菌种保存的实验报告

一、实验目的

为保持细菌原有的性状和活力，通过人为方法提供一定的条件，使细菌在低温、干燥、缺氧的环境中，生长受到抑制、新陈代谢处于最低范围内，生命活动基本处于休眠状态，从而达到保存菌种的目的。保存菌种的方法有很多，如斜面保存法、液体石蜡法、干燥保存法、液氮法、冷冻真空干燥法等。这里仅介绍斜面保存法。 二、讲解要点

1、斜面保存法 ，亦称传代培养保藏法，是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后，于4～6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。

2、实验内容：无菌斜面制作、斜面接种；培养方法。 3、操作要点

1) 无菌操作要点

2) 斜面制作的基本操作手法 3) 火焰灼烧范围、避免烫伤菌体 4) 贴标、分区 5）接种要点 6) 培养要点 三、实验材料仪器 1. 细菌培养平板 2. 斜面培养基

3. 酒精灯、移菌环、无菌操作台、高压灭菌锅等。 四、实验步骤 1 培养基制备 1.1 器皿准备

培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。 1.2 溶解培养基配料

先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解，最后加足水量，搅拌均匀。 1.3 调pH值

配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1mol/L盐酸）或稀碱(10%

氢氧化钠)调pH值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。 1.4 加凝固剂

配制固体培养基时需加凝固剂，如琼脂、明胶等。将凝固剂加入液体培养基中，加热并不断搅拌至融解，再补足所蒸发水分。 1.5 过滤分装

在二层纱布中间夹入脱脂棉，将配好的培养基趁热过滤并分装。斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培养基分装量以试管高度的二分之一为宜。分装过程中勿使培养基沾污管口，以免弄湿棉塞造成污染。 1.6 包扎标记

将试管加棉塞，外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名称及配制日期。 1.7 灭菌

根据要求将培养基灭菌，通常蒸汽灭菌为121℃，15～20min。 1.8 斜面摆放

灭菌后及时摆放斜面，斜面长度不超过试管管长的二分之一为宜。 1.9 无菌检查

将灭菌的培养基放入培养箱中作无菌检验，通常30℃培养1～3天。无菌检查合格后将其保存于4℃下备用。 2接种 2.1 斜面接种

把菌种点接在斜面中部偏下方处、从斜面自下而上划一直线或者从斜面底部自下而上划“之”字形线。 五、思考题

1．常用的菌种保存方法有几种？ 2、菌种保存实验注意事项有哪些？