维普资讯 http://www.cqvip.com 安徽农业科学，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＡｎｈｕｉ Ａ ．Ｓｃｉ．２００７，３５（１７）：５０８０－５０８１，５１１６ 责任编辑金琼琼责任校对王淼 低能Ｎ＋离子・紫外线和６０Ｃｏ－２射线对黑曲霉产木聚糖酶的诱变效应 李市场．．２，古绍斌Ｌ２，姚建铭ｚ，余增亮ｚ （１．河南科技大学食品与生物工程学院，河南洛阳４７１００３；２．中国科学院离子束生物工程重点实验室，安徽合肥２３００３１） 摘要以木聚糖酶产生菌黑曲霉为试验菌株，比较了低能Ｎ＋离子、紫外线和 ｏ 射线对黑曲霉的剂量存活效应和诱变效果。结果 发现：Ｎ＋离子注入的存活曲线与紫外线、 ０Ｃｏ叫射线辐照不同，即紫外线和￣ｏ－－＇７射线照射黑曲霉的剂量存活曲线均是指数曲线，而 Ｎ＋离子注入呈复杂异常损伤的趋势，且３种辐射在诱变效应上有很大的差异。在相同死亡率条件下，紫外线诱变率低，但正变多于负 变，而 ０Ｃ０ 射线诱变率高，负变远远多于正变。适当剂量的Ｎ＋离子注入表现出诱变率高、正变率高及正变幅度大的特点。 关键词离子注入；黑曲霉；紫外线； ｏｃ０ 射线；异常损伤；木聚糖酶 中图分类号Ｑ５５ 文献标识码Ａ 文章编号Ｏ５１７—６６１１（２００７）１７—０５０８０—０２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｌｏｗ Ｅｎｅｒｇｙ Ｎ Ｉｏｎ．ＵＶ ａｎｄ￣０Ｃｏ－，，／ｏｎ Ｘｙｌａｎａｓｅ Ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ＬＩ Ｓｈｉ—ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＦｏｏｄ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｈｅｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆＳｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｕｏｙａｎｇ，Ｈｅｎａｎ ４７１００３） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆｌＯＷ ｅｎｅｒｇｙ Ｎ ｉｏｎ，ＵＶ ａｎｄ ℃０． ｒａｙ ｏｎ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｍｐａｃｔ ｏｆＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ啦 ｒ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｃｕｒｖｅ ｏｆ Ｎ ｉｏｎ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈ ｓｈｏｗｅｄ ａｂｎｏｒｍａｌ ｄａｍａｇｅ，ｗｅｒｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ＵＶ ａｎｄ ０ ・ｒａｙｓ，ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｂｏｔｈ ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘｅｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ Ｎ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ ｗａｓ ｍｏｒｅ ａｄｖａｎｔａｇｅｏｕｓ ｔｈａｎ ＵＶ ａｎｄ ０ ｒａｙｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｉｏｎ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ；Ａ ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ；ＵＶ； ℃０－ ｒａｙ；Ａｂｎｏｒｍａｌ ｄａｍａｇｅ；Ｘｙｌａｎａｓｅ 木聚糖酶在生物转化、食品和饲料工业方面的应用已较 析、加速系统、真空系统、靶室和测控系统等基本部分构成。 为成熟，在制浆造纸工业中的应用正在引起人们的高度重 １．３．３离子注入处理。取０．１ ｍｌ适宜浓度的单孢子悬液均匀 视。有许多关于木聚糖酶的液体和固体发酵研究的报道 。 涂布于无菌平皿上，无菌风干后进行注入。离子注入机是由 而诱变产木聚糖酶的菌株，提高产酶能力，选择有效的诱变 中国科学院离子束生物工程重点实验室研究制备的。在注入 措施，确定适当的诱变剂量是获得优良诱变效果的关键。低 机上，用不同的能量（５、１０、１５、２０、２５ ｋｅＶ）和不同的剂量 能离子注入作为一种新的有效的诱变手段，集能量沉积、动 『（１０、２０、４０、６０、８０、１００、１２０）ｘｌＯ１４ ｉｏｕ／ｃｍｑ对黑曲霉的孢子进 量传递、质量沉积和电荷中和与交换４种作用于一体［６－７］，在 行注入；注入靶室的真空密度为１０ Ｐａ。该试验把真空未接 农作物和微生物育种中都取得了显著的成绩１８－１￣。但是，关于 受离子注入的处理作为真空对照（设置放入真空靶室，以不 离子注入的剂量与诱变效果的关系，以及离子注入与经典的 经离子注入的样品为真空对照，以同样方法涂皿风干后不置 物理诱变措施相比有哪些特点尚未见有研究报道。笔者以菌 于真空下的样品为基本对照）。 株产木聚糖酶为指标，以黑曲霉Ａ３为出发菌株，考察并比较 １．３．４离子注入后的培养。离子注入后立即在超净工作台上 了Ｎ＋离子注入与紫外线诱变、 射线诱变的效果，并确定了 用新鲜无菌生理盐水洗脱孢子，进行适当的稀释，并涂布分 Ｎ＋７葛子注入黑曲霉Ａ３的适宜诱变剂量范围。 离平皿上，在２８℃培养数小时，等长出单菌落，计数并计算出 １材料与方法 相对存活率。存活率＝各处理计量的单菌落数／真空对照单菌 １．１菌株黑曲霉Ａ３ ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒＡ３），由合肥学院提供。 落数。各剂量处理下的存活情况为３次以上重复的平均值。 １．２培养工艺 １．３．５筛选。挑选单菌落转接斜面，根据上述培养条件，进 １．２．１斜面培养基。马铃薯浸出液２０％，琼脂２．０％，葡萄 行摇瓶培养。 糖２．０％。０．１ Ｐａ灭菌１５～２０ｍｉｎ。 １．３．６筛选标准。突变株酶活力大于对照５％的为正突变， １．２．２ 营养盐液。３．０ ｇ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４；２．０ ｇ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４；４．０ ｇ／Ｌ 小于５％的为负突变，在正负５％之间的为未突变。 ＮａＮＯ３；０．５ ｇ／Ｌ ＭｇＳ０４＂７ Ｈ２Ｏ；０．５ ｇ／Ｌ ＣａＣ１２；７．５ ｍｇ／Ｌ ＦｅＳＯ４＂Ｈ２０； １．４ ６０Ｃｏ－Ｔ射线辐照 ＦＪＸ－４３２型６０Ｃｏ 射线装置由安徽 ２．５ｍｇ／ＬＭｎＳＯ４＂Ｈ２０；３．０ｍｇ／ＬＣｏＣ１２；ｐＨ值５．５￣６．０。 １．２．３发酵液培养基。玉米芯６％、麸皮１．５％和营养盐等。 省农业科学院原子能研究所提供。分别吸取１．５ ｍｌ单孢子悬液 ２５０ ｍｌ三角烧瓶３０ ｍｌ装液量，０．１ Ｐａ灭菌２０ ｍｉｎ。摇瓶发 加入５ ｍｌ离心管中接受辐射。照射剂量分别为０、０．０５、０．１０、 酵时间为３ ｄ，培养温度２８℃。 ０．２０、０．４０、０．６０、０．８０、１．００、１．２０ｋＧｙ．剂量率为９００ ｒａｄ／ｍｉｎ。 １．３离子注入 １．５ Ｕｖ处理将单孢子悬液稀释至ｌ０ｓ个／ｍｌ，吸取１０ Ｉｎ１ １．３．１单孢子悬液的制备。将产孢子斜面上的孢子用适量的 孢子悬液放置于平皿中，用磁力搅拌器搅动。在距１５ ｗ紫 无菌生理盐水洗脱，置于预先灭菌的带玻璃珠的三角瓶中，在 外灯下约２０ ｃｍ处照射０～２５ ｍｉｎ。然后将照射过的孢子悬 摇床上振荡１０ ｍｉｎ后，直到成为分散的孢子为止，然后用灭菌 液均匀涂布于含脱氧胆酸钠的分离平板上，并在２８℃暗培 的脱脂棉纱滤去菌丝，并配成适宜浓度的孢子悬液。 养３６～４８ ｈ，计数统计，每个剂量做３个重复。 １．３．２离子束辐照装置。离子束辐照装置是由中国科学院等 １．６木聚糖酶活力的测定采用ＤＮＳ法，参照文献『５】。以木 离子所自行研制开发的。该装置由离子源、聚焦系统、质量分 糖为标准，１ ｍｉｎ形成１ Ｉｘｍｏｌ还原糖为１个酶活力单位（ＩＵｈｎ１）。 ２结果与分析 基金项目 国家“十五”攻关项目资助（２０ｏｌＢＡ３ｏ２Ｂｏ４）。 ２．１ ６０Ｃｏ－Ｔ射线辐照和紫外线照射对黑曲霉存活率和诱变 作者简介 李市场（１９７６－），男，河南沈丘人，在读博士，副教授，从事利 用离子束生物工程技术进行微生物育种的研究。 效果的影响由图Ｉ、２可见，紫外线和６０Ｃｏ 射线辐照的 收稿日期 ２０ｏ７一Ｏ２—２６ 存活曲线都呈现单方向下降趋势。紫外线照射的存活曲线， 维普资讯 http://www.cqvip.com ３５卷１７期 李市场等低能Ｎ＋离子・紫外线和 ￣Ｃｏ－￣／射线对黑曲霉产木聚糖酶的诱变效应 ５０８１ 随着照射时间的增加迅速下降，在照射３ ｍｉｎ后，存活率降 低较慢；而６０Ｃｏ 射线辐照时，低剂量下菌体死亡较少，但 见图３。从图３可以看出，它的存活曲线呈现出特异的双峰反常 存活曲线；这种特异的存活曲线与紫外线和 射线等其他射 线辐照生物有机体后呈现“肩型”或“直线型”的存活曲线相比 有明显不同。但是它的确能够反映离子束这种特异的诱变源 所具有的独特的诱变效果，说明离子束独特的诱变效应具有 普遍性，即出现反常损伤；这也进一步证实离子束在诱变机 用高剂量的射线进行照射时，存活率迅速下降，其存活曲线 与抛物线相近。 理上与其他的辐射诱变源相比确有差异，因为离子注入除了 具有能量沉积效应外，还有动量传递、质量沉积和电荷中和 与交换等效应存在［１１】。 辞 地 烛 紫外线照射时间／／ｍｉｎ 图１ 紫外线照射黑曲霉存活曲线 讣 地 烛 射线照射剂量／／ｋＧｙ 图２ 射线辐照黑曲霉存活曲线 表１表明，黑曲霉随着 射线处理剂量的增大，存活率 下降而菌株的总突变率却显著增加；与此同时，正突变率大 幅度降低，而负突变率却大幅度上升。紫外线照射４ ｍｉｎ 和用０．６ ｋＧｙ的 射线处理的存活率和总突变率相当；但是 射线处理的正突变效应小于负突变效应，而紫外处理的 正突变效应却大于负突变效应。虽然通过降低 射线的辐 照剂量可提高正突变率，但是仍然不能改变用 射线辐照 产生的正突变小于负突变这个事实。 表１ 紫外线照射和日Ｃ０一Ｙ辐照对黑曲霉 存活率和突变率的影响 ％ 紫外线＋ＬｉＣ１的复合诱变处理效果明显好于单一紫外 线处理。复合诱变不仅提高了黑曲霉的总突变率，而且还提 高了正突变率和正突变幅度。从表１还可以看出，随着紫外 线照射时间的延长，虽然菌体存活率下降，但是总突变率提 高，且正突变率大于负突变率。 ２．２离子注入对黑曲霉突变率和存活率的影响 以Ｎ＋为 注入离子，在１０ｋｅｖ注入能量和２．６ｘ１０１４ｉｏｎ／ｃｍ２中等注入剂 量率下，对注入剂量和各个剂量下的存活率进行了考察，结果 讣 地 烛 注入剂量（ｘ２，６ｘｌＯ ）／／ｉｏｎ／ｃｍ 图３在１０ ｋｅＶ能量不同剂量下的存活率 用（１０～１２０）ｘ２．６Ｘ１０１４ｉｏｎ／ｃｍ２等几组不同剂量，对黑曲 霉Ａ３进行注入，并对它们的突变率情况进行了统计，结果 见图４。由图４可见，在（１０、２０、６０）ｘ２．６ｘ１０“的注入剂量下， 正突变率要比负突变率高；在４０￣２．６ｘ１０“的剂量下负突变 率稍微比正突变率高一些；而在（８０、１００、１２０）￣２．６ｘ１０“的 剂量下，负突变率要远远高于正突变率。因此在选用注入剂 量时，既要考虑突变菌株的存活率，也要考虑正突变率。笔 者选用（１０、２０、４０、６０）ｘ２．６ｘ１０“这４个剂量作为常用的诱 变注入剂量。 １００ ８０ ６０ 许４０ ２０ ０ ２０ ４Ｊ０ ６０ ８０ １００ １２０ 离子注入剂量（ｘ２ ６ｘｌＯ ）／／ｉｏｒｇｃｍ 注：①各个剂量突变率是以随机挑取的１００～２００个的单菌落来统 计；②计算正负突变时以高出和低于对照组５％为标准。 图４ Ｎ＋注入剂量与Ａ３突变率间的关系 ３小结与讨论 （１）紫外线诱变黑曲霉存活曲线呈单方向下降趋势，且 随着照射时间的增加，菌体致死加剧，紫外线诱变后产生的 突变体容易产生回复突变，这可能与紫外线诱变的机制有关。 在实际诱变工作中，要采用某些措施避免以上的修复作用， 如加入某些物质（ＬｉＣ１），以提高突变率。 （２）６０Ｃ。叫射线穿过物质，使物质产生较大的电离度，能 （下转第５１１６页） 维普资讯 http://www.cqvip.com 安徽农业科学 ２００７生 此外，降雨量、湿度和台风等因素也会不同程度地影响 水稻后期的籽粒灌浆，从而影响稻米品质。 ３农艺措施 味品级高，口感好。 稀土肥对水稻品质也有一定的影响，铁、钴、钒、镍能明 显降低垩白率和垩白度，提高稻米外观品质。 ３．３灌溉水稻生育后期，长期淹灌与脱水过早，都不利 于稻米品质的提高。多数学者研究认为，在土壤含水量低或 ３．１播种期、移栽期与密度罗明研究认为［３１，早播可降低 整精米率，提高精米率、糊化温度、粗蛋白含量，并使胶稠度 变硬。播种过早，灌浆期易遇高温，降低了加工、外观、蒸煮 食用品质，提高了营养品质，而晚播则相反。在优质米生产 中，应根据对稻米的需求类型确定适宜播期，以取得事半功 倍的效果。栽培密度对稻米品质也有较大影响，基本苗过多 干旱条件下，糙米中的蛋白质含量较高，这就是干旱年份稻 米口感差的原因之一。 ３．４收获期及收获方法适时收获能提高稻米的品质，过 早或过晚收获都会降低稻米的加工品质。从蜡熟期起整精 会导致糙米率、精米率和整精米率下降，垩白粒率和垩白度 增加，直链淀粉含量和胶稠度升高，蛋白质含量下降，米质 米率和蛋白质含量随收获时间的推迟而提高，至完熟末期 达到最大值，之后又呈下降趋势；直链淀粉含量是随着收获 变差。稀植则有利于提高稻米的糙米率、精米率、整精米率 时间的推迟而渐增；米粒长度则相反，随着收获时间的推迟 和透明度 。 而降低。一般水稻适宜收获期在齐穗后：早籼稻２５～３０ ｄ，中 ３．２肥料肥料对品质的影响分２个方面，一是不同的肥 籼稻３０～３５ ｄ，晚籼稻３５～４０ ｄ，晚粳稻４０￣４５ 。收获方法 料，二是施肥时间。肥料的三大要素氮、磷、钾对稻米品质的 对稻米的加工品质有明显的影响，机械收割会使加工品质 影响依次是氮＞钾＞磷。 明显变劣。 氮肥是影响稻米品质的重要因素，适当施用氮肥除提 ３．５贮藏技术在温度和稻谷水分含量较高（１６％以上） 高产量外，还可以改善稻米的外观、营养和加工品质，提高 的情况下［３１，散仓贮存，谷堆将局部发热并霉变，若不及时翻 整精米率，减少垩白度，增加蛋白质含量，促进ＧＣ变硬。而 仓暴晒或通风降温、降湿，将使稻米品质严重下降。 且不同的施肥方式对稻米的影响也不同，一次性施氮比生育 参考文献 期均匀施氮能提高ＡＣ含量，降低蛋白质含量；分期施氮， ［１］环爱华．浅谈稻米品质及其影响因素【ＪＪ．中国稻米，２００１（４）：８－１０． 特别是抽穗期或齐穗期追施氮肥对提高稻米蛋白质含量和 ［２］倪善君．影响稻米品质的因素与对策【ＪＪ．垦殖与稻作，２ｏｏｏ（１）：４７－４９． ［３］罗明．稻米品质及其影响因素的分析【Ｊ］．吉林农业科学，２００５，３０（１）： 降低ＡＣ含量效果明显。 ｌ８－２０． 增施钾肥能提高整精米率和蛋白质含量，降低垩白率 耿立清．植株农艺性状与稻米品质关系的研究进展ｆＪ］．中国稻米， 和垩白度，尤其当钾肥和氮肥配合施用时，改善稻米品质的 ２００５（１）：１２—１３． ｆ５］刘喜珍．影响稻米品质的因素ｆＪ】．北京农业科学，２ｏｏｏ（１８）：２０—２３． 效果会更佳。适当增施有机肥，稻米的氨基酸含量增加，食 －＋－＋－＋－＋－＋－＋－＋－＋－＋－＋－＋ （上接第５０８１页） 酵条件研究 ．工业微生物，２ｏ０２，３２（２）：３０—３３． 更有效地导致基因突变和染色体畸变。一般常用的剂量掌 【４Ｊ刘明启，孙建义，翁晓燕，等．重组毕赤酵母产木聚糖酶条件的优化 ．握在菌体死亡率为９０．０％～９９．９％为宜，但它引起的突变一 浙江大学学报，２００６，３２（２）：２２２—２２６． ｆ５】ＭＩＮ ＷＵ，ＳＨＩ ＣＨＡＮＧ Ｕ，ＪＪＡＮ ＭＩＮＧ ＹＡＰ，ｅｔ ａ１．Ｍｕｔａｎｔ ｏｆ ａ 般为正突变小于负突变。 ｘｙｌａｎａｓｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ａｓｐｅｒｇｉ／／ｕｓ ｎ／ｇｅｒ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｓｔａｔｅ （３）离子注入技术是一种新型的诱变技术。它与生物体 ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｙ ｌｏｗ ｅｎｅｒｇｙ ｉｏｎ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ【ＪＪ．Ｗ０ｄｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００５，２１（５）：１０４５—１０４９． 作用，不仅有能量沉积，而且同时有质量沉积，即注入的离子 ［６］ｚＥＮＧ－ｕＡＮＧ Ｙｕ．Ｉｏｎ ｂｅａｍ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍｏｄｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｆＪ］． 与生物大分子结合成新的分子。它的致死曲线与紫外照射和 ＩＥＥＥ Ｔｍｎｓａｃｔｉｏｎ ｏｎ Ｐｌａｓｍａ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０ｏ０，２８（１）：ｌ２８－１３２． 鲫Ｃｏ 射线辐照都不同，另外它还具有损伤低、突变频率高、 ［７］ＺＥＮＧＬＩＮＡＮＧ ＹＵ．Ｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｉｏｎ ｂｅａｍ ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｉｎ ＣｈｉｎａＩＪ］．Ｓｏｌｉｄ Ｓｔａｔｅ Ｐｈｅｎｏｍｅｎａ。２００５，１０７：２５—３０． 突变谱广、性状稳定等特点，这些都表明它与其他常规诱变 ｆ８】Ｕ ＳＨＩＣＨＡＮ Ｇ’ＷＵ ＭＩＮ，ＹＡＯ ＪＩＡＮＭＩＮＧ，ｅｔ ａ１．Ｍｕｔａｔｉｏｎ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ 及化学诱变过程有明显的差异。可以根据需要通过可控制离 ｉｎ ｘｙｌａｎａｓｅ－ｐｒｏｄｕｃｔｉｎｇ ｓｔｒａｉｎｓ ｂｙ ｉｏｎ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ【ＪＪ．Ｐｌａｓｍａ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ ｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００５，７（１）：２６９７—２７００． 子的种类、注入参数、注入离子的能量、动量及电荷进行组 ［９］ＬＩＵ Ｊ，ＬＩＵ Ｍ，ＷＡＮＧ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｚｅａｅ 合，为生物体的诱变提供了新的途径。 ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ａ ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｍｕｔａｎｔ ｂｙ 参考文献 ｉｏｎ ｂｅａｍ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ叨．Ａｐｐｌ ＭｉｃｒｏｂｉｏＩ ＢｉｏｔｅｃｈｎｏＩ，２ｏ０５，Ｉ６９：２２３— ２２８． ［１］彭园花，卢红梅，曾祥钦．高产木聚糖酶菌株的诱变筛选及其产酶性 『ｌ０】ＷＵ ＹＵＥ ＪＩＮ，ＺＨＡＮＧ ＹＩＮＧ，ＷＵ ＪＩＮＧ ＤＥ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ 质Ⅲ．酿酒科技，２０Ｏ６（１０）：３４—３６． ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｔａｎｔ ｃｒｏｓｓｉｎｇ ｒｉｃｅ ｂｙ ｉｏｎ ｂｅａｍ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｆＪ］． 【２］孔健，马贵荣，高培基．黑曲霉固态发酵淀粉渣生产木聚糖酶 食 Ｐｌａｓｍａ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。２ｏ０５，７（２）：２７８５—２７８８． 品与发酵工业，１９９２（３）：１３—１６． 『ｌ ｌ１ ＹＵ ＺＥＮＧＬＩＡＮＧ．Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ｉｏｎ ｂｅａｍ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ［Ｍ］．Ｎｅｗ ［３］李蕤，程海燕，张洁，等．产碱性木聚糖酶芽孢杆菌Ｈｓ Ｉ的筛选及发 Ｙｏｒｋ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｐｒｅｓｓ，２００６．
