・实验研究・ ２０１２年５月第９卷第ｌ３期 不同培养基和促成熟组合对人外周血来源 树突状细胞发育的影响 金悦 ０，３ 张斌 陈虎∞ １．解放军军医进修学院，北京 １００８５３；２．军事医学科学院附属医院造血干细胞移植科，北京 １０００７１； ３．军事医学科学院细胞与基因治疗中心，北京 １０００７１ 【摘要】目的探讨Ｘ—ＶＩＶＯ １５ＴＭ和ＣｅｌｌＧｒｏ两种培养基和不同促成熟方法对人外周血来源单核细胞向树突状细胞 （ＤＣ）发育分化的影响。方法利用ＧＭ—ＣＳＦ＋ＩＬ一４细胞因子组合，改变促成熟方法，通过对未成熟和成熟ＤＣ形态 观察。用流式细胞仪检测细胞表型，应用ＥＬＩＳＡ法检测不同培养体系上清液中所含细胞因子的变化，分析不同培养 基和不同促成熟方法对ＤＣ功能的影响。结果促成熟方法一致的前提下，两种培养基培养的ＤＣ在形态上无显著 差异．但应用ＣｅｌｌＧｒｏ培养的ＤＣ的ＣＤ８３表达高于Ｘ—ＶＩＶ０培养的。在培养基一致的前提下，鸡尾酒组培养的ＤＣ 的ＣＤ８３表达高于ＴＮＦ一 组。结论不同的培养体系可获得功能不同的ＤＣ。 【关键词】ｘ—ＶⅣｏ １５ＴＭ；Ｃｅ￣Ｇｒｏ；树突状细胞；单核细胞 【中图分类号】Ｒ３２９．２８ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１６７３－７２１０（２０１２）０５（ａ）－００３４－０４ Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ０ｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉａ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ａ ｍａｔｕｒｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｏｎ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌ００ｄ—ｄｅｒｉｖｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉＣ ｃｅｌｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ＪｌＮ Ｙｕｅｌ３３ ＺＨＡ ＮＧ Ｂｉｎｚ３‘ ＣＨＥＮ Ｈ ，３‘ １．Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ ＰＬＡ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００８５３，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ， ｔｈｅ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｔｏ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００７１，Ｃｈｉｎａ；３．Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｂｅｉｉｉｎｇ １０００７１．Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ａｐｐｒｏａｃｈ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＣ ｆｒｏｍ ＭＣ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｂｙ Ｘ－ＶＩＶＯ ｌ５ＴＭ ａｎｄ ＣｅｌｌＧｒｏ ｔｗｏ ｔｙｐｅｓ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｏ ｕｔｉｌｉｚｅ ＧＭ—ＣＳＦ＋ＩＬ一４ ｃｙ— ｔｏｋｉｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｌｔｅｒ ｏｆ ｍａｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ，ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｖ ｃｅｌｌ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＡ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｆｏｒ ＤＣ ｏｎ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｂｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｉｍｍａ－ ｔｕｒｅ ａｎｄ ｍａｔｕｒｅ ＤＣ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ０ｎ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｐｒｅｍｉｓｅ，ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｕｓ ｏｆ ｔｗｏ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ＤＣ ｗｅｒｅ ｎｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．ｂｕｔ ＤＣ ｏｆ ｕｓｉｎｇ ＣｅｌｌＧｒｏ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ＣＤ８３ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ＤＣ ｏｆ ｕｓｉｎｇ Ｘ—ＶＩＶＯ ｍｅｄｉｕｍ． Ｉｎ ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｐｒｅｍｉｓｅ．ｔｈｅ ＤＣ ｏｆ ｃｏｃｋｔａｉ１ ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ＣＤ８３ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ＴＮＦ— ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｕｈｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ ｃａｎ ｏｂｔａｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ＤＣ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｘ～ＶＩＶ０ １５ＴＭ；ＣｅｌｌＧｒｏ；ＤＣ；ＭＣ 树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ，ＤＣ）是目前公认的体内功能 最强大的专职性抗原提呈细胞（ａｎｔｉｇｅｎ—ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌ１． ＡＰＣ），它能激活静止型Ｔ细胞，是启动、调控、维持免疫反应 的中心环节，并在肿瘤、器官移植、感染等领域显示出免疫治 胞及其在获得性免疫中的作用”获得诺贝尔生理学和医学 奖。树突状细胞也因此再一次成为人们研究的焦点。ＤＣ在肿 瘤、感染、器官移植等领域已显示出其免疫治疗的有效性及 可行性．但体内ＤＣ数量极少．在外周血单个核细胞中所占 疗的有效性。但人体内大部分ＤＣ处于非成熟状态，表达低 水平的共刺激因子和黏附因子．体外激发同种混合淋巴细胞 增殖反应的能力较低，成熟的ＤＣ表达高水平的共刺激因子 和黏附因子，在成熟的过程中，由接触抗原的外周组织迁移 进入次级淋巴器官，与Ｔ细胞接触并激发免疫应答。２０１１年．美 国洛克菲勒大学教授、免疫学家Ｒａｌｐｈ ＭＳ因“发现树突状细 【基金项目】北京市科技计划课题（课题名称：脐带问充质干细胞对移植 物抗宿主病的防治作用，课题编号：Ｚ１１ｌ１０７０５８８１１１０７）。 比例低，故目前临床所用ＤＣ多是采集ＤＣ前体细胞后，经体 外培养得到成熟ＤＣ细胞【１－２］。然而，人的ＤＣ培养体系不同， 体外得到的ＤＣ数量也不同．ＤＣ的功能也有较大差异，因 此，本课题组对比两种培养基和不同促成熟因子组合对人外 周血来源ＤＣ发育的影响．旨在为优化人外周血来源ＤＣ培 养体系奠定基础。 １材料与方法 １．１材料 １．１．１主要试剂 【作者简介】金悦（１９８６一），女，２００９级在读硕士研究生，主要从事细胞免 疫治疗研究。 通讯作者 淋巴细胞分离液（天津市灏洋生物制品科技有限责任公 司，临床使用标准Ｃａｔ ＬＴＳ１０７７）；重组人粒细胞一巨噬细胞集 ３４中国医药导报ＣＨＩＮＡ ＭＥＤｌＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ ２０１２年５月第９卷第１３期 ・实验研究・ 落刺激因子（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ＧＭ—ＣＳＦ，ｒｈＧＭ—ＣＳＦ）。重组 人白细胞介素（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ，ｒｈｌＬ）一４，重组 人肿瘤坏死因子一 （ｒｈＴＮＦ一０１）购自美国ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ公司．重 表１六组ＤＣ编号 组人白细胞介素（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ，ｒｈＩＬ）一１Ｂ，重 组人白细胞介素（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ．ｒｈｌＬ）一６购 自美国ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ公司，前列腺素Ｅ２（Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２，ＰＧＥ２） 购自美国Ｓｉｇｍａ公司；ＲＰＭＩ １６４０细胞培养液购自某公司． ＣｅｌｌＧｒｏ无血清树突状细胞培养基购自Ａ公司，无血清培养 基Ｘ—ＶＩＶＯ １５ＴＭ购自Ｂ公司，细胞因子定量检测酶联免疫 吸附试验（ＥＬＩＳＡ）试剂盒购自中国深圳达科为生物技术有限 １．２．２．１ ＤＣ的形态学观察用倒置显微镜每日观察细胞生长 情况及形态的变化情况，第６天和第８天用０．４％台盼蓝对 三组ＤＣ进行染色，观察细胞存活率。细胞的存活率计算公 式：存活率＝染色阴性细胞数／细胞总数×１００％ １．２．２．２ ＤＣ的表型分析培养第８天．将六组ＤＣ收获．分别 公司。 １．１．２主要仪器 超净工作台；二氧化碳恒温培养箱：倒置显微镜（ＯＬＹＭ— ＰＵＳ）；流式细胞仪（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ，ＢＤ公司）；全自动酶标仪； 电动移液器（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）；６孔、１２孔细胞培养板若干。２５、１５、 １０ ｍＬ移液管若干。 １．２人外周血来源Ｄｃ的体外培养方法 １．２．１人外周血单个核细胞的获取 采集肿瘤患者静脉外周血６０ ｍＬ。肝素钠抗凝（２０ Ｕ／ｍＬ 全血），生理盐水等量稀释。在处于正常工作状态的生物安全 柜中，将采血袋中血液分装到两个５０ ｍＬ离心管中，用生理 盐水补足每管至４０ ｍＬ。平衡后，以转速２ ０００ ｒ／ｍｉｎ在２０℃ 下离心８ ｍｉｎ。将上述离心管中的血细胞与０．９％生理盐水用 ３０ ｍＬ生理盐水悬起混匀后，缓慢加到含有１５ ｍＬ室温 Ｆｉｃｏｌｌ的５０ ｍＬ离心管中。平衡后，以转速２ ０００ ｒ／ｍｉｎ在２０℃ 下离心２０ ｍｉｎ（无离心刹车状态）。离心完毕后，用１０ ｍＬ移液 管仔细小心吸取第２层白膜层细胞到新５０ ｍＬ离心管中，每 管中白膜层细胞８～１５ ｍＬ。向上述离心管中加入０．９％生理 盐水至４０ ｍＬ．以转速１ ８００ ｒ／ｍｉｎ在２０℃下离心８ ｍｉｎ．弃上 清后，加入２ ｍＬ ０．９％生理盐水进行重悬。向上述细胞重悬 后的离心管中加入ｏ．９％生理盐水至３０ ｍＬ．以转速１ ６００ ｄｍｉｎ在 ２Ｏ℃下离心８ ｍｉｎ．弃上清后．加入２ ｍＬ ０．９％生理盐水进行 重悬。向上述离心管中加入含０．９％生理盐水至３０ ｍＬ，以转 速１ ４００ ｒ／ｍｉｎ在２０℃下离心８ ｍｉｎ，弃上清后，加入２ ｍＬ无 血清培养基进行重悬。需要注意的是，清洗ＰＢＭＣ白膜时，３ 次离心速度必须要梯度降低，以尽可能地除去血小板。末次 离心后，吸去上清，加入ＲＰＭＩ １６４０液重悬细胞，调整细胞密 度为３ｘ１０６／ｍＬ，分别加入１２孔板中，１ ｍ 孔，３７℃、５％ＣＯ 孵箱中培养２－４ ｈ，轻轻洗出悬浮细胞（留作后用），贴壁细胞 为单核细胞。 １．２．２ ＤＣ ５的体外诱导 轻轻洗去完全贴壁４ ｈ的单核细胞培养板中的ＲＰＭＩ １６４０液，分别加入含ＧＭ—ＣＳＦ（１００ ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ一４（２００ ｎｇ／ｍＬ） 的ＣｅｌｌＧｒｏ和Ｘ—ＶＩＶＯ两种不同培养基，３７℃、５％ＣＯ２孵箱中 培养，第３天半量换液１次。培养第６天，向两种培养基中加 入两种不同组合的促成熟因子，第一种组合为：ＴＮＦ （１０ ｎｇ／ｍＬ）、 ＩＬ一１Ｂ（１０ ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ一６（１ ０００ Ｕ／ｍＬ）、ＰＧＥ２（１０ ｎｇ／ｍＬ），简称 鸡尾酒组１，设两个副孔。第二种组合为：ＴＮＦ一 （１０ ｎｇ／ｍＬ）， 简称ＴＮＦ—ｄ组，设两个副孔。对照组不添加任何促成熟因 子。将六组ＤＣ按表１编号。具体见表１。 用４℃的ＰＢＳ洗涤两次，重悬细胞数为５ｘｌ０６／ｍＬ．加入 Ｅｐｐｅｎｄｏｒ管中，每管２００ ｔｘＬ，按照制造商说明的方法加入抗 ＣＤ８０、抗ＣＤ８３，置４℃冰箱３０ ｍｉｎ。然后用４℃ＰＢＳ洗涤两 次除去游离荧光抗体，上机进行流式细胞表型分析。用对照 组作阴性对照，用阳性细胞比例来表示ＤＣ表型和成熟度。 １．２．２－３细胞因子检测培养第８天．采用双抗夹心酶联免疫 吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）分别检测六组ＤＣ上清液中ＩＬ一１２ｐ７０、 ＩＬ一１０的含量，方法按照商家说明进行．建立标准曲线，每组 ３个复孔，每组试验重复６次。 １．３统计学方法 采用统计软件ＳＰＳＳ １５．０对实验数据进行分析。计量资 料数据以均数±标准差（ ）表示，采用方差分析，两两比较 采用ＬＳＤ—ｔ检验。以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ２结果 ２．１树突状细胞的培养形态 从倒置显微镜下观察两种培养基培养的细胞形态可以 看出．在培养初期Ｘ—ＶＩＶＯ培养基培养的ＤＣ繁殖较快，但 随着培养时间的延长，ＣｅｌｌＧｒｏ培养的细胞繁殖情况也与Ｘ— ＶＩＶＯ基本一致。观察培养第６天和第８天的ＤＣ，可见两种 不同培养基培养的ｉＤＣ和ｍＤＣ都具备未成熟与成熟ＤＣ的 典型镜下特征：未成熟的细胞呈圆球状，表面无明显突起，而 加入两种促成熟因子组合的ＤＣ．则表现出成熟树突状细胞 表面特有的明显的不规则突起，但肉眼不能区分两种组合对 ＤＣ的促成熟能力（图１）。经０．４％台盼蓝染发显示细胞存活 率均＞９５％。 ２．２树突状细胞的表型分析 收集体外培养第８天的６组ＤＣ，经流式细胞仪检测发 现．未加入促成熟因子的对照组的细胞ＣＤ８０和ＣＤ８３的表 达量都很低（图２）；而无论是Ｘ—ＶＩＶＯ还是ＣｅｌｌＧｒｏ培养的 ＤＣ．加入促成熟因子后，ＣＤ８０和ＣＤ８３的表达量明显高于对 照组。使用鸡尾酒组促成熟的细胞ＣＤ８０和ＣＤ８３的表达均 高于使用ＴＮＦ一 组促成熟的细胞。Ｘ—ＶＩＶＯ鸡尾酒组培养的 ＤＣ．ＣＤ８０（８８．３ｌ±１．０４）％，ＣＤ８３（４３．６６±０．８７）％，Ｘ—ＶＩＶ０ ＴＮＦ一０【组培养的ＤＣ，ＣＤ８０（５０．７４＋２．４５）％，ＣＤ８３（２７．９９￣ １．８８）％。ＣｅｌｌＧｒｏ鸡尾酒组培养的ＤＣ，ＣＤ８０（９５．９２＋３．４４）％， ＣＤ８３ ｆ７０．Ｏ０＿＋２．Ｏ１）％，ＣｅｌｌＧｒｏ ＴＮＦ— 组培养的ＤＣ，ＣＤ８０ （７７．３５＋１．０８）％，ＣＤ８３（５０．４２＋１．８０）％（图３）。 ２．３树突状细胞的细胞因子水平表达情况 六组ＤＣ分泌ＩＬ—ｌＯ和ＩＬ一１２ｐ７０水平，具体见表２。 ３讨论 在过去的１０年中，人们对ＤＣ免疫生物学及其功能调 ＣＨＩＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ中国医药导报３５ ２０１２年５月第９卷第１３期 ● 实验研究 ＤＣ在细胞形态上几乎无差别，但在细胞表型和细胞因子 用于ＤＣ促成熟方面的弊端，目前，有研究显示．鸡尾酒组 分泌上则有很多差异。显然，在相同促成熟条件下。使用 合联合应用ＴＬＲ３配体ｐｏｌｙ Ｉ Ｃ和ＴＬＲ７／８配体Ｒ８４８以及 ＣｅｌｌＧｒｏ培养的ＤＣ的ＣＤ８０、ＣＤ８３均高于使用Ｘ—ＶＩＶＯ培 ＰＧＥ２促成熟的ＤＣ可兼具高迁移能力和高产量的ＩＬ一 养的ＤＣ，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），即说明前者的ＤＣ １２ｐ７０５，还也可以在以后的试验中设计加入ＴＬＲ类配体来 成熟度高于后者，这可能说明ＣｅｌｌＧｒｏ更适合于ＰＢＭＣ来源 证实这一点。 的ＤＣ的体外培养。早在１９９７年，Ｊｏｎｕ｜ｅｉｔ等提出，应用鸡尾 目前ＤＣ的体外培养方法虽已基本满足基础研究的需 酒组合促成熟的ＤＣ被人们称为“标准ＤＣ”。他们证明这项 要，但是应用于临床治疗还需要进一步研究，因此，建立一种 混合物可以诱导ＤＣ的成熟，并且可以完全地取代Ｒｏｍａｎｉ 合理的培养体系仍是今后研究的方向。 等之前提出的条件培养基。后有学者ｌ５１证明了在细胞因子 【参考文献】 组合中添加ＰＧＥ２（１ Ｉｘｇ／ｍＬ）可以进一步增强ＤＣ传代的产 ［１］Ｌａｎｄｉ Ａ，Ｂａｂｉｕｋ ＬＡ，Ｄｒｕｎｅｎ ＬＨ．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｍａｔｕｒｅｄ ｂｙ ａ 量、质量和迁移能力。本实验中的结果显示，在相同培养基 ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２—－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｃｏｃｋｔａｉｌ ｃａｎ ｐｒｏｄｕｃｅ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＩＬ—— 条件下，鸡尾酒组的ＤＣ的ＣＤ８０、ＣＤ８３均高于ＴＮＦ一仅组 １２ｐ７０ ａｎｄ ａｒｅ ｍｏｒｅ ｍａｔｕｒｅ ａｎｄ Ｔｈｌ－ｂｉａｓｅｄ ｔｈａｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｔｒｅａｔｅｄ ＤＣ，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），这说明，鸡尾酒组促成 ｗｉｔｈ ＴＮＦ—ａｌｐｈａ ｏｒ ＬＰＳ【ＪＩ．Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１１，２１６（６）：６４９—６６２． 熟效果优于单纯使用ＴＮＦ一 ，与Ｌａｎｄｉ等【１］得出的结论是一 ［２］Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ Ｕ，Ｗａｈｈｅｒ儿，Ｈｏｆｍａｎｎ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｉｌｓ ａｒｅ ａｂｌｅ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ＩＬ一１２ｐ７０ ａｆｔｅｒ ｕｐｔａｋｅ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｆＪ］．Ｉｍｍｕｕｏｂｉｏｌｏｇｙ， 致的。 ２０１１，２１６（１－２）：２５１－２５５． 笔者在检测ＤＣ表型的基础上。进一步对其作用机制 ［３］Ｃｏｕｐｅｒ ＫＮ，Ｂｌｏｕｎｔ ＤＧ，Ｒｉｌｅｙ ＥＭ．ＩＬ一１０：ｔｈｅ ｍａｓｔｅｒ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆ 进行了初步的探讨。由于细胞因子在ＤＣ的分化与功能等 ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｆＪ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００８，１８０（９）：５７７１—５７７７． 方面都有十分重要的作用，因此，本研究使用ＥＬＩＳＡ的方 ［４］Ｂｏｕｌｌａｒｔ ＡＣ，Ａａｒｎｔｚｅｎ ＥＨ，Ｖｅｒｄｉｊｋ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｙｔｅ— 法，收集各组不同培养体系的上清液，检测细胞因子分泌情 ｄｅｒｉｖｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔ［ ｏｒ ３ ａｎｄ ７／８ ｌ［ ｉｇａｎｄｓ ［ ［况。理论上来讲，在遇到外来抗原。ＤＣ可分泌以ＩＬ一１２和 ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉ叫 ｎ ｈｉ ＂ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１２ ＩＦＮ一＾ｙ为主的细胞因子，介导Ｔｈｌ型免疫反应；对于自身抗 ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ叨．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，２００８，５７ 原，部分其他功能的ＤＣ可通过分泌ＩＬ一１０诱导调节性Ｔ细 （１１）：１５８９—１５９７． ［５］Ｇｅａｙ Ｓ，Ｄａｎｉｅｌ Ｂ，Ｄａｎｉｔａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｍｏｎｌｙ ｕｓｅｄ ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ 胞与Ｔｈ２细胞介导免疫耐受口１。本研究结果显示，相同培养 ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｓ ａｎ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｆｏｒ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃａｌｌｙ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ＴＬＲ ｌｉｇａｎｄｓ ｔｏ 基条件下，鸡尾酒组ＩＬ一１２Ｄ７０和ＩＬ—ｌ０普遍低于ＴＮＦ一 ｍａｔｕｒｅ ｍｏｎｏｃｙｔｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ【ＪＪ．Ｂｌｏｏｄ，２０１０，１１６（４）：５６４— 组，这可能与ＰＧＥ２有关，因为ＰＧＥ２可增加ＤＣ的迁移能 ５７４． 力，但是却抑制ＩＬ一１２ｐ７０和ＩＬ—ｌ０的分泌 ．这是鸡尾酒组 （收稿日期：２０１２—０２—１７本文编辑：卫轲） （上接第３３页） 【参考文献】 Ｄｉｍｍｅｌｅｒ Ｓ，Ａｉｃｈｅｒ Ａ，Ｖａｓａ Ｍ，ｅｔ ａｌ ＨＭＧ－ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ 【１】Ａｓａｈａｒａ Ｔ，Ｍｕｒｏｈａｒａ Ｔ，Ｓｕｌｉｖａｎ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｕｔａｔｉｖｅ Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ （ｓｔａｔｉｎｓ）ｉｎｃｒｅａｓｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ｔｈｅ ＰＩ３－ｋｉｎａｓｅ／Ａｋｔ— Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ【ＪＪ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，２７５：９６４—９６７． ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ】．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，２００１，１０８（３）：３９１－３９７． 【２】Ａｉｃｈｅｒ Ａ，Ｒｅｎｔｓｃｈ Ｍ，Ｓａｓａｋｉ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｎｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ—ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｉｒｃｕｌａｒ— Ｉｎｇｒａｉｎ ＤＡ，Ｍｅａｄ ＬＥ，Ｔａｎａｋａ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｈｉｅｒａｒ－ ｉｎｇ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｃｏｎｔｉｒｂｕｔｅ ｔｏ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｃｈｙ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｕｓｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ａｎｄ ｕｍｂｉｌｉ— ｔｉｓｓｕｅ ｉｓｃｈｅｍ ｉａ［Ｊ］．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ，２００７，１００（４）：５８１—９ ａｎｌ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ咖．Ｂｌｏｏｄ，２００４，１０４（９）：２７５２—２７６０． 【３］Ｍｕｒａ ＹＴ，Ｔｅｐｐｅｒ ＯＭ，Ｓｉｌｖｅｒ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｎ＇ｏｗ ｄｅ— Ｈｉｒｓｃｈｉ ＳＤ，Ｇｒａｙ ＳＤ，Ｔｈｉｂｅａｎｈ ＳＬ．Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ：ａｎ ｉｎｔｅｒｅｓｔｉｎｇ ＶＯＣａｌ ｉｒｖｅｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ ｉｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｅ ｇｒｏｗｈｔ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｌｄ ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ１．Ｊ Ｖｏｉｃｅ，２００２，１６：３１０－３１７． ｉｎｄｕｃｅｄ ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｖｏ阴．Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ，２００２，３０：９６７—９７２． Ｇｅｈｌｉｎｇ ＵＭ，Ｅｒｉｎｇｉｎ Ｓ，Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ Ｕ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ［４】Ｐｅｉｃｈｅｖ Ｍ，Ｎａｉｙｅｒ ＡＪ，Ｐｅｒｅｉｒａ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦＲ一２ ａｎｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ＡＣ１３３－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ， ＡＣ１３３ ｂｙ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｈｕｍａｎ ＣＤ３４１ ｃｅｌｌｓ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｓ ａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ２０００，９５：３１０６—３１１２． ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ；叨．Ｂｌｏｏｄ，２０００，９５（３）：９５２—９５８． Ｍｕｋａｉ Ｎ，Ａｋａｌｌ０ｒｉ Ｔ，Ｋｏｍａｋｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｕｂｅ ｆｏｒｍ— 【５］杨晨，杨仁池，韩忠朝．血管内皮祖细胞的研究进展 ．基础医学与ｆ临 床，２００２，２２（５）：３９１—４０６． ｉｎｇ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ ｅａｒｌｙ ａｎｄ ｌａｔｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ【Ｊ］．Ｅｘｐ ［６］Ｋｏｃｈｅｒ ＡＡ，Ｓｃｈｕｓｔｅｒ ＭＤ，Ｂｏｎａｒｏｓ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｈｏｍｉｎｇ ａｎｄ ｎｅｏ． Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ，２００８，３１４（３）：４３０—４４０． ｖａｓｅｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ａｎｇｉｏｂｌａｓｔｓ ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ Ｌ－８／ Ｈｕａ Ｘｉｎ Ｄｕａｎ，Ｌａ Ｍｅｉ Ｃｈｅｎｇ，Ｊｉａｎ Ｗａｎｇ，ｅｔ ａ１．Ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｇｒｏ ＣＸＣ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ［Ｊ】．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ，２００６，４０（４）：４５５－４６４． ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌａ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｈｕ— 【７】王琴，仉红刚．ＥＰＣ生物学特征及其ｌ临床意义叨．中国实验诊断学，２００８， ｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｃｏｒｄ ｂｌｏｏｄ［Ｊ１．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２００６，（３０）： １２（１１）：１４７７—１４７９． １０１８－１０２７． ［８】李秀森，郭子宽，杨靖清，等．骨髓问充质于细胞的生物学特征【ＪＪ．解放 Ｍｅｄｉｎａ ＲＪ，Ｏ’Ｎｅｉｌｌ ＣＬ，Ｓｗｅｅｎｅｙ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｅｎ— 军医学杂志，２０００，２５（５）：３４６—３４８． ｄｏｔｈｅｌｉｌａ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ（ＥＰＣ）ｓｕｂｔｙｐｅｓ ｒｅｖｅａｌｓ ｔｗｏ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｃｅｌｌ ｐｏｐｕ‘ ［９】陈飞兰，张华容，徐承平，等．ＳＤＦ一１／ＣＸＣＲ４轴活化诱导人内皮祖细胞 ｌａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓ明．ＢＭＣ Ｍｅｄ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２０１０，３：１８． 增殖、迁移及管型形成【Ｊ］．基础医学与临床，２００８，２８（５）：４２８—４３１． （收稿日期：２０１２—０２—２０本文编辑：冯婕） ＣＨｌＮＡ ＭＥＤＩＣＡＬ ＨＥＲＡＬＤ中国医药导报３７ 【