几种杀菌剂对致病疫霉抗甲霜灵菌株的活性测定_朱桂宁

农　药

AGROCHEMICALS

Vol. 47, No. 3Mar. 2008

　　应用技术－几种杀菌剂对致病疫霉抗甲霜灵菌株的活性测定朱桂宁，黄福新，刘志明，秦碧霞，蔡健和

（广西农业科学院　植物保护研究所，南宁　５３０００７）

摘要：测定了几种杀菌剂对致病疫霉抗甲霜灵菌株ＴＺ２５的室内毒力和盆栽防治效果。　结果表明，嘧菌酯、氟啶胺、银法利（６．２５％氟吡菌胺＋６２．５％霜霉威盐酸盐）和丙森锌对ＴＺ２５有很好的抑制作用，它们对ＴＺ２５菌丝生长的ＥＣ５０值分别为０．０２２　５、０．１５６　０、０．９０８　５、４．３６６　５　ｍｇ／Ｌ，对ＴＺ２５孢子囊萌发的ＥＣ５０值分别为０．０３０　１、０．１３７　８、２．０４４　５　ｍｇ／Ｌ。　嘧菌酯、氟啶胺、银法利与甲霜灵没有交互抗性。　盆栽试验结果表明，嘧菌酯、氟０．４１４　３、

啶胺和银法利能很好地防治由ＴＺ２５引起的番茄晚疫病，防治效果分别为８６．７６％、８２．１５％、８５．２０％。关键词：致病疫霉；抗甲霜灵菌株；活性测定

中图分类号：Ｓ４８２．２　　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　　　文章编号：１００６－０４１３（２００８）０３－０２３１－０３

Bioactivitiy of Fungicides to Metalaxyl Resistant Isolate

of Phytophthora infestans

ZHU Gui-ning, HUANG Fu-xin, LIU Zhi-ming, QIN Bi-xia, CAI Jian-he

(Institute of Plant Protection, Guangxi Academy of Agricultural Sciences, Nanning 530007, China)

Abstract: The bioactivity of several fungicides to metalaxyl resistant isolate TZ25 of Phytophthora infestans wasstudied. The results showed that azoxystrobin, fluazinam, infinito (6.25% fluopicolide + 62.5% propamocath) and propinebgave strong fungistatic actions against TZ25. Their EC50 values to mycelial growth of TZ25 were 0.0225, 0.1560, 0.9085 and4.3665 mg/L, respectively, and to sporangia germination were 0.0301, 0.1378, 0.4143 and 2.0445 mg/L, respectively.There was no cross resistance between metalaxyl and azoxystrobin, fluazinam, or infinito. The results of pot cultureexperiments indicated that azoxystrobin, fluazinam and infinito were effective for the control of tomato late blightcaused by TZ25, and their control effects were 86.76, 82.15 and 85.20%, respectively.Key words: Phytophthora infestans; metalaxyl resistant isolate; bioassay

致病疫霉（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）引起的晚疫病是马铃薯和番茄上最重要的病害之一［１－３］，在我国各地均有发生。　甲霜灵（ｍｅｔａｌａｘｙｌ）被广泛使用于晚疫病的防治。　由于该杀菌剂已被使用多年，且其对病原菌的作用位点单一，病菌极易产生抗药性［４］。　目前，许多国家和地区相继报道致病疫霉对甲霜灵产生了抗药性［５－８］。　我国河北、福建、重庆、云南等地也有类似报道［１－３，９－１２］。　为了筛选出能替代甲霜灵来防治晚疫病的杀菌剂，特别是具有不同作用机制的杀菌剂，以增加可用药剂品种、减缓病原菌抗药性的产生，我们测定了银法利等几种杀菌剂对致病疫霉抗甲霜灵菌株的室内毒力和盆栽防治效果。

１．２　　供试菌株

供试菌株ＮＭ１０、ＴＤ０１、ＴＬ０９、ＳＱ３、ＳＱ１８、ＮＮ１８、ＴＤ０４、ＴＺ０４、ＴＺ２５分离自广西田间自然发病番茄植株，按王文桥等［１］的方法分别为甲霜灵敏感型菌株［ＭＳ，ＥＣ５０＜０．０１　ｍｇ／Ｌ、中间型菌株（ＭＩ，０．０１　ｍｇ／Ｌ≤ＥＣ５０≤１０　ｍｇ／Ｌ）和抗性型菌株（ＭＲ，ＥＣ５０＞１０　ｍｇ／Ｌ），见表１］。

表１　　供试菌株的来源及对甲霜灵的敏感类型

菌株号

ＮＭ１０ＴＤ０１ＴＬ０９ＳＱ０３ＳＱ１８ＮＮ１８ＴＤ０４ＴＺ０４ＴＺ２５

来源田阳县田东县田林县武鸣县武鸣县南宁市田东县田阳县田阳县

ＥＣ５０值／（ｍｇ・Ｌ－１）

０．００５８０．００２９０．００４５０．８４３９０．５２３９０．０１１２４１０．３７０９３９２．４５０２５４２．３８５９

敏感类型ＭＳＭＳＭＳＭＩＭＩＭＩＭＲＭＲＭＲ

１　　材料与方法

１．１　　供试药剂

６８．７５％银法利ＳＣ（６．２５％氟吡菌胺＋６２．５％霜霉威盐酸盐）、７０％丙森锌ＷＰ为拜耳公司提供，５０％氟啶胺ＳＣ为日本石原产业公司提供，９５．４％甲霜灵ＴＣ由江苏宝灵化工股份有限公司提供，２５％嘧菌酯ＳＣ为市售英国先正达有限公司产品。

收稿日期：２００７－１１－０６，修返日期：２００８－０２－０１基金项目：广西省青年基金资助项目（桂科青０３３９０１６）

１．３　　培养基的制备１．３．１　　黑麦培养基

称取黑麦５０　ｇ，放入１００　ｍＬ蒸馏水中，在１８　℃下浸泡

作者简介：朱桂宁（１９６８－），女，广西武宣县人，副研究员，硕士，主要从事植物病理学及杀菌剂抗药性研究。　Ｅ－ｍａｉｌ　：ｇｎｚｈｕ＠１２６．ｃｏｍ。

２３２农　　药　 AGROCHEMICALS第４７卷

２４　ｈ，捣碎机捣碎，５５　℃￣６０　℃水浴２　ｈ，２层纱布过滤两次，滤液加蒸馏水补至１　０００　ｍＬ，加入琼脂粉１８　ｇ，常规灭菌，用于辣椒疫霉病菌培养和保存。

１．６．１　　盆栽番茄植株的准备

供试番茄品种为特级大明星，广东省湛江市大地蔬菜种子有限公司生产。　将番茄种子播在苗钵中，待其长至１０￣１２叶时备用，每处理１８株，重复３次。

１．３．２　　黑麦粒培养基

称取黑麦１．０　ｇ，放入１０　ｍＬ的试管中，加入６　ｍＬ蒸馏水，在１８　℃下浸泡１２　ｈ，常规灭菌，用于辣椒疫霉病菌的保存。

１．６．２　　施药

将２５％嘧菌酯ＳＣ、５０％氟啶胺ＳＣ、６８．７５％银法利ＳＣ和９５．４％甲霜灵ＴＣ分别稀释成有效质量浓度为１６７、３３３、４５８、５００　ｍｇ／Ｌ的药液，均匀喷施到番茄植株上，以叶片充分着药而不滴药液为宜，对照喷施等量清水。

１．４　　对抗甲霜灵菌株ＴＺ２５的离体毒力测定１．４．１　　供试药剂对菌丝生长的ＥＣ５０值测定

在预备试验的基础上，选择各杀菌剂对致病疫霉抗甲霜灵菌株ＴＺ２５菌丝生长的抑制率在１０％￣９５％范围内的５￣６个质量浓度；将各药剂分别用灭菌蒸馏水配成一定质量浓度的母液，按照体积比１∶１００的比例分别加入到溶化后冷却至５０　℃左右的黑麦琼脂培养基中，充分摇匀后倒入直径９　ｃｍ的灭菌培养皿中，制成系列质量浓度的含药培养基平板，以加入灭菌蒸馏水的培养基平板为对照。　用打孔器从预先在１８　℃培养了７　ｄ的菌株ＴＺ２５的菌落边缘均匀打取直径为５　ｍｍ的菌块，菌丝面朝下接种到各含药培养基平板，每处理接种３皿，置于１８　℃黑暗下培养８　ｄ后，用十字交叉法测量各处理的菌落直径，计算各药剂处理对菌落扩展的生长抑制率，根据生物统计几率值换算表，将抑制百分率换算成抑制几率值，以试验中设定的质量浓度对数为横坐标，抑制几率值为纵坐标，求出毒力回归方程、相关系数和ＥＣ５０值。

１．６．３　　接种及调查方法

施药后第２　ｄ进行病原菌接种。　按１．４．２的方法配制菌株ＴＺ２５的孢子囊悬浮液（５×１０７个孢子囊／Ｌ），置于１０　℃冰箱中２￣３　ｈ后取出，以释放的游动孢子进行接种。　接种采用喷雾法，每处理３次重复共５４株番茄喷施２５０　ｍＬ游动孢子悬浮液。　接种后的番茄保持１００％　ＲＨ、（２０±２）　℃条件下２４　ｈ，以后保持７５％￣９０％　ＲＨ、（２０±２）　℃、每天光照１４　ｈ。计算病情指数和防治接种后第７　ｄ调查病害的发生情况，

效果。　病情分级标准按王添成的方法［１３］进行。　０级：无病症；１级：病斑细小，叶面积被害率≤５％；２级：型３级：叶部有病斑，茎病斑，５％＜叶面积被害率≤１５％；４级：茎部病斑部无病斑，１５％＜叶面积被害率≤３０％；少量，３０％＜叶面积被害率≤６０％；５级：茎部病斑扩展型，６０％＜叶面积被害率≤９０％；６级：茎部严重受害，叶面积被害率＞９０％，甚至植株死亡。

１．４．２　　供试药剂对孢子囊萌发的ＥＣ５０值测定

各杀菌剂用灭菌蒸馏水配成系列质量浓度的母液备用。　再用灭菌蒸馏水从培养了１４　ｄ、已产生大量孢子囊的培养基平板上洗下病菌孢子囊，经灭菌纱布过滤后制成孢子囊悬浮液，并用血球计数板将孢子囊浓度调节到约５×１０个孢子囊／Ｌ。　分别量取各杀菌剂系列质量浓度的母液２．５　ｍＬ，放入直径为６　ｃｍ的小培养皿中，加入２．５　ｍＬ的孢子囊悬浮液，混匀，以加入等量灭菌蒸馏水的孢子囊悬浮液为对照，每处理３次重复。　将各处理的孢子囊悬浮液置于１８　℃恒温箱中培养３￣６　ｈ，待对照孢子囊萌发率超过６０％时，镜检孢子囊萌发率，每重复检测１００个孢子囊，计算各杀菌剂对孢子囊萌发的抑制率，求出毒力回归方程、相关系数和ＥＣ５０值。

７

２　　结果与分析

２．１　　对抗甲霜灵菌株ＴＺ２５菌丝生长的抑制效果

各药剂对菌株ＴＺ２５菌丝生长的毒力回归方程、相关系数和ＥＣ５０值（有效成分，下同）见表２。　各药剂对菌株ＴＺ２５的菌丝生长均有较好的抑制作用，其中以嘧菌酯的氟啶胺和银法利的ＥＣ５０值活性最高，ＥＣ５０值为０．０２２　５　ｍｇ／Ｌ，也较低，分别为０．１５６　０、０．９０８　５　ｍｇ／Ｌ，丙森锌的ＥＣ５０值为４．３６６　５　ｍｇ／Ｌ。

表２　　各药剂对ＴＺ２５菌丝生长的抑制效果

　　　　药剂２５％嘧菌酯ＳＣ５０％氟啶胺ＳＣ７０％丙森锌ＷＰ

毒力回归方程（ｙ＝）　　　相关系数（ｒ）　　　ＥＣ５０／（ｍｇ・Ｌ－１）６．９８０２＋１．２０１２ｘ５．７４７６＋０．９２６５ｘ３．６１０２＋２．１７１４ｘ

０．９９１１０．９９０６０．９８３１０．９９２８

０．０２２５０．１５６００．９０８５４．３６６５

６８．７５％银法利ＳＣ５．０７１７＋１．７２１７ｘ

１．５　　与甲霜灵的交互抗药性测定

按１．４．１的方法，分别测定嘧菌酯、氟啶胺和银法利对甲霜灵不同敏感类型菌株的菌丝生长ＥＣ５０值，甲霜灵敏感型菌株、中间型菌株和抗性型菌株各测定３个，比较分析各杀菌剂与甲霜灵的交互抗药性。

２．２　　药剂对孢子囊萌发的抑制效果

各药剂对菌株ＴＺ２５孢子囊萌发的毒力回归方程、相关系数和ＥＣ５０值见表３。　各药剂对菌株ＴＺ２５孢子囊萌发抑制活性最好的仍然是嘧菌酯，其ＥＣ５０值为０．０３０　１　ｍｇ／Ｌ，氟啶胺和银法利的ＥＣ５０值仍然不到１．０　ｍｇ／Ｌ，分别为０．１３７　８、

１．６　　盆栽防治试验

第３期朱桂宁，等：　几种杀菌剂对致病疫霉抗甲霜灵菌株的活性测定

２３３

０．４１４　３　ｍｇ／Ｌ，丙森锌的ＥＣ５０值为２．０４４　５　ｍｇ／Ｌ。

表３　　药剂对番茄晚疫病孢子囊萌发的抑制效果

　　　　　　　　　　药剂２５％嘧菌酯ＳＣ５０％氟啶胺ＳＣ７０％丙森锌ＷＰ

　毒力回归方程（ｙ＝）相关系数（ｒ）ＥＣ５０／（ｍｇ・Ｌ－１）７．７９４６＋１．８３７４ｘ５．７３９０＋０．８５８６ｘ４．８１９１＋０．５８２２ｘ

０．９９０２０．９９５３０．９９２８０．９９４８

０．０３０１０．１３７８０．４１４３２．０４４５

比较嘧菌酯、氟啶胺和银法利对甲霜灵不同敏感类型菌株的菌丝生长ＥＣ５０值（见表４），发现分别对甲霜灵表现为敏感型、中间型、抗性型的菌株对嘧菌酯、氟啶胺和银法利的敏感性并无明显差异，９个菌株对嘧菌酯、氟啶胺和银０．１２３　５￣１．４７１　３、法利的ＥＣ５０值范围分别为０．０１４　３￣０．０４３　６、

０．３３３　８￣１．０４９　３　ｍｇ／Ｌ，说明嘧菌酯、氟啶胺、银法利和甲霜灵无交互抗性。

６８．７５％银法利ＳＣ５．５７７３＋１．５０８５ｘ

２．３　　交互抗药性

表４　　银法利等杀菌剂与甲霜灵的交互抗药性

药剂２５％嘧菌酯ＳＣ５０％氟啶胺ＳＣ６８．７５％银法利ＳＣ９５．４％甲霜灵ＴＣ

　　　　　各菌株ＥＣ５０／（ｍｇ・Ｌ－１）

ＮＭ１００．０４３６０．７２８５１．０４９３０．００５８

ＴＤ０１０．０２８８１．４７１３０．８４２５０．００２９

ＴＬ０９０．０１４３０．２８０７０．７８９９０．００４５

ＳＱ１８０．０４１５０．４１２８０．９７４３０．５２３９

ＳＱ０３０．０３０５０．１２３５０．５５０１０．８４３９

ＮＮ１８０．０２７６０．６４２６０．４１７５０．０１１２

ＴＤ０４０．０３３３１．２０４５０．３３３８４１０．３７０９

ＴＺ０４０．０３２８０．２７２６０．５８０２３９２．４５０２

ＴＺ２５０．０２２５０．１５６００．９０８５５４２．３８５９

２．４　　盆栽防治效果

各药剂对致病疫霉抗甲霜灵菌株ＴＺ２５引起的晚疫病的盆栽防治效果见表５。　喷施嘧菌酯、氟啶胺和银法利的处理区防治效果分别为８６．７６％、８２．１５％、８５．２０％，三者之间差异不显著，它们均显著好于甲霜灵的防治效果，差异达极显著水平。　其中嘧菌酯的防治效果最好，其次是银法利，而甲霜灵的防治效果仅为２９．９３％。

表５　　银法利等杀菌剂对致病疫霉抗甲霜灵菌株

ＴＺ２５的盆栽防治效果

药剂处理／（ｍｇ・Ｌ－１）２５％嘧菌酯ＳＣ　　　　　　　１６７５０％氟啶胺ＳＣ　　　　　　　３３３６８．７５％银法利ＳＣ　　４５８９５．４％甲霜灵ＴＣ　　　５００清水对照

病情指数１０．８０１４．５１１２．０４５７．１０８１．４８

防治效果／％差异显著性８６．７６８２．１５８５．２０２９．９３

ａＡａＡａＡｂＢ

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Ｔｒａｉｎｉｎｇ　Ｗｏｒｋｓｈｏｐ　ｏｎ　Ｔｏｍａｔｏ　Ｌａｔｅ　Ｂｌｉｇｈｔ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ　ａｎｄ　Ｆｌｏｗｅｒｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄ－ｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，　２００３：　３９．

注：表中大、小写字母分别表示１％、５％水平上的差异显著性。

３　　结论与讨论

嘧菌酯、氟啶胺、银法利和丙森锌对致病疫霉抗甲霜灵菌株ＴＺ２５的菌丝生长、孢子囊萌发均具有很好的抑制作用，除丙森锌外，它们对菌株ＴＺ２５的菌丝生长、孢子囊萌发的ＥＣ５０值均不到１．０　ｍｇ／Ｌ。　嘧菌酯、氟啶胺、银法利与甲霜灵没有交互抗性。　盆栽防治试验中，嘧菌酯、氟啶胺、银法利对抗甲霜灵菌株ＴＺ２５引起的晚疫病的防治效果均达８０％以上。　因此，可以用这些杀菌剂作为替代甲霜灵的药剂来防治番茄晚疫病。

由于不能将抗性菌株大面积接种到田间，本研究中抗甲霜灵菌株ＴＺ２５的防治试验是在人工气候室的盆栽小苗中进行的，试验条件比较利于晚疫病的发生和扩展，与自然条件下田间番茄晚疫病的发生有一定的差异，因此防治效果也可能会有一定的差异。

责任编辑：赵平