海峡药学孑Ｌ树脂富集纯化、硅胶柱层析及制备色谱纯化得到不同纯度 的科罗索酸样品。 用Ｍ，丌’法检测不同浓度科罗索酸对胃癌细胞ＢＧＣ８２３ 生长的影响。结果表明科罗索酸对ＢＧＣ８２３细胞的抑制作用 呈时间、剂量依赖性，且科罗索酸在０．０５ｍｇ・ｍＬ 浓度条件 ２０１４年第２６卷第８期 ２００７１０００８８０９．９，福州大学，２０１０．０５．１９． ［４］陈剑锋．从枇杷叶中分离制备科罗索酸的方法．中国，ＺＬ ２００７１０００９５５６．７，福州大学，２０１０．１０．２７． （５］陈剑锋．从植物中提制科罗索酸的方法．中国，ｚＬ ２００８１００７１０６４．５，福州大学，２０１２．０５．０９． 下对胃癌细胞具有较高的抑制率。 用ＭＴＴ法检测不同科罗索酸样品对胃癌细胞ＢＧＣ８２３ 生长的影响。结果表明分离得到不同科罗索酸样品对胃癌细 胞ＢＧＣ８２３的生长有不同程度的抑制作用，且其他组分（如山 楂酸和熊果酸）和科罗索酸在科罗索酸浓度为２Ｏ～４０ ｇ・ ｍＬ 时能产生较大的协同作用。 参考文献 ［６］陈龙胜，蔡群兴，忻畅等．正交试验优选枇杷叶中科罗索酸提取 工艺的研究，林产化学与工业，２００６，２６（３）：ｌ１Ｏ—ｌ１２． ［７］郭仕华，娄红详，贺艳丽．天然抗肿瘤药物的研究进展［Ｊ］．国外 医药・植物药分册，２００５。２０（５）：１９０．１９６． ［８］胡长平，陈龙胜，忻畅等．反相高效液相色谱法测定枇杷Ｉ１－ｒ中的 科罗索酸．色谱，２００６，２４（５）：４９２－４９４． 【９］Ｍｏｓｍａｎ Ｒａｐｉｄ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｇｒｏｗ ｔｈ ａｎｄ ｓｕｒ－ｖｉｖａｌ： Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｙｔｏ ｔｘｉｃｉｔｙ ａｓｓａｙｓ［Ｊ］．１ｍｍｕｎｏ ｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９８３，６５： ５５—６３． ［１］杨庆新，黄建安，刘仲华，等．枇杷叶中三萜酸的研究进展．食品 工业科技，２００８，１５（３）：２８２－２８５． ［２］陈剑锋，陈浩，郭养浩．一种枇杷叶三萜酸提取物的制备方法． 中国，ＺＬ ２００６１００６９４４１．２，福州大学，２０１１．０６．１５． ［３］陈剑锋，陈浩．从枇杷叶中分离纯化熊果酸的方法．中国，ＺＬ ［１０］Ｂｅｌｌａｍｙ ＷＴ．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｄｒｕｇ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ：ａｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ［Ｊ］．Ｄｒｕｇｓ，１９９２，４４：６８９－６９１． 天然牛黄的质量分析 梁永枢 ，黄颖喻 ，罗志雄 ，刘军民 （１．广东食品药品职业学院广州５１０５２０；２．广州中医药大学广州 ５１０００６） 摘要：目的对２批土耳其产牛黄与国产牛黄的质量进行分析比较，判断其是否符合我国牛黄用药标准。方法薄层色谱检识牛黄中的胆酸 及胆红素；采用ｕｖ比色法测定胆红素的含量；采用薄层色谱扫描法测定胆酸的含量。结果药典中的要求。结论该批土耳产牛黄可供药用，国产达不到入药标准。 ２批牛黄中舍胆红素与胆酸，土耳其产牛黄胆红 素与胆酸含量分别为５１．３２％、４．６３％，均高于现行版中国药典的标准；国产牛黄胆红素与胆酸的含量为５１．５６％、３．２２％，其中胆酸含量迭不到 关键词：天然牛黄；鉴别；含量测定；胆酸；胆红索 中图分类号：Ｒ２８２．７１文献标识码：Ａ文章编号：１００６－３７６５（２０１４）－０８－０４７９－００２８－０３ Ｔｈｅ Ｑｕａｌｉｔｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｎａｔｕｒａｌ Ｂｏｖｉｓ Ｃａｌｃｕｌｕｓ ＬＩＡＮＧ Ｙｏｎｇ—ｓｈｕ ，ＨＵＡＮＧ Ｙｉｎｇ－ｙｕ ，ＬＵＯ Ｚｈｉ－ｘｉｏｎｇ ，ＬＩＵ Ｊｕｎ－ｒｎｉｎ （１ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｖｏｃａ－ ｔｉｏｎａｌ Ｃｌｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０５２０，Ｃｈｉｎａ．２ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ＴＣＭ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０００６，Ｃｈｉｎａ） ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴⅣＥ Ｔｏ ａｎａｌｙｓｅ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ Ｂｏｖｉｓ Ｃａｌｃｕｌｕｓ ｆｒｏｍ Ｔｕｒｋｅｙ ａｎｄ Ｃｈｉｎａ．ＭＥＴＨＯＤＳ ＴＬＣ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｅ ｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ（ＣＡ）ａｎｄ ｂｉｌｉｍｂｉｎ ｉｎ Ｂｏｖｉｓ Ｃａｌｃｕｌｕｓ．Ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＵＶ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ．Ｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＴＬＣ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ．ＲＥＳＵＬＴＳ Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ＣＡ ａｎｄ ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｕ【ｒｋｉｓｈ ｓａｍｐｌｅ ｗｅｒｅ ５ １．３２％ａｎｄ ４．６３％．ａｎｄ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ山ｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏ． ｐｏｅｉａ ｏｆ Ｐｅｏｐｌｅ Ｓ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｃｈｉｎａ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ＣＡ ａｎｄ ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｄｏｍｅｓｔｉｃ ｓａｍｐｌｅ ｗｅｒｅ ３．２２％ａｎｄ ５ １．５６％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ Ｃａｌｃｕｌｕｓ Ｂｏｖｉｓ ｆｒｏｍ ｔｕｒｋｅｙ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｒｏｄ— ｕｃｔｓ． ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ：Ｎａｔｕｒａｌ Ｂｏｒｉｓ Ｃａｌｃｕｌｕｓ；Ｑｕａｌｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ；Ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ＣＡ；Ｂｉｌｉｒｕｂｉｎ 作者简介：梁永枢，男（１９７４一）。职称：副主任叶１药帅。主要从事中药质量标准研究。 通讯作者：刘军民，男（１９７３．０５一）。学历：博士。职称：教授。Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉｕｊｕｎｍｉｎ８１２＠１６３．ａｏｍ ・２８・ 海峡药学２．４胆酸的含量测定 ２．４．１对照品的制备：精密称取胆酸对照品，加入甲醇制成 ０．４８ｍｇ・ｍＬ 的溶液即可。 ２０１４年第２６卷第８期 （１ 与３ ），分别交叉点于同一硅胶Ｇ薄层板上，按２．４．３ 项下法展开，显色扫描，根据对照品与供试品扫描面积积分 值，以外标两点法计算样品含量，并计算其平均值（见表１）。 ３讨论 ２．４．２供试品的制备：精密称定本品细粉约０．２ｇ，放置于锥 形瓶中，精密加入甲醇５０ｍＬ，密塞，称定重量后超声处理 ３０ｍｉｎ，放冷后称定重量，再用甲醇补足减失重量，摇匀并过 滤。精密量取续滤液２５ｍＬ，蒸干后残渣加２０％氢氧化钠溶 ３．１该批土耳其产牛黄和国产牛黄中的胆红素及胆酸的薄 层色谱鉴定结果均呈阳性。含量测定结果表明，土耳其产天 然牛黄中胆红素及胆酸的含量分别为５１．３２％，４．６３％，明显 液１０ｍＬ，加热回流２ｈ，冷却后加稀盐酸１９ｍＬ，调节ｐＨ值至 酸性，用同一铺有少量无水硫酸钠的脱脂棉滤过的乙酸乙酯 萃取４次（２５ｍＬ，２５ｍＬ，２０ｍＬ，２０ｍＬ），滤液合并后回收溶剂至 优于现行版《中国药典》中的要求（胆红素含量不得少于 ３５．０％，胆酸含量不得少于４．０％），可供药用。国产牛黄胆 红素含量明显高于现行版药典中的标准，而胆酸的含量则达 干，取残渣加甲醇溶解，转移至１０ｍＬ量瓶中，加入甲醇至刻 度，振摇片刻后作为即可。 ２．４．３标准曲线的制备：精密吸取２．４．１项下对照品溶液 １ Ｌ，２ ，３ ，４ ，５ ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，用 异辛烷．乙酸乙酯．冰醋酸．甲酸（８：４：２：１）为展开剂展开至 １５ｅｍ，取出后晾干，喷３０％硫酸乙醇溶液后在１０５℃加热至斑 点清晰可见，然后按照《中国药典》（２０１０年版一部）附录ＶＩ 薄层色谱扫描法进行扫描（扫描波长：ｈＳ＝３８０ｎｍ，ＫＲ＝ ６５０ｎｍ）测量对照品吸光度，以胆酸的量（ ｇ）为横坐标，峰面 积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Ｙ＝１５８８．２＋ ８４７．８１ｘ，Ｒ ＝０．９９８６。结果表明，胆酸在０．４７２—２．３６ ｇ范 围与峰面积呈良好的线性关系。 ２．４．４精密度实验：取同一供试品溶液各２ ，在同一硅胶 Ｇ薄层板上分别点５个点。按２．５．３项下方法测定，其峰面 积的ＲＳＤ值为２．４９％。 ２．４．５稳定性实验：取２．５．４项下中的一个斑点，每隔３０ｍｉｎ 扫描１次，结果峰面积在３ｈ内基本稳定，ＲＳＤ为０．５８％。 ２．４．６加样回收率实验：称取土耳其天然牛黄样品０．１ｇ（已 知含量）５份，分别精密加入胆酸对照品溶液（４．７２ｍｇ・ ｍＬ ）１ｍＬ，照２．４．３项下测定条件测定。加样回收率平均值 为９８．１８％，ＲＳＤ值０．８７％，结果显示良好。 ２．４．７含量测定：照《中国药典》（２０１０年版一部）附录ⅥＢ 薄层色谱法测定。分别精密吸取供试品（２ ）和对照品溶液 表１天然牛黄中胆红素及胆酸的含量（ｎ＝３） ・３０・ 不到人药要求。 ３．２现行版药典对牛黄中胆酸的薄层色谱鉴别，供试品溶液 制备方法操作复杂，且过程损失较大，改用本方法制备操作简 单，损失较小。此外，由于胆红素很不稳定，见光容易分解，实 验过程中应尽量避光操作。 参考文献 【１］国家药典委员会编．《中华人民共和国药典）２０１０年版，一部［Ｓ］． 北京：中国医药科技出版社，２０１０，６５ ５． （２］郝满良．我国牛黄研究进展（Ｊ］．河北农业大学学报，１９９６，１７ （０２）：８３４７． ［３］孟祥学，孟金平，韩朝辉．中药及其伪品鉴别（Ｊ］．时珍国医国药， １９９９，１０（０３）：２０１２０１． ［４］梁明辉．牛黄真伪的鉴别（Ｊ］．内蒙古中医药，２０１０，４１４１． ［５］高爱英．中药牛黄的鉴别［Ｊ］．医学理论与实践。２００５，１８（１２）： １３９８—１３９８． ［６］刘世军，熊英．天然牛黄的真伪鉴别［Ｊ］．陕西中医学院学报， ２００９，１０（０３）：３１－３１． ［７］李晓红．牛黄及其伪品鉴别［Ｊ］．时珍国医国药，２００７，１８（１２）： ３１５０＿３Ｏ５Ｏ． ［８］柯荣勋．牛黄及其伪品鉴别［Ｊ］．江西中医药，２００７，３８（２９９）：５７— ５８． ， ［９］曹际松．牛黄的真伪鉴别［Ｊ］．现代中西医结合杂志，２００８，１７ （２４）：３７５９￣７６０． （１０］诸葛陇，潘云雪．徐荣芳，等．牛黄质量控制研究进展［Ｊ］．中国 药业，２０１３，２２（８）：１２６・１２８． （１１］刘君．薄层色谱法测定咽喉消炎丸中胆酸的含量测定［Ｊ］．中医 药临床杂志，２００８，２０（２）：１８８—１８９． ［１２］彭灿，吕蒙莹．李耕，等．牛黄及其代用品胆酸类物质分析方法 研究进展（Ｊ］．中草药，２０１３，４４（５）：６３２＆３６． ［１３］常香云．管黄与伪劣品牛肝管的鉴别［Ｊ］．光明中医，２０１１，２６ （９）：１９３２—１９３２． ［１４］夏晶，王伟毅．沙袜伟，等．局方至宝散中牛黄质量控制方法研 究［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２０１１，２１（８）：１８７２—１８７７． ［１５］彭灿，吕蒙莹．李耕，等．牛黄及其代用品胆酸类物质分析方法 研究进展［Ｊ］．中草药，２０１３，４４（５）：６３２￣３６．
