山西医科大学学报(J Shanxi Med iv 2 20 至!旦 DOI:10.3969/J.ISSN.1007—661 1.2010.07.014 (Z ・627・ 三种中草药抗结核分枝杆菌作用的实验研究 李宇飞 , 明 亮 , 徐林霞 , 武延隽 室; 通讯作者,E—mail:wyj1234@126.corn) ( 长冶医学院检验系, 长治046000; 长治医学院病原综合实验 摘要: 目的 观察三种中草药在单味和多味药组合下对结核分枝杆菌的抗菌活性。 方法采用琼脂绝对浓度法,在罗氏 培养基中加入蜈蚣1:10;山楂1:5;沙棘1:5浓度的单味和蜈蚣山楂混合液1:20;蜈蚣沙棘混合液1:20;山楂沙棘混合液 1:10;蜈蚣山楂沙棘混合液1:40的多味中草药,将结核分枝杆菌(H37RV株)接种在其表面,在37℃下培养一个月。并接种2 支无药的罗氏培养基作为阴性对照。 结果蜈蚣1:10;山楂1:5;沙棘1:5有抑制结核菌生长作用;蜈蚣山楂混合液1:20; 三种 蜈蚣沙棘混合液1:20;山楂沙棘混合液1:10;蜈蚣山楂沙棘混合液l:40均有抑制结核分枝杆菌生长的作用。 结论中草药在实验条件下均有抗结核分枝菌的作用,联合药效比单味药的作用更强。 关键词: 中草药; 结核分枝杆菌; 药物敏感性试验 中图分类号:R378.911 文献标志码:A 文章编号:1007—6611(2010)07~0627~o4 Experimental study on effect of Chinese herbal medicines against Mycobacterium tuberculosis LI Yu—fei ,MING Liang ,XU Lin—xia ,wU Yan-juan ( Dept of Medical Research,Changzhi Medical College,Changzhi 046000, China;。Pathogeny Laboratory,Changzhi Medical College; Corresponding author,E—mail:wyjl234@126.con) Abstract: 0 ctive To explore the antibacterial effect of three kinds of Chinese herbal medicines in single or combination on Myeo— bacterium tuberculosis. Methods The agar absolute concentration method was used.Mycobacterium tuberculosis H37 RV strains were cultured at 37℃for a month in the Roche culture medium with different concentrations of single herb or multi—herb combination。while H37RV strains were cultured in the Roche culture medium without drugs as negative controls. Results The growth of Mycobacterium tuberculosis was inhibited by the centipede(diluted to 1:10),the Hawthorn Fruit(diluted to 1:5)and the Seabuekthoru Fruit(diluted to 1:5),and it was inhibited also by the mixture of centipede—Hawthorn Fruit(diluted to 1:20),the mixture of centipede—Seabuekthoru Fruit(diluted to 1:2O),the mixture ofHawthorn-Seabuckthorn Fruit(diluted to 1:l0)and the mixture of centipede—Hawthorn—Seabuck— thorn Fruit(diluted to 1:40). Conclusion The growth of Mycobacterium tuberculos ̄could be inhibited by the centipede,the Haw— thorn Fruit and the Seabuekthorn Fruit in a/one or combination,and the effect of multi—herb combination is more better than that of sin— gle herb. Key words: Chinese herb; Mycobacterium tuberculosis; antimicrobial susceptibility test 结核病近几十年来呈上升的趋势,其主要的原 因是结核分枝杆菌形成了对目前所用的抗结核病的 资源中寻找有效的抗结核药物,已引起越来越广泛 的重视。为此近年来我们在这方面做了一些工作, 本文就近年来本实验室所做的中草药抗结核分枝菌 的筛选的实验结果报道如下。 1材料与方法 药物产生了耐药性,使得原有的抗痨方案和抗结核 病的治疗规程失去了应有的作用,使得结核病卷土 重来,直接影响着人们的健康水平和社会的经济发 展,控制结核病的发展是摆在我们面前的重要任务。 为了控制结核病的流行,近数十年来,国际上针 1.1材料菌种:菌株购自中国生物药物鉴定所细 菌室(菌株编号H, RV)。培养基:绝对浓度法采用 豆浸液改良罗氏培养基。中草药:沙棘、山楂、蜈蚣、 均购自长治医学院附属医院中药房。链霉素:购自 对结核菌已开发出近二十种药物,但均存在副作用 大、易产生耐药性等缺点,特别是近年来耐药及多重 耐药菌株(multiple drugs resistant.bacillus tuberculo. 华北制药有限公司,为硫酸链霉素纯品。 1.2方法 sis,MDR—TB)的出现,更是对现有的抗结核药物提 出了严重挑战,同时,从化学合成物中寻找有效药物 的难度日益增大。因此,近年来从我国丰富的中药 基金项目:山西教育厅科研开发项目(20041242) 1.2.1结核分枝杆菌培养基的制备成分:天门冬素 3.6 g,枸橼酸镁0.6 g,KH2PO42.4 g,MgSO4・7H2O ・628・ 西医科大学学报(J Shanxi Med Univ)2010年7月,41(7 0.24 g,马铃薯淀粉30 g,甘油12 ml,豆浸液600 ml,新鲜全鸡蛋1 000 ml,2%孔雀绿20 ml。 制备方法:将上述各成分加入600 ml豆浸液 中,加温溶解,待冷却后,加入全鸡蛋1 000 ml(鸡蛋 壳要充分消毒鸡蛋液要充分打匀),再加人2%孔雀 绿20 ml,待用。 1.2.2琼脂绝对浓度法培养基的制备与药物的浓 度绝对浓度法严格按照中国防痨协会,结核病诊 断细菌学检验规程的方法…操作。 1.2.3 中草药的配制 沙棘,山楂各10 g,加100 ml蒸馏水,煮沸30 min,去药渣,补充水分到100 ml,在蒸沸皿中蒸沸浓缩到10 ml,冰箱保存备用;蜈 蚣的配制,全蜈蚣10 g焙干,反复捻成细粉,加10 ml蒸馏水,制成糊状,冰箱保存备用。 1.2.4含单味中草药结核菌培养基的制备将上 述制备好的结核培养基8 m1放入试管中,加浓缩好 的中药原液2 ml,使其中药的体积浓度为1:5,然后 进行对倍稀释至第5管,即1:80,将制备好的含药 培养基,置血清凝固器中,间隙灭菌3次,冰箱保存, 备用。 1.2.5含两种以上中草药结核培养基的制备按 两种药1:1或三种药1:1:1的比例,配置中药复合 组,然后按单味中药结核分枝杆菌培养基的制备方 法,制备含复方中药的结核分枝杆菌培养基。 1.2.6试验菌液的配制将H ,RV型结核分枝杆 菌接种于豆浸液结核分枝杆菌培养基上,培养20 d, 待生长至培养基斜面的1/3以上时,用硫酸钡比浊 管比浊,用生理盐水配成l0 一10。CFU/ml菌悬液, 待用。 1.2.7接种与培养取0.1 ml(10 一10。CFU/m1) 试验菌液,分别涂布于含蜈蚣、沙棘、山楂药物的结 核分枝杆菌的培养基(该培养基中的药物浓度的体 积比分别为1:5,1:10,1:20,1:40,1:80)的斜面,要 涂满整个斜面,平置于桌面上,待干后,置37℃培养 箱中,培养20—30 d,从第7 d开始每天观测1次。 同时要接种2支空白对照管(不含任何药物的结核 分枝杆菌培养基)。待空白对照管的结核分枝杆菌 的菌落长到培养基斜面的1/3以上时终止培养,记 录结果。 1.2.8硫酸链霉素的稀释法按照中国防痨协会, 结核病诊断细菌学检验规程的方法¨ 操作,稀释成 2 000 000 g/ml的使用液,然后用结核分枝杆菌培 养基,进行1O倍稀释,使培养基中链霉素的最终浓 度为:200 000 Ixg/ml,20 000 g/ml,2 000 Ixg/ml, 200 g/ml,20 g/ml,间歇灭菌后待用。 1.2.9恢复试验将在不同浓度中草药和链霉素 的培养基上的结核分枝杆菌培养物,用无菌生理盐 水从表面洗下,在无菌条件下离心集菌,将收集的离 心沉淀物接种于无药的改良罗氏培养基上,置37℃ 培养箱中,培养2O一30 d,观测结果。 1.2.10恢复试验的结果判断培养物在无药的培 养基上不生长,为该相应药物的相应浓度有杀菌作 用;培养物在无药的培养基上缓慢生长,为该药物的 相应的浓度对结核分枝杆菌有损伤作用;培养物在 有药的培养基上不生长,恢复试验时生长,为该药物 的相应浓度对结核分枝杆菌有抑制作用;培养物在 有药和无药的培养基上都生长,为该药物的相应浓 度对结核分枝杆菌无作用。 2结果 在实验条件下,链霉素在200 g/ml以上浓度 时,在37℃下,培养30 d未见结核分枝杆菌生长; 蜈蚣在1:10的浓度时相当于链霉素200 g/ml的 效果,山楂和沙棘在1:5的浓度时相当于链霉素 200 g/ml的效果;二种中草药联合后,蜈蚣山楂以 及蜈蚣沙棘混合液其1:20的浓度时相当于链霉素 200 Ixg/ml的效果;山楂沙棘混合液1:10的浓度时 相当于链霉素200 g/ml的效果;三种药联合后即 蜈蚣山楂沙棘混合液1:40的浓度时相当于链霉素 200 g/ml的效果,具体结果见表1。 不同药物及其相应的浓度的培养物在恢复试验 的结果见表2。将在含有链霉素200 000 Ixg/ml、20 000ixg/ml、2 000Ixg/ml培养基上的培养物进行恢复 生长试验时,均不生长;在200 g/ml的培养基上的 培养物进行恢复生长试验时,缓慢生长;将含有蜈蚣 1:5,1:10的培养基上的培养物,进行恢复生长试验 时,均不生长;1 7 20的培养基上的培养物,进行恢复 生长试验时,缓慢生长。在含有山楂和沙棘1:5的 培养基上的培养物进行恢复生长试验时,缓慢生长。 三种药组合后,将在1:40的培养基上的培养物进行 恢复生长试验时,缓慢生长。药物组合明显提高了 药物的抑菌效果。 3讨论 我国传统中医药自2 000多年前即有关于抗结 核治疗的记载。近年来,国内研究者除采用传统方 法,即中药对结核病的治疗作用进行临床研究外,还 进行了中药对结核菌的体外抑菌作用 j,中药对结 山西医科大学学报(』 表1 Tab 1 1 2 Q! 生2旦 ( ・629・ 三种中草药单昧、复合昧与链霉素抗结核分枝杆菌的结果比较 Effect of three kinds of Chinese herbs in single or combination and streptomycin sulfate against Mycobacterium f“・ berculosis “+”为生长;“一”为不生长;p.g/ml为链霉素的浓度;体积比表示中药的浓度 表2 Tab 2 三种中草药单昧、复合昧和链霉素培养结核菌的恢复性试验的结果分析 Recovery experiment of Mycobacterium tuberculosis cultured with three kinds of Chinese herbs in single or combi・ nation and streptomycin sulfate “+”为生长;“一”为不生长;“±”为缓慢生长;p.g/ml为链霉素的浓度;体积比表示中药的浓度 核菌感染免疫力影响等方面的研究,有的甚至已深 入到分子和基因水平 。本文采用绝对浓度法对 较为明确,如大蒜的抗结核分枝杆菌的化学成分是 大蒜素,是鲜大蒜所含的一种大蒜氨酸 。而蜈蚣 三种中草药在实验条件下对结核分枝杆菌活性作用 进行了实验室研究。 就上述研究的结果分析,这三种中药在体外均 有抗结核分枝菌的作用,而且在不同浓度下显现出 了明显的抑制结核分枝菌生长的作用,而三种中药 的不同组合也明显表现出比单味药更具有抗结核分 的化学成分相当复杂,真正的抗菌活性物质可能与 下列成分有关,如全虫含有类蜂毒样及类组胺样物 质、溶血蛋白、脂肪、蚁酸;氨基酸有组氨酸,精氨酸, 鸟氨酸,赖氨酸,甘氨酸,丙氨酸,缬氨酸,酪氨酸,亮 氨酸,苯丙氨酸,丝氨酸,牛磺酸,谷氨酰胺等;外角 皮含几丁质,脱乙酰几西质,葡萄糖胺,谷氨酸,酸性 枝菌生长的作用,如蜈蚣山楂沙棘的混合液在1:40 倍稀释后其抗菌活性就明显提高,相当于链霉素 磷酸酶;色素有橙色素(含B-胡萝卜素类,虾黄质 酯)和黄色素(含蝶啶);神经链中含类乙酰胆碱样 200 ml的杀菌效果。这一结果为临床在抗结核 病的药物选择上提供了有力的依据,为采用中西医 药物治疗结核病,提供了有力的证明。 物质等,但实验证明这些物质单独任何一种对结核 分枝杆菌均无抗菌活性 ,所以说蜈蚣抗结核菌的 作用,可能是多种成分的综合作用,利用单纯提取的 任何一种成分进行结核病的治疗都是无用的,这也 说明蜈蚣抗结核分枝杆菌的机制更加复杂 j。山 楂和沙棘的化学成分也十分复杂,山楂的主要活性 中草药种类较多,各种药物的成分复杂,其抗菌 的机制也不尽相同,大多中草药的抗菌机制还没研 究清楚,但经过多年的研究,部分中草药的抗菌机制 ・630・ 亘匡 堂堂 (』 x1 Med Univ)2010年7月,4l(7 DOI:10.3969/I.ISSN.1007—6611.2010.07.015 妊娠晚期妇女心电图短P.R间期的I临床意义 雷 蓉, 徐 丹, 吴 蕾 (西安医学院附属医院功能科,西安710077) 摘要: 目的 探讨妊娠晚期妇女心电图短P-R间期的临床意义。 方法对580例妊娠28—42周的妇女进行心电图检查 并测量P-R间期,对其中出现短P-R间期的孕妇进行分娩时或分娩后3个月的随访。 结果80例(13.79%)妊娠晚期孕妇 的心电图出现短P—R间期,经分娩时或分娩后3个月的随访,心电图均可自行恢复正常,无1例出现阵发性室上性心动过速。 结论妊娠晚期妇女心电图出现短P—R问期现象属良性电生理改变,无明显病理意义。 关键词:妊娠晚期;短P—R问期;心电图 中图分类号:R540.41 文献标志码:A 文章编号: 1007—6611(2010)07—0630—02 妇女由妊娠到分娩期间机体处于生理、内分泌 发生短P—R问期现象的临床意义。 变化的特殊时期,随着孕周的增加,心脏负荷的增 l资料与方法 加,使正常妊娠期的血液动力学发生明显的改变。 1.1一般资料从我院2009—01~2009—12门诊 我们在临床工作中发现,晚期妊娠妇女在常规心电 作产前检查的正常待产晚期妊娠妇女中,选择580 图检查中短P—R间期的发生率高于正常人群,但临 例孕妇,年龄20—39岁,平均(28.6 4-5.6)岁,孕 床意义还不明确。现对580例晚期妊娠妇女常规 28—42周。按照高危妊娠的年龄标准¨。,将其分为 l2导联心电图P・R间期进行测量分析,旨在了解其 20—34岁组(n=386)和≥35岁组(n=194)。全部 成分是黄酮类化合物,包括金丝桃苷,牡荆,鼠李糖, 景,为临床治疗结核病开辟一条新的途径。 芦丁,和低聚原花青素,而沙棘的主要活性成分是异 参考文献: 鼠李素、异鼠李素一3-B—D一葡萄糖苷、异鼠李素一 [1] 中国防痨协会.结核病诊断细菌学检验规程[J].中国防痨杂 3-B一芸香糖苷、槲角素及山奈酚的低糖苷(oligo. 志,1996,18(2):80—85. [2] 刘金伟,王金河,仲斌,等.大蒜素结核杆菌体外抑菌效果观察 sides) ’ 。而这些抗菌物质对结核分枝杆菌的抗 [J].人民军医,2001,44(4):236. 菌机制目前还不甚明白,通过本文的实验结果我们 [3] 吴虢东,王玲.抗结核中药的研究进展[J].医学综述,2007,13 认为这三种中草药在抗结核分枝杆菌方面有协同和 (6):475—476. 加强作用,但蜈蚣山楂和沙棘在抗结核分枝杆菌方 [4] 张峰,高鹏,彭俊华.黄芪多糖及黄芪甲苷对巨噬细胞吞噬结 面的相互加强和协同作用的有关机制有待进一步的 核杆菌作用的研究[J].西北国防医学杂志,2005,26(6): 434——435. 研究。 [5] 赵中夫,刘明社,武延隽.巴豆油抗多重耐药结核分枝杆菌作 根据本文的结果,就山楂消食健胃,行气散瘀的 用实验研究[J].长治医学院学报,2004,18(4):241—242. 功效,正可用于结核病的辅佐治疗。所谓健脾者,因 [6] 李洪,冯端浩,曹晶,等.中药苦参碱对结核杆菌的抑制作用 其脾有食积,用此酸成之味,以为消磨,俾食行而痰 [J].解放军药学学报,2002,18(4):283—284. 消,气破而泄化,谓之为健,止属消导之健矣 。沙 [7] 国家药典委员会.中国药典,I部[s].北京:化学工业出版社, 2005,198:200. 棘止咳祛痰,消食化滞,活血散瘀,主用于咳嗽痰多、 [8]谢永平,陈广幸,黎国梅,等.结核分枝杆菌对阿米卡星的耐药 消化不良之病症,性甘酸;医学衷中参西录明确指 性研究[J].检验医学与临床,2009,6(4):253—255. 出:山楂,若以甘药佐之,化瘀血而不伤新血,开郁气 [9] 宗玉英,欧阳嘉慧,陈超扬,等.常用中藏药体外抗结核分枝杆 而不伤正气 ,所以沙棘又是山楂的很好辅佐之 菌的筛选实验[J].中国中药杂志,2008,2(4):2775—2980. 药。所以在治疗结核病时,用抗痨西药,并加上以蜈 作者简介: 李宇飞,女,1977—04生,本科,实验师. 蚣为主,以山楂和沙棘为辅的中药方剂治疗结核病 [收稿日期:2010—03—22] 的方略可能在治疗结核病方面有着重要的发展前