专题二 课题3
一、选择题
1．分离土壤中纤维素分解菌用到的方法是( B )
①稀释倒平板法 ②涂布平板法 ③单细胞挑取法 ④选择培养分离 A．①② C．②③
B．②③④ D．①③④
[[解析]] 分离土壤中纤维素分解菌，先进行选择培养，增大纤维素分解菌的浓度，梯度稀释、涂布平板、培养，单细胞挑取以获得纯培养。稀释倒平板法是先进行梯度稀释，然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合、摇匀后，倒入灭菌的培养皿中，制成可能含菌的琼脂平板，保温一定时间即可出现菌落。涂布平板法是先将熔化的培养基倒入无菌培养皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品液涂在整个平板表面，经培养后形成单个的菌落。
2．刚果红染色时，加入刚果红应在( C )
①制备培养基时 ②梯度稀释时 ③倒平板时 ④涂布时 ⑤长出菌落时 A．①③ C．③⑤
B．②⑤ D．④⑤
3．在加入刚果红的培养基中出现透明圈的菌落是( C ) A．分解尿素的细菌 C．分解纤维素的细菌
B．硝化细菌 D．乳酸菌
[[解析]] 分解纤维素的细菌能将纤维素分解，刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
4．在对纤维素分解菌进行选择培养时用液体培养基的目的是( A ) A．用液体培养基可获得大量菌体 B．纤维素分解菌适宜在液体培养基上生长 C．用液体培养基可以充分利用培养基中营养物质 D．用液体培养基可获得高纯度的纤维素分解菌
[[解析]] 液体培养基与固体培养基相比，其中的营养物质更易被微生物利用。
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5．在对纤维素分解菌进行选择培养时，培养基中的酵母膏的主要作用是( B ) A．提供碳源 C．提供维生素
B．提供氮源 D．凝固剂
[[解析]] 酵母膏可以为纤维素分解菌提供氮源。 6．下列关于纤维素酶的叙述，错误的是( A ) A．纤维素酶只有一种，只能将纤维素分解为葡萄糖
B．纤维素酶是一种复合酶，至少包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶三种 C．纤维素可被纤维素酶水解成葡萄糖，为微生物提供营养物质
D．分解纤维素的细菌、真菌和放线菌，都是通过产生纤维素酶来分解纤维素的 7．纤维素、纤维素酶和控制纤维素酶合成的基因，其基本组成单位依次是( B ) A．葡萄糖、葡萄糖、氨基酸 B．葡萄糖、氨基酸、脱氧核苷酸 C．氨基酸、脱氧核苷酸、脱氧核苷酸 D．淀粉、蛋白质、核酸
[[解析]] 纤维素是多糖，其基本组成单位是葡萄糖；纤维素酶是蛋白质，其基本组成单位是氨基酸；基因是DNA片段，其基本组成单位是脱氧核苷酸。
8．下列生物能分解纤维素的是( C ) ①人 ②兔 ③牛 ④蘑菇 ⑤纤维素分解菌 A．①②③④⑤ C．②③④⑤
B．②③⑤ D．③⑤
9．下列有关刚果红染色法的叙述，不正确的是( C ) A．刚果红可以在倒平板时加入 B．刚果红可以在菌落形成后加入 C．在倒平板时加入刚果红不需要灭菌 D．在菌落形成后加入刚果红不需要灭菌
[[解析]] 常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。若在倒平板时加入，刚果红要进行灭菌，以防杂菌侵入影响菌落的形成。
10．从土壤中筛选纤维素分解菌的实验设计正确的是( B ) A．土壤取样→梯度稀释→稀释涂布平板→发酵培养 B．土壤取样→选择培养→稀释涂布平板→挑选菌落 C．土壤取样→梯度稀释→选择培养→挑选菌落
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D．土壤取样→梯度稀释→稀释涂布平板→选择培养→挑选菌落
[[解析]] 正确的实验设计一般是：土壤取样→选择培养(此步是否需要，应根据样品中的菌株数量的多少来确定)→梯度稀释→将菌悬液涂布到有特定选择作用的培养基上→挑选菌落。
11．选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为( B )
A．伊红美蓝培养基、含青霉素培养基 B．含青霉素培养基、含氨的无机培养基 C．含氨的无机培养基、含青霉素培养基 D．含青霉素培养基、伊红美蓝培养基
[[解析]] 酵母菌是真菌，通常可以用含青霉素的培养基进行选择培养，因为青霉素抑制细菌生长，但不抑制真菌生长。硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸和硝酸所释放的能量，把无机物转变为有机物以维持自身生命活动，利用含氨的无机培养基可进行选择培养。
12．在将样品稀释涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上之前一般先进行选择培养，其主要目的是( C )
A．完全除去其他微生物 C．增加纤维素分解菌的浓度
B．没有意义，去掉这一步更好 D．使纤维素分解菌充分长大
[[解析]] 纤维素分解菌如果在所采集的土样中含量少，稀释涂布到鉴别培养基上后形成的菌落数少，不利于挑选所需菌落，通过选择培养可以增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。
二、非选择题
13．(2018·山师大附中模拟)土壤中微生物种类繁多，功能强大，比如：最显著的作用是分解有机质；把植物的残枝败叶和施入土壤中的有机肥料分解，改善土壤的结构和供给植物吸收。若利用其中某种微生物，则需要进行菌种的分离和纯化。以下示意图是从土壤中分离出分解尿素的微生物流程图。回答下列问题：
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(1)②过程所使用的接种方法是__稀释涂布平板法__。用该接种方法对微生物进行计数时，通常选用菌落数在__30～300__个的平板进行计数，统计的菌落数往往比活菌的实际数目__低__。
(2)从用途上来说，1号培养基属于__选择__培养基，制备该培养基的步骤是：计算→称量→溶化→__灭菌__→倒平板。
(3)该实验中酶活性鉴定需鉴定__脲__酶的活性，可以加入__酚红__指示剂，如果指示剂变为__红__色，说明该酶的检测为阳性。
[[解析]] (1)在分离微生物时，①是将土壤样液连续稀释，②为采用稀释涂布平板法进行分离，为减小实验误差，实际操作时通常选用菌落数在30～300之间适于计数的平板。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是1个菌落，因此统计的菌落数往往偏低。
(2)此图是用于分离分解尿素的微生物的，因此1号培养基属于选择培养基，制备的步骤是计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。
(3)该实验的目的是从土壤中分离出分解尿素的微生物，该微生物能产生脲酶，将尿素生成氨和CO2，因此需鉴定脲酶的活性，生成的氨遇酚红指示剂后变红色。
14．(2018·湖北调研)欲从腐乳中分离筛选出产蛋白酶活力高的毛霉菌株，设计了如下实验流程：
①挑取腐乳样品上的菌丝，制成孢子悬浮液→④测定蛋白酶活力
回答下列问题：
(1)毛霉属于__真__核生物。在腐乳制作中，主要利用毛霉等微生物产生的__蛋白酶和脂肪__酶将豆腐中的蛋白质和脂肪分解为小分子物质。
(2)步骤②进行涂布前，需将孢子悬浮液进行梯度稀释，进行梯度稀释的目的是__增加悬浮液的稀释度，涂布培养能分离到单菌落__。若进行10倍稀释，一般吸取1mL悬浮液注入__9mL无菌水__中，混匀。
(3)孟加拉红培养基常用于分离霉菌及酵母菌，在孟加拉红培养基中加入氯霉素可以抑制细菌的生长。从功能上看，孟加拉红培养基属于__选择__培养基。
(4)毛霉产生的酶能将酪蛋白分解而产生透明圈，在酪蛋白培养基中筛选到三个单菌落甲、乙、丙，其菌落直径分别为3．2cm、2．8cm、2．9cm，其菌落与透明圈一起的直径分别为3．7cm、3．5cm、3．3cm。应选择菌落__乙__作为产蛋白酶活力高的毛霉候选菌。
[[解析]] (1)毛霉属于真核生物。在腐乳制作中，主要利用毛霉等微生物产生的蛋白酶和脂肪酶将豆腐中的蛋白质和脂肪分解为小分子物质。(2)将孢子悬浮液进行梯度稀释的目的是增加悬
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→
②涂布于孟加拉红
培养基，进行分离
→
③取菌落接种于酪蛋白培养基，进行筛选
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浮液的稀释度，涂布培养能分离到单菌落。若进行10倍稀释，一般吸取1mL悬浮液注入9mL无菌水中，混匀。(3)孟加拉红培养基常用于分离霉菌及酵母菌，据此可知：从功能上看，孟加拉红培养基属于选择培养基。(4)毛霉产生的酶能将酪蛋白分解而产生透明圈，透明圈与菌落直径的比值反映了毛霉菌株产蛋白酶活力的能力，因此应挑选透明圈与菌落直径比值最大的菌体。依题意可知：筛选到的三个单菌落甲、乙、丙的透明圈与菌落直径的比值最大的为乙，所以应选择菌落乙作为产蛋白酶活力高的毛霉候选菌。
15．(2018·康杰中学高二期中)请回答下列问题：
(1)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表)：
培养基甲 培养基乙 酵母膏 ＋ ＋ 无机盐 ＋ ＋ 淀粉 ＋ ＋ 纤维素粉 ＋ － 琼脂 － ＋ CR溶液 ＋ ＋ 水 ＋ ＋ 注：“＋”表示有，“－”表示无。 据表判断，培养基甲__不能__(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是__液体培养基不能用于分离单菌落__；培养基乙__不能__(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是__乙培养基中没有纤维素，不会形成CR－纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌__。
(2)为测定培养液中某细菌数量，某小组同学抽取1mL培养液经10倍的梯度稀释后进行接种培养，每个培养基上接种量为0．1mL，随后对每个培养基中出现的菌落进行计数(结果如下)。培养液中菌体数目约为__3．9×107__个/mL。
稀释次数 培养基编号 菌落数目 1 263 4 2 321 3 345 1 38 5 2 4 3 40 1 6 6 2 2 3 8 [[解析]] 本题考查微生物的分离与计数，考查对纤维素分解菌分离、鉴定、计数原理的理解，解答此题，可根据纤维素分解菌的分离、鉴定原理判断甲、乙两个培养基是否符合实验要求，根据平板计数原则计算培养液中菌体数目。
(1)据表判断，培养基甲不含有琼脂，为液体培养基，不能形成菌落，不能用于分离和鉴别纤维素分解菌；培养基乙没有纤维素，虽然含有CR，但不会形成CR－纤维素红色复合物，即使含有纤维素分解菌也不会出现透明圈，不能根据菌落特征分离和鉴别纤维素分解菌。
(2)进行菌落计数时应选择菌落数在30～300之间的平板进行计数，据表可知稀释4次后接种
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的培养基只有1号平板符合要求，稀释5次后接种的平板1号、4号平板符合要求，因此应选择稀释5次后接种的平板进行计数，平板上平均菌落数为(38＋40)/2＝39个，则培养液中菌体数目约为39÷0．1×105＝3．9×107个/mL。
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