干后，为什么在薄层板

上覆盖同样大小的玻璃板，并且周围用胶布固定? 4. 思考薄层扫描法分析误差的主要来源。 . a. 点样大小 b. 展开误差 c.斑点定位 d.测量误差 实验八维生素B1注射液的含量测定

1．单色光不纯对于测得的吸收曲线有何影响?

偏离Lambert-Beer定律，降低灵敏度

2．测定max ± (1～ 2)nm 处的吸光度，表示何意义，为什么？

测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸收峰波长±2 nm以内测试几个点的吸光度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2 nm以内，并以吸光度最大的波长作为测定波长。一般供试品溶液的吸光度读数，以在0.3～0.7之问的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度的十分之一，否则测得的吸光度会偏低；狭缝宽度的选择，应以减小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增大为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数后再计算含量。 3.紫外测定中，空白比色皿的校正原则是什么？

使用的石英吸收池必须洁净。当吸收池中装入同一溶剂，在规定波长测定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3％以下者可配对使用，否则必须加以校正。

实验九 荧光分光光度法测定维生素B2片的含量 1.试解释荧光光度法较吸光度法灵敏度高的原因

某些物质受紫外光或可见光照射激发后能发射出比激发光波长较长的荧光。物质的激发光谱和荧光发射光谱，可以用作该物质的定性分析。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系，可以用作定量分析。荧光分析法的灵敏度一般较紫外一可见分光光度法为高，但浓度太高的溶液会有“自熄灭”作用，以及由于在液面附近溶液会吸收激发光，使发射光强度下降，导致发射光强度与浓度不成正比。故荧光分析法应在低浓度溶液中进行。

2．维生素B2在pH=6~7时荧光最强，本实验为何在酸性溶液中测定？

维生素B2溶液在430～440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。维生素B2在pH＝6～7的溶液中荧光强度最大，在pH=11的碱性溶液中荧光消失，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质-光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。

实验十AAS法龙牡壮骨颗粒中钙的含量

1．原子吸收分光光度计、紫外一可见分光光度计与红外分光光度计的光源有何不同?

AAS----原子空心阴极灯；

UV----Ultra Spectrum(氘灯)/Visible Spectrum(钨灯); IR----Nernst 灯

2．原子吸收分光光度计和紫外一可见分光光度计中均有单色器，其作用有何不同?

UV----把光源的光在通过试样之前转为特定波长的光，然后检测 AAS----把特征谱线与邻近谱线分开在检测器之前，火焰之后 3．肝素钠中为什么要检查钾盐的含量?

在相同条件下进行处理和测定，通过比较对照溶液和供试品溶液的吸光度，以确定杂质含量是否超过限量。由于原子吸收法对钾具有较高的检测灵敏度，本实验采用该法进行肝素钠中杂质钾盐的检查。 4．龙牡壮骨颗粒的含量测定中，溶液制备时加入镧试液的作用是什么?

试样存的铝、钛、铁、硅酸根、硫酸根对测定有抑制作用而干扰测定，加入释放剂氯化锶或氯化镧可消除干扰。直接测定钙灵敏度低 加镧做增感剂