连续施用不同氮量对半干旱地区马铃薯根际真菌群落结构的影响

干旱地区农业研究

ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈｉｎｔｈｅＡｒｉｄＡｒｅａｓ

　文章编号:１０００￣７６０１(２０２０)０１￣００５０￣０９ｄｏｉ:１０.７６０６/ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣７６０１.２０２０.０１.０７

Ｖｏｌ.３８Ｎｏ.１Ｊａｎ.２０２０

连续施用不同氮量对半干旱地区马铃薯

根际真菌群落结构的影响

邓德雷１ꎬ２ꎬ罗超越１ꎬ２ꎬ邱慧珍１ꎬ２ꎬ张　健１ꎬ２ꎬ张春红１ꎬ２ꎬ付　笑１ꎬ２ꎬ沈其荣３

２.甘肃省畜禽废弃物资源化利用工程研究中心ꎬ甘肃兰州７３００７０ꎻ３.南京农业大学资源与环境学院ꎬ江苏南京２１００９５)

(１.甘肃农业大学资源与环境学院/甘肃省干旱生境作物学重点实验室ꎬ甘肃兰州７３００７０ꎻ

摘　要:针对马铃薯生产中因氮肥过量施用导致的土壤微生物群落结构失衡和多样性下降等问题ꎬ在始于２０１３年的不同氮肥用量(Ｎ０:不施氮ꎬ对照ꎻＮ７５:施氮量７５ｋｇ􀅰ｈｍ－２ꎻＮ１５０:施氮量１５０ｋｇ􀅰ｈｍ－２ꎻＮ２２５:施氮量２２５ｋｇ􀅰ｈｍ－２ꎻＮ３００:施氮量３００ｋｇ􀅰ｈｍ－２ꎻＮ３７５:施氮量３７５ｋｇ􀅰ｈｍ－２)田间定位试验中ꎬ于２０１７年马铃薯成熟期采集根际土壤ꎬ应用ＩｌｌｕｍｉｎａＰＥ２５０测序等分子生物学手段ꎬ研究连续５ａ施用不同氮量对半干旱地区马铃薯根际真菌群落结构的影响ꎮ结果表明:不同施氮量对马铃薯根际真菌群落物种组成造成了显著影响ꎬ子囊菌门、Ｍｕｃｏｒｏｍｙｃｏｔａ和担子菌门是３个优势门类真菌(相对丰度>１.０％)ꎬ以子囊菌门的相对丰度最大ꎬ占总序列的７５.４８％~８３.９５％ꎬ其优势属是Ｐｌｅｃｔｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ(２９.９２％)和镰刀菌属(１３.５４％)ꎻ马铃薯干腐病和枯萎病的病原菌———镰刀菌属的相对丰度随施氮量增加呈增大的趋势ꎮ马铃薯根际真菌Ａｌｐｈａ多样性随施氮量的增加而降低ꎮ连续５ａ超量施氮导致了０~２０ｃｍ表

－层土壤中ＮＯ－３－Ｎ含量显著增加ꎬＮ３７５处理的ＮＯ３－Ｎ含量是Ｎ０处理的３.７６倍ꎮ连续５ａ超量施氮也显著降低了根

际ｐＨ值和速效磷含量ꎬＮ３７５处理比Ｎ０处理ｐＨ值和速效磷含量分别降低了０.１７个单位和３２.１０％ꎮＲＤＡ及相关性分析结果表明ꎬ土壤硝态氮含量是影响马铃薯根际真菌群落结构变化的主要因素(Ｆ＝１.５７１ꎬＰ＝０.０４３∗)ꎮ连续大２０１３—２０１４年的Ｎ２２５减低为Ｎ７５ꎬ其它施氮处理较Ｎ７５分别减产了３.４６％、２２.８１％、２６.０５％和２５.３２％ꎮ长期过量施用氮肥使马铃薯根际硝态氮大量累积ꎬ导致ｐＨ值降低ꎬ进而使根际真菌多样性降低ꎻ同时过量氮肥施用会使根际中土壤真菌病原菌相对丰度增加ꎬ不利于土壤的健康和马铃薯的高产ꎮ

关键词:氮肥过量ꎻ马铃薯ꎻ根际真菌群落结构ꎻ群落多样性ꎻ土传病害病原菌中图分类号:Ｓ１５４.３ꎻＳ１４３.１　　文献标志码:Ａ

量施用氮肥显著降低了马铃薯块茎产量ꎬ连续施氮５ａ后ꎬ由于土壤剖面中ＮＯ－３－Ｎ的积累ꎬ最高产量施肥量由

Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｎｉｔｒｏｇｅｎｒａｔｅｓｏｎｆｕｎｇａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅｉｎｐｏｔａｔｏｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｉｎｓｅｍｉ￣ａｒｉｄａｒｅａｏｆＧａｎｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ

ＤＥＮＧＤｅｌｅｉ１ꎬ２ꎬＬＵＯＣｈａｏｙｕｅ１ꎬ２ꎬＱＩＵＨｕｉｚｈｅｎ１ꎬ２ꎬＺＨＡＮＧＪｉａｎ１ꎬ２ꎬ

(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ/ＧａｎｓｕＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙＬａｂｏｆＡｒｉｄｌａｎｄＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅꎬ

２.ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＬｉｖｅｓｔｏｃｋａｎｄＰｏｕｌｔｒｙＷａｓｔｅＲｅｓｏｕｒｃｅＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｉｎＧａｎｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅꎬＬａｎｚｈｏｕꎬＧａｎｓｕ７３００７０ꎬＣｈｉｎａꎻ

３.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＮａｎｊｉｎｇꎬＪｉａｎｇｓｕ２１００９５ꎬＣｈｉｎａ)

ＧａｎｓｕＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＬａｎｚｈｏｕꎬＧａｎｓｕ７３００７０ꎬＣｈｉｎａꎻ

ＺＨＡＮＧＣｈｕｎｈｏｎｇ１ꎬ２ꎬＦＵＸｉａｏ１ꎬ２ꎬＳＨＥＮＱｉｒｏｎｇ３

ｂｙｅｘｃｅｓｓｉｖｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎ(Ｎ)ｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒｉｎｐｏｔａｔｏｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎꎬａｐｏｓｉｔｉｏｎｅｄｆｉｅｌｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔＮｈｍ－２ꎬＮ３００:３００ｋｇ􀅰ｈｍ－２ꎬａｎｄＮ３７５:３７５ｋｇ􀅰ｈｍ－２)ｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｉｎ２０１３.Ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｓｏｉｌｗａｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｄｕｒｉｎｇｐｏｔａｔｏｒｉｐｅｎｉｎｇｐｅｒｉｏｄｆｏｒ７ｙｅａｒｓ.ＭｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓꎬＩｌｌｕｍｉｎａＰＥ２５０ꎬｗａｓｕｓｅｄｔｏ

收稿日期:２０１９￣０３￣１３　　　　　修回日期:２０１９￣０５￣３０

Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｉｎｖｉｅｗｏｆｔｈｅｉｍｂａｌａｎｃｅｏｆｓｏｉｌｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｔｈｅｄｅｃｌｉｎｅｏｆｄｉｖｅｒｓｉｔｙｃａｕｓｅｄ

ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｒａｔｅｓ(Ｎ０:ｎｏＮａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎꎬｃｏｎｔｒｏｌꎬＮ７５:７５ｋｇ􀅰ｈｍ－２ꎬＮ１５０:１５０ｋｇ􀅰ｈｍ－２ꎬＮ２２５:２２５ｋｇ􀅰

基金项目:国家重点基础研究发展计划(９７３计划)(２０１５ＣＢ１５０５０１)ꎻ国家重点研发计划“农业面源和重金属污染农田综合防治与修复技术研发”专项“农业废弃物资源化利用机制”项目(２０１７ＹＦＤ０８００２００)ꎻ国家自然科学基金(３１７６０６１４)

作者简介:邓德雷(１９９３－)ꎬ男ꎬ河南商丘人ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向为氮素循环ꎮＥ￣ｍａｉｌ:７２７１８３７５３＠ｑｑ.ｃｏｍ通信作者:邱慧珍ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ主要从事植物营养与有机肥料研究ꎮＥ￣ｍａｉｌ:ｈｚｑｉｕ＠ｇｓａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ

第１期　　　　邓德雷等:连续施用不同氮量对半干旱地区马铃薯根际真菌群落结构的影响

５１

ｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔＮｌｅｖｅｌｓｏｎｔｈｅｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｆｕｎｇｉｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｐｏｔａｔｏｉｎｓｅｍｉ￣ａｒｉｄａｒｅａｓｆｏｒ５ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅｙｅａｒｓ.ＴｈｅｓｐｅｃｉｅｓｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｏｔａｔｏｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｆｕｎｇｉｃｏｍｍｕｎｉｔｙｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔＮａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｒａｔｅｓ.ＡｓｃｏｍｙｃｏｔａꎬＭｕｃｏｒｏｍｙｃｏｔａꎬａｎｄＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａｗｅｒｅｔｈｅｔｈｒｅｅｄｏｍｉｎａｎｔｆｕｎｇｉ(ｒｅｌａ￣ｔｉｖｅａｂｕｎｄａｎｃｅ>１.０％).ＴｈｅｒｅｌａｔｉｖｅａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆＡｓｃｏｍｙｃｏｔａｗａｓｔｈｅｌａｒｇｅｓｔꎬａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｆｏｒ７５.４８％~８３.９５％ａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆＦｕｓａｒｉｕｍꎬｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｓｏｆｐｏｔａｔｏｄｒｙｒｏｔꎬａｎｄＦｕｓａｒｉｕｍｗｉｌｔꎬｉｎｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｉｎＮａｐｐｌｉ￣ｔｒｅａｔｍｅｎｔｗａｓ３.７６ｔｉｍｅｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎＮ０ｔｒｅａｔｍｅｎｔ.Ｏｖｅｒ￣ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＮｆｏｒ５ｙｅａｒｓａｌｓｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅ￣ｏｆｔｈｅｔｏｔａｌｓｅｑｕｅｎｃｅ.ＴｈｅｄｏｍｉｎａｎｔｓｐｅｃｉｅｓｗｅｒｅＰｌｅｃｔｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ(２９.９２％)ａｎｄＦｕｓａｒｉｕｍ(１３.５４％).Ｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｃａｔｉｏｎ.ＡｌｐｈａｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｐｏｔａｔｏｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｆｕｎｇｉｄｅｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｉｎＮａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ.Ｏｖｅｒ￣ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆ

－

－－Ｎｆｏｒ５ｙｅａｒｓｒｅｓｕｌｔｅｄｉｎａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｃｒｅａｓｅｏｆＮＯ－３Ｎｃｏｎｔｅｎｔｉｎ０~２０ｃｍｔｏｐｓｏｉｌ.ＴｈｅＮＯ３ＮｃｏｎｔｅｎｔｉｎＮ３７５３２.１０％ꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＮ０ｔｒｅａｔｍｅｎｔ.ＲＤＡａｎｄｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｓｏｉｌｎｉｔｒａｔｅＮｃｏｎｔｅｎｔ

ｗａｓｔｈｅｍａｉｎｆａｃｔｏｒａｆｆｅｃｔｉｎｇｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｉｎｆｕｎｇａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅｉｎｐｏｔａｔｏｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ(Ｆ＝１.５７１ꎬＰ＝０.０４３∗).Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌａｒｇｅ￣ｓｃａｌｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＮｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄｐｏｔａｔｏｔｕｂｅｒｙｉｅｌｄ:ａｆｔｅｒ５ｙｅａｒｓｏｆ

－ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓＮａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎꎬｄｕｅｔｏｔｈｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆＮＯ－３Ｎｉｎｓｏｉｌｐｒｏｆｉｌｅꎬｔｈｅｍａｘｉｍｕｍｙｉｅｌｄｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｄｅ￣ｃｒｅａｓｅｄｆｒｏｍＮ２２５ｉｎ２０１３－２０１４ｔｏＮ７５ꎬａｎｄｏｔｈｅｒＮｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅｙｉｅｌｄｂｙ３.４６％ꎬ２２.８１％ꎬ２６.０５％ａｎｄ２５.３２％ꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＮ７５.Ｌｏｎｇ￣ｔｅｒｍｅｘｃｅｓｓｉｖｅＮａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｅｄｉｎａｌａｒｇｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｎｉｔｒａｔｅＮｉｎｐｏｔａｔｏｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅꎬｗｈｉｃｈｌｅｄｔｏａｄｅｃｒｅａｓｅｉｎｐＨꎬｔｈｕｓｒｅｄｕｃｉｎｇｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｆｕｎｇｉ.ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅꎬｗｈｉｃｈｗａｓｎｏｔｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏｓｏｉｌｈｅａｌｔｈａｎｄｉｍｐｒｏｖｉｎｇｐｏｔａｔｏｙｉｅｌｄ.ｓｉｔｙꎻｓｏｉｌ￣ｂｏｒｎｅｄｉｓｅａｓｅｐａｔｈｏｇｅｎｓ

Ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅꎬｅｘｃｅｓｓｉｖｅｎｉｔｒｏｇｅｎａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｓｏｉｌｆｕｎｇａｌｐａｔｈｏｇｅｎｓｉｎｔｈｅ

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ｅｘｃｅｓｓｉｖｅｎｉｔｒｏｇｅｎｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒꎻｐｏｔａｔｏꎻｆｕｎｇａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅｉｎｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅꎻｃｏｍｍｕｎｉｔｙｄｉｖｅｒ￣ｄｕｃｅｄｔｈｅｐＨｖａｌｕｅａｎｄａｖａｉｌａｂｌｅｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｃｏｎｔｅｎｔｉｎｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ.Ｎ３７５ｔｒｅａｔｍｅｎｔｄｅｃｒｅａｓｅｄ０.１７ｕｎｉｔｓａｎｄ

　　根际是土壤和根之间的界面ꎬ是土壤的生物活性区域[１]ꎮ农业系统中根际微生物群落的多样性受植物类型、土壤类型、农田管理和其它环境因素的影响[２]ꎮ农田管理如长期连作和施肥等栽培措施ꎬ特别是过量施氮肥已成为甘肃省马铃薯主产区定西市马铃薯产业可持续发展的主要因素[３]ꎮ在马铃薯种植过程中为了片面追求高产ꎬ过量施氮和长期连作现象十分普遍[４－５]ꎮ过量施氮和长期连作都会导致土壤微生物区系从“细菌型”向“真菌型”转化ꎬ最终引发土壤微生物群落结构与组成失衡ꎬ导致土壤微生物区系失衡[３ꎬ６]ꎮ定西市集约化种植马铃薯过程中的施氮用量平均为２３０ｋｇ􀅰ｈｍ－２ꎬ而马铃薯生产中每形成１ｔ块茎产量ꎬ仅需纯增加ꎬ长期连续施用氮肥ꎬ将会导致农田土壤中的微生物群落结构遭受破坏[７－８]ꎬ群落组成发生改变[９]ꎮ

对于马铃薯来讲ꎬ过量施氮和连作均能够引起氮６.５±１.７７ｋｇ[３]ꎮ土壤中氮残留量或损失量显著

的理论和实践意义ꎮ许多研究证明ꎬ土壤类型是影响细菌的最主要因素[１０－１１]ꎬ而农田管理是影响真菌的最主要因素[１２－１３]ꎮ

目前ꎬ有关不同施氮量对微生物群落的影响多

侧重于细菌ꎬ而对真菌群落结构的影响研究较少ꎮ过量施氮和长期连作都是不健康的农田管理ꎬ这将会导致植株生长发育受阻ꎬ块茎产量和品质下降ꎬ特别是土传病害猖獗等一系列的问题ꎬ严重影响企业和农民的种植效益ꎮ本课题组前期对马铃薯连作与土壤的真菌群落结构之间的相互作用做了大量研究ꎬ孟品品等[５]研究了马铃薯连作对根际土壤真菌种群结构的影响及其生物效应ꎬ结果表明ꎬ随着连作年限的增加ꎬ马铃薯根际土壤土传病害病原菌尖孢镰刀菌和茄病镰刀菌的数量明显增加ꎮ牛秀群等[１４]研究了马铃薯连作根际土壤镰刀菌分布与马铃薯连作之间的关系ꎬ结果显示连作１~３ａ的优势种均为茄病镰孢ꎮ李瑞琴等[１５]通过荧光定量ＰＣＲ快速检测及在根际的动态变化的研究ꎬ结果显示连作１~５ａ的马铃薯根际土壤茄病镰孢菌和接骨木镰孢菌随连作年限的递增呈现上升趋势ꎬ其中连作５ａ的累积量达到最大ꎮ

作物增产的农业措施之一是施用氮肥ꎬ而目前在我国粮食生产中存在氮肥用量不足和过量的问

土壤微生物群落结构的显著变化ꎬ使得土壤从抑病型向导病型的方向转变ꎬ土传病害滋生ꎬ作物长势变差并且大幅度降低农作物的经济产量ꎬ而这其中大部分是真菌型的土传病害[３ꎬ１０]ꎮ因此ꎬ了解土壤真菌群落结构对于农业可持续发展具有十分重要

５２

　　　　　　　　　　　　　　干旱地区农业研究　　　　　　　　　　　　　　　　第３８卷

菌蒸馏水冲洗(三角瓶内加４０~５０ｍｌ蒸馏水ꎬ在摇床上以２００ｒ􀅰ｍｉｎ－１的转速震荡５~１０ｍｉｎ)ꎬ过滤后用真空泵抽取多余的水分ꎬ随后在真空冷冻干燥机上冻干ꎬ并装于５ｍｌ的无菌管中ꎬ放置于－８０℃冰箱ꎬ用于土壤微生物ＤＮＡ的提取ꎮ１.４　测定指标及方法

土壤理化性质的测定参照«土壤农化分析»[１６]

题ꎬ这两方面都将会严重阻碍农业的可持续发展进程[３]ꎮ因此ꎬ了解氮肥施用量对土壤微生物群落结构的影响ꎬ对于农业可持续发展具有十分重要的理论和实践意义ꎮ针对当地因长期过量施氮而导致的诸如立枯病、干腐病和黄萎病等真菌类土传病害严重的现象ꎬ将真菌群落结构作为我们研究的重点ꎮ因此ꎬ本研究利用ＩｌｌｕｍｉｎａＰＥ２５０基因测序ꎬ比较连续不同施氮条件下的马铃薯根际真菌群落结构差异ꎬ旨在探明和揭示过量氮素施用对半干旱地区马铃薯根际真菌群落结构的影响ꎬ为该地区马铃的方法进行测定ꎮ速效磷的测定采用钼锑抗比色法ꎻ有机质的测定采用重铬酸钾氧化外加热法测－薯生产的可持续发展提供科学依据ꎮ

１　１.１　材料与方法

田间定位试验始于试验区概况

２０１３年４月ꎬ试验地位于甘肃省定西市安定区香泉镇Ｎꎬ１０４°３０′３４″Ｅꎬꎬ区域年均温度６.９℃海拔ꎬ≥１０℃２０５３~当地地理位置３５°２７′７″的积温为２５５６ｍꎮ２试验地所在０７５.１℃ꎬ年降雨量４００ｍｍ左右ꎬ多集中在７—９月ꎬ无霜期１４０壤类型为黄绵土ｄꎬ蒸发量１４００ｍｍꎮ

以上ꎬ属中温带半干旱气候ꎬ土１.２　本研究共设置试验设计

６个不同的氮用量:Ｎ０(对照ꎬ不

施氮肥ｋｇ􀅰ｈｍ)、Ｎ７５(施氮量为７５ｋｇ􀅰ｈｍ－２－２)、Ｎ１５０(１５０

ｈｍ－２)、Ｎ３７５()、Ｎ２２５(２２５３７５ｋｇ􀅰ｈｍｋｇ􀅰ｈｍ－２－２)、Ｎ３００(３００ｋｇ􀅰规施氮量２２５ｋｇ􀅰ｈｍ－２为依据)ꎮꎬ本研究是以当地常不施氮肥为对照处９理ｍꎬ每一处理×７.２ｍ＝４６４.８次重复ｍꎬ随机区组排列ꎬ小区面积为

２肥ꎬ施磷量为Ｐꎮ每个处理配施等量的磷钾２９２.５ｋｇ􀅰ｈｍ－２ꎮ２ＯＮ５肥为尿素２２５ｋｇ􀅰ｈｍ－２Ｐ(Ｎꎬ４６％)ꎬꎬ施钾量配施磷肥为Ｋ２Ｏ２４％)ꎮ为过磷酸钙(２Ｏ５ꎬ１６％)ꎬ钾肥为硫酸钾镁(Ｋ２Ｏꎬ

垄宽６０肥料按小区称重撒施后旋耕ｃｍꎬ垄距６０ｃｍꎬ垄高２０ｃｍꎬꎬ旋耕后起垄起垄后覆膜ꎮꎮ人工点播的方法播种ｃｍꎬꎬ宽垄双行ꎬ深１０ｃｍꎬ株距２５

－２

“青薯九号种植密度为”原种４ꎮ４５０于株２０１７􀅰６６７ｍ年５月ꎮ１２马铃薯品种是２０日收获ꎮ

日播种ꎬ１０月１.３　根际样品在马铃薯成熟期进行采集土壤样品采集与处理

ꎬ采集时间

为２０１７年１０月１８日ꎮ根际土的采集方法:将马铃薯的根完整挖出(将附着在根表面不能被抖下来的土视为根际土ꎬ先用抖土法抖落掉多余的土后装于灭菌后的自封袋内ꎬ并于当天带回实验室用灭)ꎬ

定ꎻ土壤硝态氮和铵态氮的测定:以０.０１ｍｏｌ􀅰Ｌ１的ＣａＣｌ定ꎻ土壤２溶液浸提ꎬ震荡１ｈꎬ后用连续流动分析仪测ｐＨ值测定采用电极法测定ꎮ１.５　ＤＮＡ土壤ＤＮＡ提取提取及:采用ＰＣＲＥ.扩增

(ＯＭＥＧＡ)Ｚ.Ｎ.Ａ.ＳｏｉｌＤＮＡＫｉｔ

品进行３次平行试剂盒进行土壤总ＰＣＲ扩增ꎮ在测序前参照电泳初ＤＮＡ的提取ꎬ每个样步定量结果ꎬ将ＰＣＲ产物用ＱｕａｎｔｉＦｌｕｏｒＴＭ荧光定量系统(Ｐｒｏｍｅｇａ公司)进行检测定量－ＳＴꎬ蓝色之后按照每个样本的测序量要求ꎬ进行相应比例的混合ＤＮＡꎮ用Ｑｕｂｉｔ２.０ＰＣＲ精确定量ＴＡＧＡＧＧＡＡＧＴＡＡ所用引物ꎬ序以确定ＤＮＡ检列为ＰＣＲ测试剂盒对基因组进行ＩＴＳ１反应应加入的－Ｆ:５′－ＣＴＴＧＧＴＣＡＴＴ￣ＤＮＡ量ꎮＴＣＡＴＣＧＡＴＧＣ－３′和ＩＴＳ２:５′－ＧＣＴＧＣＧＴＴＣＴ￣台的通用引物－ＦａｓｔＰｆｕＰｒｉｍｅｒ(Ｂｕｆｆｅｒꎮ３′ꎬＰＣＲ所用引物为Ｍｉｓｅｑ测序平４热启动μｌꎬ２.５ＰＣＲｍＭ反应体系如下ｄＮＴＰｓ２μｌꎬＦｏｒｗａｒｄ

:５×Ｔｅｍｐｌａｔｅ５件如下:９５℃ＤＮＡμＭ)５１００.ｍｉｎｎｇꎬ８μｌꎬ预变性加去离子水至ＦａｓｔＰｆｕＰｏｌｙｍｅｒａｓｅꎬ９５℃３０２０ｓꎬ５５℃μｌꎮ０.反应条４μｌꎬ３０ｓꎬ

ＰＣＲ７２℃结束后１０ｍｉｎꎬ进行３０个循环ꎬ最后７２°延伸７ｍｉｎꎮ个样本２％琼脂糖凝胶电泳检测３个重复全部样本按照正式实验条件进行ꎬ将同一样本的ꎬ使用ＡｘｙＰｒｅｐＤＮＡＰＣＲ产物混合后用ꎬ每收试剂盒(ＡＸＹＧＥＮ公司)切胶回收ＰＣＲ产物凝胶回ＨＣｌ洗脱ꎻ２％琼脂糖凝胶电泳检测ꎮ

ꎬＴｒｉｓ￣ＤＮＡＰＣＲＰｏｌｙｍｅｒａｓｅꎮ采用ＴｒａｎｓＧｅｎＡＰ２２１－０２:ＴｒａｎｓＳｔａｒｔＦａｓｔｐｆｕ１.６　数据处理

ＰＣＲ仪:ＡＢＩＧｅｎｅＡｍｐ􀅹９７００型

土壤的基本理化性质数据处理及图表绘制采

用Ｅｘｃｅｌ２０１３和Ｏｒｉｇｉｎ２０１７软件ꎬＳＰＳＳ２３.０软件进行数据的统计分析ꎮ同时运用Ｒ３.３.１等相关软件计算土壤真菌群落Ａｌｐｈａ多样性指数如Ｃｈａｏ１指数、Ｓｈａｎｎｏｎ指数、Ｓｉｍｐｓｏｎ指数等ꎬ同时进行根际真菌群落的Ｂｅｔａ多样性分析ꎮ

第１期　　　　邓德雷等:连续施用不同氮量对半干旱地区马铃薯根际真菌群落结构的影响

５３

２　结果与分析

构的影响

样品中真菌群落的相对丰度指数(Ｃｈａｏ１)分析发现ꎬＮ１５０处理Ｃｈａｏ１指数为７５８.２５ꎬ显著高于其它施氮处理ꎬ过量施氮降低真菌丰富度ꎬＮ１５０处理相１９.８３％、１６.７９％、１.３４％、１６.２５％ꎮ同时通过对根际样品中真菌群落的多样性(Ｓｈａｎｎｏｎ和Ｓｉｍｐｓｏｎ)进行分析ꎬ分析结果表明ꎬ不同施氮量对土壤真菌群落的多样性影响无显著差异ꎮ

为进一步分析不同施氮量对根际真菌群落结构的影响ꎬ首先从门水平对真菌群落进行分析ꎮ根际样品共检测出３个优势门类真菌(相对丰度>１.０％)ꎬ主要由子囊菌门(Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ)、Ｍｕｃｏｒｏｍｙｃｏｔａ和担子菌门(Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ)组成ꎬ如图１所示ꎮ

比Ｎ０、Ｎ７５、Ｎ２２５、Ｎ３００和Ｎ３７５高３６.５６％、

２.１　连续施用不同氮量对马铃薯根际真菌群落结　　ＩｌｌｕｍｉｎａＰＥ２５０测序结果优化后共获得２９７６２３条有效序列ꎬ通过ＯＴＵ(Ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌｔａｘｏｎｏｍｉｃｕｎｉｔｓ)聚类分析得到３４５９个ＯＴＵꎻ同时检测出根际真菌主要分布在７个门ꎬ２２个纲ꎬ６４个目ꎬ１５８个科ꎬ３３３个属ꎬ６７６个种中ꎮ在９７％相似水平条件下得到土壤真菌多样性指数如表１所示ꎮ由表１可知各处理样本文库覆盖率均大于９９.７％ꎬ说明本试验样品取样合理ꎬ置信度高、结果可靠ꎬ测定结果能够真实地反映各处理根际样本的真菌群落组成ꎮ通过对根际

表１　连续施用不同氮量对根际真菌群落相对丰度与多样性的影响

Ｔａｂｌｅ１　ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔＮｌｅｖｅｌｓｏｎｒｅｌａｔｉｖｅａｂｕｎｄａｎｃｅａｎｄｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｆｕｎｇｉｃｏｍｍｕｎｉｔｙ

处理ＴｒｅａｔｍｅｎｔＮ１５０Ｎ２２５Ｎ３００Ｎ３７５Ｎ７５Ｎ０

有效序列数/条Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｒｅａｄｓ

５１４５５４８２６７４６４３６４６０９２５３０１４５２３５９

ＯＴＵ数量/个ＯＴＵ/Ｎｏ.

４８８５４１６６０５６９６２４５７７

０.９９８２±０.０００６ａ０.９９７９±０.００１０ａ０.９９７２±０.０００４ａ０.９９７８±０.０００６ａ０.９９７３±０.００１１ａ０.９９７４±０.００１１ａ

覆盖率Ｃｏｖｅｒａｇｅ

５５５.２５±２３.０１ｃ７５８.２５±１４.０８ａ７４８.２５±８.９６ａ

Ｃｈａｏ１

多样性指数Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎｄｅｘ

４.１８±０.１８ａｂ４.２０±０.１４ａｂ４.０７±０.１２ａｂ４.１８±０.０９ａｂ４.２８±０.０９ａ４.００±０.２１ｂＳｈａｎｎｏｎ

０.０５１２±０.００７３ａ０.０４９４±０.０１７３ａ０.０５４３±０.０１０８ａ０.０４７３±０.００８０ａ０.０５６５±０.００５５ａ０.０４４０±０.００４０ａ

Ｓｉｍｐｓｏｎ

６３２.７５±３０.５８ｂ６４９.２５±２２.９４ｂ６５２.２５±２５.３２ｂ

　　注:不同字母表示处理间差异显著(Ｐ<０.０５)ꎬ下同

Ｎｏｔｅ:Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｍｏｎｇｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ(Ｐ<０.０５).Ｔｈｅｓａｍｅｂｅｌｏｗ.

　　分析结果显示ꎬ不同施氮量对根际真菌群落物种组成造成了显著影响ꎮ其中子囊菌门的相对丰度最大ꎬ占总序列的７５.４８％~８３.９５％ꎻＮ１５０和８３.２４％ꎬ显著高于其它处理ꎮ同时ꎬ子囊菌门相对丰度的变化趋势可以分为低氮量(Ｎ０和Ｎ７５处理)、中氮量(Ｎ１５０和Ｎ２２５处理)和高氮量(Ｎ３００和Ｎ３７５处理)ꎬ中氮量子囊菌门相对丰度分别比低氮和高氮多８.０４％和９.５４％ꎮ这说明适量的氮肥用量可以增加子囊菌门的相对丰度ꎬ但过量施氮反而会使其受到抑制ꎮ各处理的担子菌门相对丰度分别为２.１０％、６.３１％、４.１９％、４.２３％、５.０３％和４.３１％ꎬＮ７５处理的担子菌相对丰度显著高于其它处理ꎬ施氮量超过７５ｋｇ􀅰ｈｍ时担子菌的相对丰度呈下降５.６２％、５.６２％、６.４５％、６.０９％、８.０９％和７.１５％ꎬ随施氮量的增加呈现递增的趋势ꎮ虽然随施氮量的增加促进了马铃薯根际子囊菌门和担子菌门的丰度ꎬ但过量施氮会抑制子囊菌和担子菌的生长ꎮ(相对丰度>１.０％)主要有粪壳菌纲(Ｓｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅ￣

如图２所示ꎬ土壤中真菌纲水平的优势物纲趋势ꎮ各处理Ｍｕｃｏｒｏｍｙｃｏｔａ相对丰度分别为

－２

Ｎ２２５处理的子囊菌门相对丰度分别为８３.９５％和

图１　连续施用不同氮量根际土壤真菌优势门群落组成Ｆｉｇ.１　ＣｏｎｔｉｎｕｏｕｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔＮｃｏｎｔｅｎｔｉｎｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｓｏｉｌｆｕｎｇｉｐｈｙｌｕｍｃｏｍｍｕｎｉｔｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ

ｔｅｓ)、座囊菌纲(Ｄｏｔｈｉｄｅｏｍｙｃｅｔｅｓ)、银耳菌纲(Ｔｒｅｍｅｌｌｏｍｙｃｅｔｅｓ)、锤舌菌纲(Ｌｅｏｔｉｏｍｙｃｅｔｅｓ)、散囊菌纲(Ｅｕｒｏｔｉｏｍｙｃｅｔｅｓ)、Ａｃｃｏｍｙｃｏｔａ￣ｎｏｒａｎｋ和Ｍｕ￣ｃｏｒｏｍｙｃｏｔａ￣ｎｏｒａｎｋ共７个优势纲ꎮ研究结果显示粪壳菌纲是子囊菌门的第一大优势类群ꎬ其相对丰度为４７.３６％~６４.１２％ꎬ在真菌纲中处于最优势菌纲ꎬ

５４

　　　　　　　　　　　　　　干旱地区农业研究　　　　　　　　　　　　　　　　第３８卷

属的丰度ꎮＡｌｔｅｒｎａｒｉａ(链格孢属)各处理的相对丰１.８０％ꎬＮ２２５处理的丰度最低ꎬＮ０和Ｎ３７５处理的据报道ꎬ镰刀菌属和链格孢属是引起植物破怀性病害的主要病原真菌[１７－１８]ꎬ以上结果说明过低或过高病原菌的增加对马铃薯生产不利ꎬ影响马铃薯的产量ꎬ造成经济收益下降ꎮ随施氮量的增加能产生脂肪酸等有机化合物的被孢霉属(Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ)也明显的施用氮肥会加剧镰刀属和链格孢属的相对丰度ꎬ度分别为１.８９％、１.３９％、１.１７％、０.７０％、１.０７％和链格孢属相对丰度别是Ｎ２２５处理的２.７０、２.５７倍ꎮ

随施氮量的增加呈现先增加后降低的趋势ꎬＮ１５０处理相对丰度达到最大ꎮ座囊菌纲的变化趋势与粪壳菌纲一致ꎬ相对丰度为７.１６％~１１.３６％ꎬＮ１５０处理相对丰度达到最大ꎮ银耳菌纲相对丰度可以占到所有真菌纲的３.１８％~１０.６３％ꎬＮ３００处理相对丰度均达到最大ꎬ结果显示施氮可以增加银耳菌纲的相对丰０.８９％~２.３７％ꎬＮ０处理高于其它处理ꎬ与Ｎ０相比各４６％和６１.８１％ꎬ说明随着施氮量的增加锤舌菌纲相对施氮处理分别降低了４７.７９％、６２.５６％、２９.７２％、５１.度ꎬ过量施氮则会受到抑制ꎮ锤舌菌纲的相对丰度为

丰度呈下降趋势ꎮ

图２　不同施氮量处理纲水平下土壤真菌优势群落组成Ｆｉｇ.２　ＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｏｆｌｅｖｅｌｓｃｌａｓｓｃｏｍｍｕｎｉｔｙｏｆＮａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ

ｏｆｓｏｉｌｆｕｎｇｉｕｎｄｅｒ

进一步从根际真菌属的角度分析不同施氮量对真菌群落结构的影响ꎬ结果如表２所示ꎮ供试土壤样品共检测出１３个优势属(相对丰度>１.０％)ꎮ其中Ｐｌｅｃｔｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ、镰刀菌属(Ｆｕｓａｒｉｕｍ)、梭孢壳属(Ｔｈｉｅｌａｖｉａ)、短梗蠕孢属(Ｔｒｉｃｈｏｃｌａｄｉｕｍ)、枝孢属(ａｃｌａｄｉｕｍＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ)、链格孢属)、Ｐａｒａｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍ(Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ)、、四枝孢菌属毛壳菌属(Ｃｈａｅｔｏ￣(Ｔｅｔｒ￣ｍｉｕｍ)、Ｌｅｃｔｅｒａ、枝顶孢属(Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ)属于子囊菌门ꎻ被孢霉属(Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ)属于Ｍｕｃｏｒｏｍｙｃｏｔａ门ꎻＶｉｓｈｎｉａｃｏｚｙｍａ属于担子菌门ꎮ

由表２可知ꎬ过量施氮显著增加Ｆｕｓａｒｉｕｍ(镰刀菌属)的相对丰度ꎬ且Ｎ３７５处理达到最大ꎬ其相对丰度为１３.５４％ꎬ显著高于Ｎ７５处理的相对丰度(８.３８％)ꎬＮ０和Ｎ０处理的镰刀菌属丰度相比处理的相对丰度为Ｎ７５９.６３％ꎮ处理多且６１.５８％Ｎ３７５及１４.９１％ꎬ结果表明低氮量和高氮量增加了镰刀菌

８.５５％、９.增加ꎬ其相７１％对和丰度８.２４％ꎬ分别为且５.Ｎ７５、Ｎ１５０、Ｎ２２５、Ｎ３００５９％、４.８１％、５.７９％、以及５２.９５％、７３.７０％Ｎ３７５处理比Ｎ０处理增加了－由于被孢霉属可以产１３.９５％、３.５８％、生有机酸ꎬ结果可能导致根际土壤酸化及４７.４１％ꎮꎮ

２.２　连续施用不同氮量对马铃薯土壤理化性质产

连续施用不同氮量对土壤理化性质的影响

生了显著影响ꎬ在大量的试验数据中ꎬ我们选取了硝态氮、铵态氮、ｐＨ值、有效磷和有机质以展开进一步的分析ꎬ详细结果如表３所示ꎮ分析结果显示ꎬ随着施氮量的增加土壤中ＮＯ－势ꎬ在Ｎ３７５处理ＮＯ－􀅰ｋｇ－１Ｎ３００和ꎬ并且显著高于其它处理３－Ｎ含量达到最大３－Ｎ含量呈现增加的趋Ｎ３７５处理分别是Ｎ０处理的ꎬＮ７５、Ｎ１５０、Ｎ２２５、ꎬ为２１.９０ｍｇ

１.９４、２.９８１.２４、１.７０、

ＮＨ＋明连续施用氮肥显著提高了土壤中的矿质氮含量４－Ｎ含量与倍和３.７６ＮＯ－

３－倍Ｎꎮ含量变化趋势一致随着施氮量的增加土壤中

ꎮ结果说

ꎮ由表３可知ꎬ随着施氮量的增加土壤ｐＨ值呈现下０.０８、０.１５降的趋势ꎬ和各施氮处理分别比０.１７个单位ꎮ土壤Ｎ０ｐＨ降低了值结果说明０.０６、０.０７、期大量的连续使用氮肥ꎬ已导致土壤ｐＨ值下降ꎬ长ꎮ

因此ꎬ在农田管理过程中不宜大量的施用氮肥ꎮ

由表３数据可以看出ꎬ施氮量对表层速效磷含量的变化有显著影响ꎮ随施氮量增加速效磷含量呈现降低的趋势ꎬＮ０处理速效磷含量显著高于其他１８.３１％、２６.１９％、２９.６８％处理ꎬ与Ｎ０相比其它施氮处理分别降低了７.３４％、随着施氮量的增加提高了马铃薯的生长发育以及和３２.１０％ꎮ可能的原因是其对磷素的需求ꎬ从土壤中吸收磷素也就更多ꎬ显著降低了速效磷含量ꎮ连续５ａ施用不同氮量的研究发现ꎬ与Ｎ０相比ꎬ本研究中随着施氮量的增加土壤的有机质的含量稍有提高ꎬ然而不同的施氮处理对土壤有机质的影响差异不显著ꎮ

第１期　　　　邓德雷等:连续施用不同氮量对半干旱地区马铃薯根际真菌群落结构的影响

表２　连续施用不同氮量处理属水平下根际真菌优势群落组成及相对丰度Ｔａｂｌｅ２　Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｒｅｌａｔｉｖｅａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｇｅｎｕｓｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｏｆｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｆｕｎｇｉ

ｕｎｄｅｒｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔＮａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｒａｔｅｓ

Ｎ０

１４.４４±８.２９ｂ９.６３±１.９６ａｂ８.０７±３.７０ｂ６.８４±４.０５ａ５.５９±１.０３ａｂ５.５０±４.４７ａ３.０９±１.４ａ２.８１±１.６５ａ１.８９±０.４３ａ１.６６±２.４６ａ１.６０±０.５６ａ１.４３±１.４７ａ１.２９±１.５０ａ

Ｎ７５

２１.７１±４.７８ａｂ８.３８±１.８８ｂ５.３７±４.２９ｂ４.９３±３.０１ａｂ４.８１±１.６５ｂ６.０４±２.３８ａ２.６２±１.５６ａ２.５１±２.２５ａ１.３９±０.５１ａｂｃ１.０１±０.２３ａ１.５±０.８４ａ７.１６±２.８９ａ１.１３±０.１７ａ

Ｎ１５０２９.９２±８.１１ａ９.３４±２.５８ａｂ８.３５±３.６４ｂ２.２６±１.０２ｂ５.７９±１.４４ａｂ７.２９±６.６４ａ２.２３±０.６９ａ１.８９±１.７３ａ１.１７±０.１０ｂｃｄ１.４２±０.３６ａ１.１１±０.２７ａ７.１１±４.３３ａ１.３７±０.６７ａ

Ｎ２２５１６.２１±２.５７ｂ８.５５±３.２６ｂ２０.９５±７.７４ａ２.９５±０.５１ａｂ８.５５±４.９９ａｂ４.３８±２.２２ａ２.４２±１.３５ａ２.０９±２.４８ａ０.７０±０.０３ｄ１.０６±０.６５ａ１.３６±０.２５ａ５.９９±７.６２ａ１.１０±０.３２ａ

５５

真菌ＦｕｎｇｉＰｌｅｃｔｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａＦｕｓａｒｉｕｍＴｈｉｅｌａｖｉａＴｒｉｃｈｏｃｌａｄｉｕｍＭｏｒｔｉｅｒｅｌｌａＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍＰａｒａｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍＴｅｔｒａｃｌａｄｉｕｍＡｌｔｅｒｎａｒｉａＶｉｓｈｎｉａｃｏｚｙｍａＣｈａｅｔｏｍｉｕｍＬｅｃｔｅｒａＡｃｒｅｍｏｎｉｕｍＮ３００１６.６１±２.６８ｂ９.００±３.３４ａｂ８.２９±６.７５ｂ３.６７±０.５８ａｂ９.７１±３.３７ａ７.５１±５.７８ａ１.４９±０.７０ａ１.４６±０.８０ａ１.０７±０.３１ｃｄ１.８６±１.８９ａ１.７２±０.７２ａ５.０９±３.０７ａ１.４８±０.８２ａＮ３７５１８.５５±５.４８ｂ１３.５４±３.５６ａ５.３０±１.５２ｂ３.９４±２.６８ａｂ８.２４±２.６８ａｂ５.１６±２.４５ａ１.８９±０.７６ａ１.８０±１.０３ａ１.８０±０.６９ａｂ１.８６±１.９９ａ３.６０±４.７０ａ３.５８±２.３１ａ１.２±０.２６ａ

表３　连续施用不同氮量对土壤理化性质的影响

ＮＯ－３－Ｎ含量ＮｉｔｒａｔｅＮｃｏｎｔｅｎｔ/(ｍｇ􀅰ｋｇ－１)５.８２±０.４２ｄ７.２３±０.６２ｄ９.８８±０.４７ｃ１１.２９±０.８９ｃ１７.３２±０.６６ｂ２１.９０±０.５９ａ

Ｔａｂｌｅ３　ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓＮａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｎｓｏｉｌｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ

ＮＨ＋４－Ｎ含量ＡｍｍｏｎｉｕｍＮｃｏｎｔｅｎｔ

/(ｍｇ􀅰ｋｇ－１)０.６１±０.０９ｄ０.６２±０.０８ｄ１.６０±０.０３ａｂ１.１４±０.２３ｃ１.２５±０.１０ｂｃ１.６９±０.０７ａ

ｐＨ８.２０±０.０３ａ８.１４±０.０１ａ８.１３±０.０１ａｂ８.１２±０.０３ａｂ８.０５±０.０２ｂｃ８.０３±０.０４ｃ

有机质ＳＯＭ/(ｇ􀅰ｋｇ－１)１７.０６±０.１３ａ１７.６１±０.１９ａ１８.０２±０.４０ａ１７.９８±０.０７ａ１７.２５±０.２３ａ１７.６４±０.５０ａ

处理ＴｒｅａｔｍｅｎｔＮ０Ｎ７５Ｎ１５０Ｎ２２５Ｎ３００Ｎ３７５

速效磷Ａｖａｉｌ.Ｐ/(ｍｇ􀅰ｋｇ－１)３２.９９±１.５２ａ３０.５７±１.３５ａｂ２６.９５±０.７ａｂｃ２４.３５±１.５３ｂｃ２３.２±５.１５ｂｃ２２.４±０.９４ｃ

２.３　真菌群落与土壤理化性质的冗余分析(ＲＤＡ)

为进一步了解环境因素对根际真菌群落结构

的影响ꎬ将真菌群落的变化与环境因子如有机质

－(ＳＯＭ)、ｐＨ值、速效磷(ＡＰ)、硝态氮(ＮＯ－３Ｎ)和铵－态氮(ＮＨ＋４Ｎ)之间进行了冗余分析(ＲＤＡ)ꎬ结果如图３所示ꎮ真菌群落结构差异在两个排序轴上的解＋

－－释率分别为８.１０％、５.２２％ꎬＮＯ－３Ｎ和ＮＨ４Ｎ呈正相关ꎬ而ｐＨ值和ＡＰ呈负相关关系ꎬ同时从图中可

－Ｎ指向了Ｎ１５０、Ｎ２２５、Ｎ３００和Ｎ３７５以看出ꎬＮＯ－３四个处理的真菌群落ꎮ判断排序的结果可以接受

－环境因子对物种分布的解释量的结果显示ꎬＮＯ－３Ｎ２.４　真菌群落结构的变化与土壤理化性质的相关　　为进一步确定影响真菌的优势菌群的环境因子ꎬ将部分土壤理化性质与根际真菌群落结构的分布进行Ｓｐｅａｒｍａｎ相关性分析ꎬ结果见表４、表５和表６ꎮ分析结果显示真菌群落结构在门水平、纲水平和属水平

－上与ＮＯ－３Ｎ含量具有显著相关性ꎬ与ＡＰ呈显著正相关的真菌优势菌群为链格孢属(Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ)ꎬ与ｐＨ

－和ＡＰ呈显著负相关同时与ＮＯ－３Ｎ含量呈显著正相关的真菌优势菌群有Ｍｕｃｏｒｏｍｙｃｏｔａ＿ｎｏｒａｎｋ和被孢霉属(Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ)ꎮ而粪壳菌纲(Ｓｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅｔｅｓ)和镰刀菌属(Ｆｕｓａｒｉｕｍ)仅与ＡＰ含量显著负相关ꎮ

性分析

是影响根际真菌群落变化的主要因子(Ｆ＝１.５７１ꎬＰ

＝０.０４３∗)ꎮ

＋

　　注:ＳＯＭꎬＡＰꎬＮＯ－３－ＮꎬＮＨ４－Ｎ分别代表土壤有机质ꎬ速效

磷ꎬ硝态氮含量ꎬ铵态氮含量ꎻＰ值通过９９９次置换检验得出ꎬ显著性标记为∗Ｐ<０.０５ꎻ∗∗Ｐ<０.０１ꎻ∗∗∗Ｐ<０.００１.ｍａｔｔｅｒꎬａｖａｉｌａｂｌｅｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓꎬｎｉｔｒａｔｅＮｃｏｎｔｅｎｔꎬａｍｍｏｎｉｕｍＮｃｏｎ￣ｔｅｎｔꎻＰｖａｌｕｅｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙ９９９ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｔｅｓｔｓ.∗Ｐ<０.０５ꎻ∗∗Ｐ<０.０１ꎻ∗∗∗Ｐ<０.００１.

Ｎｏｔｅ:ＳＯＭꎬＡＰꎬＮＯ３－ＮꎬａｎｄＮＨ＋４－Ｎｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｏｉｌｏｒｇａｎｉｃ

图３　土壤真菌与环境因子之间的ＲＤＡ分析

Ｆｉｇ.３　ＲＤＡａｎａｌｙｓｉｓｂｅｔｗｅｅｎｓｏｉｌｆｕｎｇｉａｎｄｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｆａｃｔｏｒｓ

２.５　连续施用不同氮量处理对马铃薯产量的影响

氮素是马铃薯产量形成的关键因子ꎬ通过

实际测产ꎬ马铃薯块茎产量结果如图４所示ꎮ分析结果显示ꎬＮ７５处理马铃薯产量最高ꎬ为２６４１０ｋｇ

５６

　　　　　　　　　　　　　　干旱地区农业研究　　　　　　　　　　　　　　　　第３８卷

－Ｎ和速效磷则没有显著的相关性ꎮ这说明ＮＯ－３－ＮＨ＋４Ｎ含量的增加以及ｐＨ值下降导致了马铃薯产量降低ꎮ

􀅰ｈｍ－２ꎬ与Ｎ７５相比ꎬＮ０、Ｎ１５０、Ｎ２２５、Ｎ３００、Ｎ３７５

２６.０５％和２５.３２％ꎮ结果说明ꎬ随施氮量的增加马铃薯块茎产量并不会随之升高ꎬ过量的施用氮肥反而

的块茎产量分别降低了７.５８％、３.４６％、２２.８１％、

会导致马铃薯产量下降ꎬ造成严重的氮肥资源浪费ꎮ

＋

－－通过对马铃薯产量与土壤的ＮＯ－３Ｎ、ＮＨ４Ｎ、ｐＨ、有机质和速效磷的相关性分析ꎬ结果如表７所－示ꎮ结果显示ꎬ马铃薯产量与ＮＯ－３Ｎ呈极显著负相－关关系(Ｐ<０.０１ꎬｒ＝－０.５７８)ꎬ与ＮＨ＋４Ｎ含量呈显著

负相关关系(Ｐ<０.０５ꎬｒ＝－０.４３７)ꎬ与土壤ｐＨ值呈３　讨　论

３.１　连续施用不同氮量对土壤理化性质和马铃薯　　本研究结果显示ꎬ随着施氮量的增加显著降低了土壤ｐＨ值ꎬ这主要是因为尿素施入土壤后ꎬ在脲酶作用下先将酰胺态氮水解生成ＮＨ＋４ꎬ然后在硝化

产量的影响

极显著正相关关系(Ｐ<０.０１ꎬｒ＝０.５５６)ꎬ与有机质和

表４　真菌优势菌群与土壤理化性质之间的

相关性分析(门水平)

ｓｏｉｌＴａｂｌｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ４　Ｓｐｅａｒｍａｎａｎｄ’ｓｆｕｎｇｉｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓａｂｕｎｄａｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎ

(ｐｈｙｌａ)

Ｆｕｎｇｉ

真菌ＮＯ－３－＋４－ＮＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａＡｓｃｏｍｙｃｏｔａ－ＮＮＨ０.１８３０.１８２ｐＨ

有机质ＳＯＭ

Ａｖａｉｌ.速效磷Ｐ

Ｍｕｃｏｒｏｍｙｃｏｔａ

０.２７９０.５０７∗

０.１９９－０.１５０　　注Ｎｏｔｅ:∗Ｐ<０.０５ꎻ∗∗０.１８９

－０.２９３０.２２５Ｐ<０.０１.－０.２２０下同０.４９４∗Ｔｈｅ－０.０５３ｓａｍｅ０.２６４ｂｅｌｏｗ.

－０.３８４０.１６０表５　真菌优势菌群与土壤理化性质之间

的相关性分析(纲水平)

Ｔａｂｌｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ５　Ｓｐｅａｒｍａｎａｎｄ’ｓｆｕｎｇｉｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓａｂｕｎｄａｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎ(ｃｌａｓｓ)

ｓｏｉｌＦｕｎｇｉ

真菌ＮＯ－３－Ｎ

ＮＨ＋４－Ｎ

－０.２８７

－ｐＨ

有机质ＳＯＭ－Ａｖａｉｌ.速效磷０.５１４Ｐ

Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ＿ｎｏｒａｎｋＤｏｔｈｉｄｅｏｍｙｃｅｔｅｓＳｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅｔｅｓ０.１９１－０.０５３０.４１０∗－０.００８０.３２６－０.２１７

０.０３８０.１７０∗Ｍｕｃｏｒｏｍｙｃｏｔａ＿

ｎｏｒａｎｋ

∗∗

０.２５３０.５５５０.３３７－０.２４９－０.１５１０.５２１－０.１００∗∗－０.１００Ｔｒｅｍｅｌｌｏｍｙｃｅｔｅｓ－０.２２８０.０１６

－０.４１００.２３７∗０.３２９－ＥｕｒｏｔｉｏｍｙｃｅｔｅｓＬｅｏｔｉｏｍｙｃｅｔｅｓ－－０.２８７０.０７５

－０.１８３－０.４８３０.２６９

∗０.０８１－０.０９２０.１３７

０.１３１０.２３００.０９７０.０６２

表６　真菌优势菌群与土壤理化性质

之间的相关性分析(属水平)

ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓＴａｂｌｅ６　Ｓｐｅａｒｍａｎａｎｄｔｏｐ’ｓ１０ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｒｅｌａｔｉｖｅｆｕｎｇｉｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓａｂｕｎｄａｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎ(ｇｅｎｕｓｓｏｉｌ

)

ＮＯ－３－ＮＮＨ＋４－ＮｐＨ

有机质

ＰｌｅｃｔｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａＦｕｎｇｉ

真菌Ｆｕｓａｒｉｕｍ０.１３１０.２１７０.３８２－ＳＯＭ

Ａｖａｉｌ.速效磷－ＴｒｉｃｈｏｃｌａｄｉｕｍＴｈｉｅｌａｖｉａ－０.０１２０.２０３－０.３６９－０.１７３０.２０００.０９９－０.３２４Ｐ０.４５７０.５５５∗∗－０.０４７０.１４８０.１７４－０.２７７０.０９０∗ＰａｒａｍｙｒｏｔｈｅｃｉｕｍＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍＭｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ－０.３３７－０.０２２０.１９０－０.１６２０.４１０Ｔｅｔｒａｃｌａｄｉｕｍ－０.０６５－０.３８３－０.０６１－０.５２１０.０２９∗∗－－０.０６９０.３１９－０.０１６０.０５８０.１８４∗－０.３８８Ｖｉｓｈｎｉａｃｏｚｙｍａ

Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ－０.２５１０.２１８０.１７０

－０.２４６０.０６４０.３０５－０.０５８０.１８１０.１６５０.０２８０.２７２

－０.１２９０.１２４－０.１１６０.０４２

－０.４２２０.０８３

∗作用下将ＮＨ＋施氮量的增加ꎬ使土壤４转化成ＮＯ－量的Ｈ＋ꎬ浅层土壤的硝态氮含量显著增加ｐＨ值下降３ꎬ而硝化过程中会产生大

[１９]ꎮ有研究表明ꎬ随着ꎬ

当施氮量高于－２０７ｋｇ􀅰ｈｍ－２时ꎬ随着施氮量增加土

壤ＮＯ基本一致３－Ｎꎬ的积累量显著增加[２０]

其原因是在硝化作用下氨态氮向硝态氮ꎬ这与本研究结果转化ꎬ使土壤中硝态氮含量大量富集ꎮＷａｎｇＱｉ等[２１]的研究表明ꎬ在有限的灌溉条件下ꎬ当施氮量

为２２１ｋｇ􀅰ｈｍ－２时表层土壤ＮＯ－施氮量增加至３－Ｎ积累量增加ꎬ当－３００ｋｇ􀅰ｈｍ－２时ꎬ０~２００ｃｍ壤ＮＯ我国在有限的土壤上投入大量的化肥３－Ｎ积累量显著增加ꎮ

土层中土

ꎬ与迅速增长的化肥施用量相比ꎬ作物产量并没有达到预期

２４的结果[２２]４０８ｋｇ􀅰ｈｍꎮ本－２研ꎬ然而究中ꎬ当施氮量为ꎬＮ０处理的７５马ｋｇ􀅰ｈｍ铃薯产－量２时为

ꎬ产量为２６４１０ｋｇ􀅰ｈｍ－２比ꎬＮ１５０、Ｎ２２５、Ｎ３００和Ｎ３７５ꎬ仅提高了产量分别降低了８.２０％ꎮ与３.４６％、

Ｎ７５相

图Ｆｉｇ.４　４　连续施用不同氮量对马铃薯块茎产量的影响Ｅｆｆｅｃｔｓｎｉｔｒｏｇｅｎｏｆ表７　ｒａｔｅｓｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓＳｐｅａｒｍａｎｏｎｐｏｔａｔｏａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ相关性分析ｔｕｂｅｒｙｉｅｌｄ

ｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔ

Ｔａｂｌｅ７　Ｓｐｅａｒｍａｎ’ｓｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ

项目产量Ｉｔｅｍ

ＮＯ－３－Ｎ

ＮＨ＋４－Ｎ

ｐＨ

有机质

Ｙｉｅｌｄ－０.５７８∗∗

－０.４３７∗０.５５６∗∗

－ＳＯＭ０.１５６

Ａｖａｉｌ.速效磷０.３０５

Ｐ第１期　　　　邓德雷等:连续施用不同氮量对半干旱地区马铃薯根际真菌群落结构的影响

５７

２２.８１％、２６.０５％和２５.３２％ꎬ随着施氮量的增加ꎬ马铃薯的产量并没有持续增加ꎮ对于马铃薯来讲ꎬ过量施氮和连作均能够引起土壤微生物群落结构的显著变化ꎬ使得土壤从抑病型向导病型的方向转变ꎬ土传病害滋生ꎬ作物长势变差并且大幅度降低

能力[３４]ꎮ众所周知ꎬＮ２Ｏ是一种潜在的温室气体ꎬ而且还能够破坏大气中的臭氧层[３５]ꎮ因此增加施氮量将会促进Ｓｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅｔｅｓ真菌微生物的繁殖ꎬ进一步促进Ｎ２Ｏ的产生ꎮＮ０处理土壤中锤舌菌纲

农作物的经济产量[２３]ꎮ因此ꎬ本研究结果表明ꎬ连续大量施氮不利于马铃薯高产ꎮ

３.２　连续施用不同氮量对马铃薯根际真菌Ａｌｐｈａ

多样性和群落结构的影响

　　本研究结果显示ꎬ过量施氮会降低马铃薯根际[２４](Ｌｅｏｔｉｏｍｙｃｅｔｅｓ)数量最高且显著高于其它施氮处理ꎬ与Ｎ０相比Ｎ７５~Ｎ３７５处理分别降低了４７.７９％、６２.５６％、２９.７２％、５１.４６％和６１.８１％ꎮ不同氮肥处理的锤舌菌纲类群中７５.３３％~８６.０８％的类群属于柔膜菌目(Ｈｅｌｏｔｉａｌｅｓ)ꎬ此类群真菌多数是根际真菌ꎬ能够为宿主植物提供养分ꎬ帮助其固定有机物等营真菌群落多样性ｏｏｒｎｈｕｙｓｅ[２５]ꎬ这与Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ和Ｖａｎｄｅｎｋ￣[２６]等的研究结果基本一致ꎮ但也有研究发现ꎬ长期施用氮肥会增加真菌群落的多样性ꎬ究其原因可能是因为在土壤营养物质增加时ꎬ丰富类群能利用有效碳源快速生长ꎬ因此可以在较高氮含量的环境下较好地生长繁殖ꎬ而贫瘠类群在环境中生长速度较低ꎬ吸收营养物质的能力较弱ꎬ因此在营养物质较高时ꎬ这些贫瘠类群与丰富类群相比竞争力较弱ꎬ不能良好生长繁殖[２７]ꎬ导致其数量下降ꎮ

Ｍｕｃｏｒｏｍｙｃｏｔａ马铃薯根际真菌群落结陈丹梅等[２９]、Ｈｅｄｌｕｎｄ和担子菌门构成构Ｋ等[３０]ꎬ主要由子囊菌门、在茶园土壤这与季凌飞等[２８]、植烟土、壤和南方典型水稻土壤的研究结果相一致ꎮ有研究发现Ｗａｎｇ等ꎬ[３２]子囊菌门的生长与氮素的含量有关[３１]研究发现ꎬ过高的氮素对子囊菌门的生ꎮ长有害ꎮ长期大量施氮可能会促使根际真菌群落多样性降低ꎬ群落结构主要朝子囊菌ꎬＭｕｃｏｒｏｍｙｃｏｔａ和担子菌三个方向演替(Ｎ１５０８３.９５％和Ｎ２２５)条件下ꎮ子本研究发现囊菌门的相ꎬ对适量施氮丰度施用氮肥可以增加子囊菌门的丰度和８３.２４％ꎬ显著高于其他处理ꎬ但当施氮量过ꎬ说明适量的为低或过高时不利于子囊菌的生长ｅｎｎｅ等ꎮＰａｕｎｇｆｏｏ－[３３]Ｌｏｎｈｉ￣在甘蔗根际和土壤中研究结果显示ꎬ与低氮处理相比ꎬ高氮肥条件下真菌群落子囊菌的相对丰度通常较高ꎬ而担子菌较低ꎬ增加氮肥会改变真菌群落的组成ꎬ并且通过促进病原真菌ꎬ可能对植物健康产生负面的影响ꎮ

本研究中子囊菌门的群落构成与Ｓｕｎ等[２６]在不同施肥模式的旱地土壤中的结果相一致ꎬ子囊菌门的优势种群是粪壳菌纲ｄａｒｉｏｍｙｃｅｔｅｓ(Ｓｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅｔｅｓ)ꎮ连续施用不同氮量可能会导致根际真菌群落组成的纲是马铃薯根际真菌的优势物种ꎬ表明Ｓｏｒ￣差异６４.１２％ꎬꎮＳｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅｔｅｓｃｒｅａｌｅｓ该类群中的肉座菌目纲的相对丰度为４７.３６％~ｍｙｃｅｔｅｓ)和散囊菌目等多数物种有研究被证实具有产生(Ｅｕｒｏｔｉａｌｅｓ)(和散囊菌纲Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅｓ)、Ｈｙｐｏ￣

(Ｅｕｒｏｔｉｏ￣Ｎ２Ｏ的

养物质[３６]氮量的增加而降低ꎬ本研究结果显示ꎮＤｅａｎ等ꎬ[３７]该类真菌的数目随施也曾报道过类似的结果ꎬ它们丰度的降低预示着高氮环境中真菌与作物的共生关系将会减弱ꎮ

在优势属水平细菌的分析结果中发现ꎬ长期连续施用氮肥过程中低氮量和高氮量显著增加了Ｆｕ￣ｓａｒｉｕｍ(镰刀菌属)的丰度ꎬＮ３７５处理和Ｎ０处理的镰刀菌属丰度相比Ｎ７５[５]处理多６１.５８％及１４.９１％ꎮ这个结果与孟品品等研究表明随着连作年限的增加、牛秀群等[１４]的研究结论相符ꎮ孟品品等[５]ꎬ马铃薯收获期根际土壤土传病害病原菌尖孢镰刀菌和茄病镰孢菌的数量明显增加ꎮ牛秀群等[１４]研究认为在１~３ａ连作中ꎬ随着连作年限的增加ꎬ马铃薯根茬中分离的镰刀菌数量呈上升趋势ꎮ据资料显示ꎬ马铃薯连作导致土壤微生物群落结构显著改变ꎬ病原菌成为优势种群ꎬ比如Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ和Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ.等土传病原真菌的数量显著增加ꎬ导致病害大面积发生ꎬ块茎产量降低[３８－４０]物区系是高产高效土壤的重要特征[４１]ꎬꎮ健康的微生会抑制土壤中有益真菌微生物群落的生长ꎮ因此ꎬ连续长期大量施氮可能同时具有抑制土传病害的作用ꎬ对土壤健康造成负面影响ꎮ结果表明ꎬ增加施氮量将会改变真菌群落的组成ꎬ并且通过促进致病真菌群落的丰度ꎬ可能对植物健康产生负面影响ꎮ

４　结本研究结果表明　论

ꎬ长期大量施氮使马铃薯根际硝态氮大量积累ꎬ且氮肥过量施用降低了土壤ｐＨ值ꎬ进而改变了根际真菌群落结构ꎬ过量施氮使真菌群落丰富度及多样性降低ꎬＲＤＡ及相关性分析结果表明硝态氮含量是影响真菌群落结构变化的主要理化因子ꎮ长期过量施氮增加了根际土壤真菌病原菌的相对丰度ꎬ可能会加剧植物病害以及危害土壤健康ꎬ同时过量施氮导致了马铃薯产量下降ꎮ因此ꎬ大量施氮不利于马铃薯产量的增加和根际土壤真菌生态系统的平衡ꎮ

５８

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