siRNA 干扰实验步骤(贴壁细胞)

来源：小侦探旅游网

1．转染前一天，4-5×10* 4细胞接种在 24 孔板上， 0.5mL 含 FBS 和抗生素的 DMEM（或 Opti-MEM，其他培养基）细胞培养基。

2．选择用于初期接种的细胞数量，应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。

3. 在50μl的DMEM（或Opti-MEM，或其他无血清培养基）无血清培养基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA)，柔和混匀；

4. 混匀 lipofectamin 试剂，用 50μl 无血清的 DMEM 或Opti-MEM，或其他无血清培养基）稀释 1μl lipofectamin 试剂（DNA转染时，则加入2μllipofectamin试剂），轻轻混匀，室温放置5分钟；

5. 将稀释好的 siRNA 和 Lipofectamin 试剂混合；轻柔混匀，室温放置 20 分钟 , 以便形成 siRNA/lipofectamin （或DNA/lipofectamin）复合物。

6. 将 100μl siRNA/lipofectamin（或 DNA/lipofectamin）复合物加到含有细胞和培养基的培养板的孔中，来回轻柔摇晃细胞培养板板。

7．细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后，进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感，孵育4-6小时后，除去复合物，更换培养基。

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